Name: Metoda analizy morfometrycznej i komórkowej mysiego kłykcia żuchwy (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-01-11T12:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 7 s
Description: Poznaj metodę analizy morfometrycznej i komórkowej mysiego kłykcia żuchwy przy użyciu radiografii i analizy histologicznej. Technika ta pozwala badać zmiany strukturalne wywołane obciążeniem kompresyjnym.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Autorzy chcieliby podziękować dr Davidowi Rowe za uprzejme dostarczenie transgenicznych myszy oraz Li Chenowi za pomoc histologiczną. 
Badania opisane w tej publikacji były wspierane przez National Institute of Dental & Craniofacial Research of the National Institutes of Health pod numerem nagrody K08DE025914 oraz przez American Association of Orthodontic Foundation dla Sumit Yadav.

<ol><li>LeResche, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+Temporomandibular+Disorders%3A+Implications+for+the+Investigation+of+Etiologic+Factors%5BTitle%5D)+AND+%22Crit+Rev+Oral+Biol+Med%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of Temporomandibular Disorders: Implications for the Investigation of Etiologic Factors.</a> Crit Rev Oral Biol Med. 8 (3), 291-305 (1997).</li>
<li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+functional+loading+causes+differential+effects+in+the+subchondral+bone+and+condylar+cartilage+in+the+temporomandibular+joint+from+young+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthr+Cartil%22%5BJournal%5D)">Altered functional loading causes differential effects in the subchondral bone and condylar cartilage in the temporomandibular joint from young mice.</a> Osteoarthr Cartil. 17 (3), 354-361 (2009).</li>
<li>Pirttiniemi, P., Kantomaa, T., Sorsa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+decreased+loading+on+the+metabolic+activity+of+the+mandibular+condylar+cartilage+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Orthod%22%5BJournal%5D)">Effect of decreased loading on the metabolic activity of the mandibular condylar cartilage in the rat.</a> Eur J Orthod. 26 (1), 1-5 (2004).</li>
<li>Chavan, S. J., Bhad, W. A., Doshi, U. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+temporomandibular+joint+changes+in+Twin+Block+and+Bionator+appliance+therapy%3A+a+magnetic+resonance+imaging+study%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Orthod%22%5BJournal%5D)">Comparison of temporomandibular joint changes in Twin Block and Bionator appliance therapy: a magnetic resonance imaging study.</a> Prog Orthod. 15 (57), (2014).</li>
<li>Dutra, E. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+and+Matrix+Response+of+the+Mandibular+Condylar+Cartilage+to+Botulinum+Toxin%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">Cellular and Matrix Response of the Mandibular Condylar Cartilage to Botulinum Toxin.</a> PLoS ONE. 11 (10), 0164599(2016).</li>
<li>Benjamin, M., Ralphs, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biology+of+fibrocartilage+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Rev+Cytol%22%5BJournal%5D)">Biology of fibrocartilage cells.</a> Int Rev Cytol. 233, 1-45 (2004).</li>
<li>Shen, G., Darendeliler, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Adaptive+Remodeling+of+Condylar+Cartilage-+A+Transition+from+Chondrogenesis+to+Osteogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Dent+Res%22%5BJournal%5D)">The Adaptive Remodeling of Condylar Cartilage- A Transition from Chondrogenesis to Osteogenesis.</a> J Dent Res. 84 (8), 691-699 (2005).</li>
<li>Utreja, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+and+matrix+response+of+temporomandibular+cartilage+to+mechanical+loading%5BTitle%5D)+AND+%22Osteoarthr+Cartil%22%5BJournal%5D)">Cell and matrix response of temporomandibular cartilage to mechanical loading.</a> Osteoarthr Cartil. 24 (2), 335-344 (2016).</li>
<li>Kaul, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Effect+of+Altered+Loading+on+Mandibular+Condylar+Cartilage%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+ONE%22%5BJournal%5D)">The Effect of Altered Loading on Mandibular Condylar Cartilage.</a> PLoS ONE. 11 (7), 0160121(2016).</li>
<li>Dyment, N. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High-Throughput%2C+Multi-Image+Cryohistology+of+Mineralized+Tissues%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">High-Throughput, Multi-Image Cryohistology of Mineralized Tissues.</a> J Vis Exp. , e54468(2016).</li>
<li>Kawamoto, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+a+new+adhesive+film+for+the+preparation+of+multi-purpose+fresh-frozen+sections+from+hard+tissues%2C+whole-animals%2C+insects+and+plants%5BTitle%5D)+AND+%22Arch+Histol+Cytol%22%5BJournal%5D)">Use of a new adhesive film for the preparation of multi-purpose fresh-frozen sections from hard tissues, whole-animals, insects and plants.</a> Arch Histol Cytol. 66 (2), 123-143 (2003).</li>
<li>Hayman, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tartrate-resistant+acid+phosphatase+%28TRAP%29+and+the+osteoclast%2Fimmune+cell+dichotomy%5BTitle%5D)+AND+%22Autoimmunity%22%5BJournal%5D)">Tartrate-resistant acid phosphatase (TRAP) and the osteoclast/immune cell dichotomy.</a> Autoimmunity. 41 (3), 218-223 (2008).</li>
</ol>

