Technika przeszczepu nerki u myszy

Celem tego manuskryptu jest opisanie kroków wymaganych do przeprowadzenia przeszczepu nerki u myszy, zwracając szczególną uwagę na szczegóły zespolenia tętniczego.

Ogólnym celem tej procedury jest zademonstrowanie zmodyfikowanej techniki zespolenia tętniczego do przeszczepów nerek u myszy. Osiąga się to poprzez najpierw staranne wypreparowanie odpowiednich naczyń w dawcy. Drugim krokiem jest stworzenie mankietu pięty i palców aorty brzusznej dawcy przylegającego do tętnicy nerkowej.

Następnie ten mankiet pięty i palców służy do utworzenia zespolenia tętniczego u biorcy. Ostatecznie technika ta powinna skutkować bardzo niskimi przypadkami zakrzepicy tętniczej. Ten film pokaże Ci, jak stworzyć mankiet tętniczy na pięcie i palcach, aby ułatwić przeszczepy nerek w jamie ustnej.

Główną zaletą tej techniki metod opornych jest to, że droga przepływu krwi z aorty biorcy do tętnicy nerkowej dawcy jest wyprostowana, co powoduje zmniejszenie aktywacji płytek krwi i powstawanie zakrzepicy Stosując sterylną technikę pod mikroskopem operacyjnym, pobrać nerkę dawcy, wykonać prawidłowo. Czas zbiorów wyniesie od 15 do 20 minut. Usuń futro, a następnie unieruchomij zwierzę.

Przygotuj miejsce operacji, myjąc skórę jodowidonem powidonu, udrapuj mysz i rozpocznij operację od dwucentymetrowego nacięcia brzucha w linii środkowej. Cofnij jelito na klatkę piersiową i zawiń je w wilgotną gazę. Utrzymuj gazę wilgotną przez cały czas trwania zabiegu.

Teraz znajdź wielkie naczynia brzuszne i zmobilizuj je. Wszelkie gałęzie lędźwiowe powinny być kauteryzowane lub podwiązane nylonowym szwem 10 zero. Następnie tępo wypreparuj dwumilimetrowy podział żyły głównej dolnej i aorty dystalnej do lewego naczynia nerkowego.

Następnie podwiąż i podziel wszelkie małe gałęzie tętnicze i żylne, które przyczepiają się do naczynia nerkowego. Kontynuuj rozwarstwienie, aby oddzielić żyłę nerkową od tętnicy nerkowej, umożliwiając w ten sposób późniejsze utworzenie łaty Carrolla na bliższym końcu żyły nerkowej, łatka ta zostanie wykorzystana do utworzenia zespolenia żylnego. Następnie polub go i podziel lewe naczynia nadnerczy, aby uzyskać dostęp do aorty nadnerkowej.

Po uzyskaniu dostępu zapętl sześć zero jedwabiu. Szew wokół aorty nadnerkowej do późniejszego wykorzystania. Teraz zmobilizuj naczynia nerkowe i moczowód z otaczającej powięzi.

Obróć nerkę w prawo po tylnej stronie, podwiąż i podziel wszystkie gałęzie naczyniowe, skupiając się na moczowodzie. Ostrożnie uwolnij moczowód z otaczającej powięzi. Nie należy naruszać wnęki nerkowej i chronić naczynia eteryczne.

Następnie podziel moczowód na poziomie przewodu twardego. Nerka może być teraz wyleczona. Najpierw powoli wstrzyknij 300 jednostek heparyny do dystalnego IVC, aby przeprowadzić heparynę dawcy.

Po drugie, zawiąż sześć szwów zerowych wokół nadnerkowego aa. Następnie wykonaj perfuzję lewej nerki z aorty brzusznej, wstrzykując 0,8 mililitra roztworu soli fizjologicznej heparyny w ilości 100 jednostek na mililitr. Po perfuzji natychmiast utwórz żylny plaster carylowy, unikając w ten sposób cofania się do nerki.

Cofnij żyłę nerkową w kierunku nerki, aby odsłonić AA i tętnicę nerkową. Teraz podziel aortę przylegającą do tętnicy nerkowej. Zrób piętę i mankiet.

Następnie, jeśli wymagane jest zero minut zimnego niedokrwienia, przenieś odzyskaną nerkę do przygotowanego biorcy. Alternatywnie, przenieś narządy do komory magazynowej o temperaturze czterech stopni Celsjusza, a następnie poddaj dawców eutanazji, jak wskazano w protokole tekstowym. Ta procedura zajmie od 35 do 45 minut, tak jak w przypadku znieczulenia dawcy.

W razie potrzeby biorca powinien również uzupełnić bolus początkowy. Zaopatrz biorcę w krem okulistyczny. Następnie należy podać zwierzęciu zastrzyk buprenorfiny i kontynuować jej podawanie po zabiegu, po wykonaniu początkowego nacięcia i przemieszczeniu jelita, tak jak to miało miejsce w przypadku dawcy, przystąpić do nefrektomii prawej, podwiązać tętnicę nerkową i żyłę za pomocą sześciu szwów zerowych, podwiązać i podzielić moczowód proksymalnie do nerki za pomocą sześciu szwów zerowych.