Autorzy nie mają konkurencyjnych interesów finansowych.

W pracy opisano metody pomiaru morfometrycznego i analizy komórkowej mysich kłykci żuchwy i żuchwy. Radiograficzne pomiary morfometryczne mogą być również wykorzystywane do analizy innych kości małych zwierząt doświadczalnych. Ponadto analiza komórkowa (kwantyfikacja komórek i mapowanie odległości chrząstki) nie ogranicza się do kłykcia żuchwy gryzonia, ale może być stosowana do ilościowego określania przekrojów histologicznych wielu tkanek. 
Transgeniczne modele myszy z ekspresją reporterów f...

Staw skroniowo-żuchwowy jest unikalnym stawem nośnym znajdującym się w okolicy twarzoczaszki i utworzonym z chrząstki włóknistej. MCC stawu skroniowo-żuchwowego jest niezbędny do funkcjonowania stawów, w tym nieskrępowanego ruchu żuchwy podczas mówienia i żucia, ale często dotykają go choroby zwyrodnieniowe, w tym choroba zwyrodnieniowa stawów1. Staw skroniowo-żuchwowy ma zdolność adaptacji do bodźców zewnętrznych i zmian obciążenia, co prowadzi do zmian strukturalnych i komórkowych w składnikach MCC2,3,4,5. Właściwości nośne MCC można wyjaśnić interakcjami między jego składnikami, w tym wodą, siecią kolagenową i gęsto upakowanymi proteoglikanami. MCC ma cztery odrębne strefy komórkowe, które wyrażają różne typy białek kolagenowych i niekolagenowych: 1) strefa powierzchowna lub stawowa; 2) strefa proliferacyjna, złożona z niezróżnicowanych komórek mezenchymalnych, która reaguje na zapotrzebowanie na obciążenie; 3) strefa przedprzeprzerosłaficzna, złożona z dojrzałych chondrocytów wykazujących ekspresję kolagenu typu 2; oraz 4) strefa przerostowa, region, w którym przerostowe chondrocyty wyrażające kolagen typu 10 umierają i ulegają zwapnieniu. Obszar niezmineralizowany jest bogaty w proteoglikany, które zapewniają odporność na siły ściskające6.
W strefie przerostowej MCC, gdzie następuje przejście od chondrogenezy do osteogenezy, następuje ciągła mineralizacja, gwarantując solidną strukturę mineralną kości podchrzęstnej kłykcia żuchwy7. Zmiany komórkowe w regionach niezmineralizowanych i zmineralizowanych ostatecznie prowadzą do zmian morfologicznych i strukturalnych w kłykciu żuchwy i żuchwie. Utrzymanie homeostazy wszystkich regionów komórkowych MCC i mineralizacja części podchrzęstnej są niezbędne dla zdrowia, nośności i integralności stawu skroniowo-żuchtwowego.
Model transgenicznej myszy z wieloma kolagenami (opisany przez Utreja et al.)8 jest doskonałym narzędziem do zrozumienia zmian w ekspresji kolagenu, ponieważ wszystkie transgeny ulegają ekspresji w MCC. W celu dogłębnej oceny histologicznej barwienia histologiczne stosuje się do badania osadzania się matrycy, mineralizacji, proliferacji komórek i apoptozy, a także ekspresji białek w różnych warstwach komórkowych MCC.
W tym manuskrypcie analizy histologiczne i morfometryczne są używane do oceny zmian komórkowych i strukturalnych w MCC i kości podchrzęstnej kłykcia żuchwy myszy. Ponadto opisano metodę kwantyfikacji komórek, służącą do analizy fluorescencyjnych obrazów histologicznych oraz do mapowania szkiełek mikroskopu świetlnego. Metoda kompresyjnego statycznego obciążenia stawu skroniowo-żuchwowego, która powoduje zmiany komórkowe i morfologiczne w MCC i kości podchrzęstnej9, jest również zilustrowana w celu walidacji naszych metod.
Opisane tutaj metody mogą być używane do określania zmian morfometrycznych i histologicznych w kłykciu żuchwy i żuchwie gryzoni lub do analizy innych regionów kostnienia śródchrzęstnego i morfologii dodatkowych zmineralizowanych tkanek.

<table><tbody><tr><td>System radiograficzny MX20</td><td>Faxitron X-Ray LLC&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Oprogramowanie Digimizer Image&nbsp;</td>Oprogramowanie <td></td><td></td><td>MedCalc</td></tr><tr><td>Żywica do zatapiania Shandon Cryomatrix</td><td>Thermo Scientific</td><td>6769006</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskop ręczny Axio Imager Z1</td><td>Carl Zeiss</td><td>208562</td><td></td></tr><tr><td>żółte fluorescencyjne filtry białkowe&nbsp; - Filtr</td> białka cyjanowego EYFP <td>Chroma Technology Corp</td><td>49003</td><td></td></tr><tr><td>- ECFP</td><td>Chroma Technology Corp</td><td>49001</td><td></td></tr><tr><td>filtr białkowy czerwony fluorescencyjny - Cy5</td><td>Chroma Technology Corp</td><td>49009</td><td></td></tr><tr><td>octan sodu bezwodny</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S2889</td><td></td></tr><tr><td>dwuwodny winian sodu&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>228729</td><td></td></tr><tr><td>azotyn sodu&nbsp;</td><td>Podłoże Sigma-Aldrich</td><td>237213</td><td></td></tr><tr><td>ELF97</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>E6600</td><td></td></tr><tr><td>ClickiT EdU Alexa Fluor 594 HCS</td><td>kit Life Technologies</td><td>C10339&nbsp;</td><td>zawiera EdU (5-etynylo-2'-deoksyurydynę)&nbsp;</td></tr><tr><td>DAPI (4',6-Diamidino-2-Fenyloindol, Dichlorowodorek)</td><td>Thermo Scientific</td><td>D1306</td><td></td></tr><tr><td>Fosforan sodu dwuzasadowy&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S3264</td><td></td></tr><tr><td>Fosforan sodu jednozasadowy&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71505</td><td></td></tr><tr><td>Błękit toluidynowy O&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T3260</td><td></td></tr><tr><td>Adobe Photoshop&nbsp;</td><td>Adobe Systems Incorporated</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tabletki soli fizjologicznej buforowane fosforanami (PBS)</td><td>Research Products International</td><td>P32080-100T</td><td></td></tr><tr><td>CNA Beta III Bezniklowy łuk</td><td>Ortho Organizers, Inc.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pryzmat GraphPad&nbsp;</td><td>Oprogramowanie GraphPad, Inc.</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