Następnie wyciąć nerkę dystalnie do szwu naczyniowego. Teraz poniżej naczyń nerkowych wyizoluj AA i IVC, a następnie powyżej miejsca zespolenia. Umieść cztery bawełniane krawaty wokół aorty, a IVC zrób to samo gorzej niż w tym miejscu.

Wszelkie naczynia lędźwiowe znajdujące się w tym regionie powinny być albo kauteryzowane, albo podwiązane za pomocą nylonowego szwu 10 zero, a nie szwu, który jest gorszy, a następnie ciasno, a następnie ciasno, nie szwu, który jest lepszy. Spowoduje to zatrzymanie części krwi w aorcie, ułatwiając autotomię AOR. Wykonaj atom za pomocą igły o rozmiarze 30, a następnie przedłuż nacięcie do około dwóch milimetrów długości za pomocą cienkich mikronożyczek.

Kolejnym krokiem jest wykonanie zespolenia endo od pięty dawczej i mankietu palcowego do aorty biorcy. Najpierw umieść szew podtrzymujący w pięcie aorty dawcy z 10 szwem zerowym. Kontynuuj to przez dolny koniec nacięcia w aorcie biorcy i zwiąż.

Po drugie, umieść szew zerowy 10 w górnym końcu nacięcia aorty i kontynuuj to przez palec mankietu dawcy i zawiąż. Po trzecie, zaczynając od górnego końca, wykonaj płynny szew w bocznej ścianie aorty i przywiąż do wcześniej umieszczonego dolnego szwu podporowego. Następnie odwróć nerkę i kontynuuj szew biegnący wzdłuż ściany przyśrodkowej i przywiąż do górnego szwu podporowego.

Uzupełnij zespolenie żylne, nakłuwając IVC za pomocą igły, a następnie przedłużając nacięcie cienkimi mikronożyczkami. Używając nylonu 10 zero, przywiąż żyłę nerkową dawcy do dolnego rogu IVC. Umieść kolejne 10 szwów zerowych na górnym końcu IVC i żyły dawczej i wykonaj szew biegnący po obu stronach.

Podobnie jak w przypadku zespolenia tętniczego, awersja krawędzi tkanek pomaga w uszczelnieniu i gojeniu. Teraz sprawdź swoją pracę. Przeciwległe ściany nie powinny być chwytane przez szwy, ponieważ przepływ krwi będzie zbyt zwężony.

Kolejnym niezwykle ważnym czynnikiem zapewniającym optymalne napięcie linii szwu zespolenia jest zbyt luźny i nieodwracalny wyciek, zbyt ciasny i zwężenie przepływu. Jeśli po stronie tętniczej, spowoduje to słabą obfitość przeszczepu. Jeśli po stronie żylnej, dojdzie do przekrwienia nerki.

Po zakończeniu zespolenia zwolnij dystalną opaskę bawełnianą, aby ustalić przepływ żylny. Następnie stopniowo rozluźniaj proksymalny krawat i umyj w kierunku hemostazy w zespoleniu tętniczym. Gdy oba zespolenia zostaną potwierdzone jako bezpieczne, oto pęcherz biorcy z igłą o rozmiarze 20, która wykonuje dwa otwory, przepuszcza kleszcze przez otwory i przeciąga moczowód dawcy przez pęcherz.

Następnie zakotwiczyć proksymalny koniec moczowodu do ściany pęcherza moczowego za pomocą szwów 2 10 0. Przyciąć nadmiar wystającego moczowodu tak, aby cofnął się w pęcherzu. Następnie zamknij drugi otwór w pęcherzu za pomocą 10 szwów zerowych.

Zakończ operację, wymieniając jelito, zamykając brzuch w dwóch warstwach za pomocą pięciu zerowych szwów jedwabnych i wstrzykując jeden mikrolitr soli fizjologicznej do brzucha przed zamknięciem. Po zamknięciu jamy brzusznej wstrzyknij podskórnie kolejne 0,8 mililitra soli fizjologicznej i odzyskaj zwierzę na ciepłym kocu W ciągu jednego roku zbierania danych technika ta znacznie zmniejszyła częstość występowania zakrzepicy tętniczej z 35% do 0%, a ten wskaźnik 0% zakrzepicy utrzymuje się od czasu przeprowadzenia immunohistochemii na nerce bez przeszczepu i nerce przeszczepionej. Stosując opisaną technikę, okresowe barwienie kwasem ujawniło normalne proksymalne komórki kanalikowe w grupie kontrolnej i dawcy.

Komórki są prostopadłościenne z przezroczystą cytoplazmą i okrągłym jasnym jądrem w środku komórki dla obu strzałek. Zwróć uwagę na dowody łagodnego uszkodzenia brzegu zarośli, ale większość obrzeży zarośli jest regularna i dobrze zachowana. Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak wykonać zespolenie tętnicze pięty i panewki palcach, które spowoduje zmniejszenie liczby przypadków zakrzepicy i bardziej udane przeszczepy nerek.