metoda analizy morfometrycznej i komórkowej mysiego kłykcia żuchwy

A Morphometric and Cellular Analysis Method for the Murine Mandibular Condyle

Staw skroniowo-żuchwowy (TMJ) ma zdolność adaptacji do bodźców zewnętrznych, a zmiany obciążenia mogą wpływać na położenie kłykci, jak również na strukturalne i komórkowe składniki chrząstki kłykciowej żuchwy (MCC). W tym manuskrypcie opisano metody analizy tych zmian oraz metodę zmiany obciążenia stawu skroniowo-żuchwowego u myszy (tj. kompresyjne statyczne obciążenie stawu skroniowo-żuchwowego). Przedstawiona tutaj ocena strukturalna jest prostym podejściem morfometrycznym, które wykorzystuje oprogramowanie Digimizer i jest wykonywane na zdjęciach rentgenowskich małych kości. Ponadto opisano analizę zmian komórkowych prowadzących do zmian w ekspresji kolagenu, przebudowie kości, podziale komórek i dystrybucji proteoglikanów w MCC. Wykazano również ilościowe oznaczanie tych zmian w przekrojach histologicznych - poprzez zliczanie dodatnich pikseli fluorescencyjnych za pomocą oprogramowania do obrazowania oraz pomiar mapowania odległości i barwionego obszaru za pomocą Digimizera. Przedstawione tutaj metody nie ograniczają się do mysiego stawu skroniowo-żuchtniskowego, ale mogą być stosowane na dodatkowych kościach małych zwierząt doświadczalnych oraz w innych obszarach kostnienia śródchrzęstnego.

Przeprowadzono analizę statystyki opisowej w celu zbadania rozkładu pomiarów morfometrycznych (długość żuchwy, długość wyrostkażłazowego, szerokość wyrostkażłazowego) oraz analiz histologicznych. Wyniki porównano pomiędzy grupą obciążoną (t.j. myszami poddanymi obciążeniu kompresyjnemu za pomocą sprężyny z beta-tytanu) a grupą kontrolną (t.j. dobranymi myszami kontrolnymi, które nie przeszły żadnego zabiegu). Statystycznie istotne różnice między średnimi określono za pom...

Ten manuskrypt przedstawia metody analizy zmian morfometrycznych i komórkowych w obrębie kłykcia żuchwy gryzoni.

Metoda analizy morfometrycznej i komórkowej mysiego kłykcia żuchwy

The temporomandibular joint (TMJ) has the capacity to adapt to external stimuli, and loading changes can affect the position of condyles, as well as the ...

Ogólnym celem niniejszego eksperymentu jest zaobserwowanie efektów obciążenia ściskającego w chrząstce wyrostkażnego żuchwy u myszy przy użyciu pomiarów morfometrycznych na radiogramach oraz analizy histologicznej. Metryki te mogą pomóc w odpowiedzi na kluczowe pytania dotyczące zmian strukturalnych i komórkowych w wyrostkużnym żuchwy gryzoni. Główną zaletą zaprezentowanej tutaj techniki jest możliwość jej zastosowania do analizy innych małych zwierząt kostnych lub uczestniczących w badaniach.Do niniejszego protokołu należy przygotować wyizolowane i wypreparowane żuchwy myszy. Przenieś żuchwy na szalce Petriego do systemu szafki rentgenowskiej. Następnie wykonaj radiogramy przy napięciu 26 kV przez pięć sekund.Teraz otwórz obrazy w oprogramowaniu analitycznym, aby wykonać pomiary morfometryczne. Najpierw użyj przycisku jednostek, aby ustawić pasek skali. Następnie wybierz sześć punktów anatomicznych, korzystając z markerów stylu 2.W pierwszej kolejności wybierz najbardziej tylne punkty wyrostka kłykczastego żuchwy jako punkt pierwszy. Następnie wybierz wyrostek zębowy jako punkt drugi. Na koniec wybierz najniższy punkt wcięcia sigmoidnego jako punkt trzeci.Następnie należy wybrać najgłębszy punkt w zagłębieniu gałęzi żuchwy, punkt czwarty, a potem wybrać najbardziej przedni punkt powierzchni stawowej wyrostka kątowego, punkt piąty. Teraz należy wybrać najbardziej tylny punkt powierzchni stawowej wyrostka kątowego jako punkt szósty i przystąpić do pomiarów długości przy użyciu narzędzia do pomiaru długości. Następnie, używając narzędzia do wykreślania linii prostopadłych od punktu trzeciego do czwartego, należy zmierzyć długość głowy wyrostka, która jest długością prostopadle opuszczonej linii z punktu pierwszego do linii łączącej punkty trzeci i czwarty.Następnie zmierz długość żuchwy pomiędzy punktami pierwszym a drugim. Na koniec zmierz szerokość głowy wyrostka przysiodkowego, która znajduje się pomiędzy punktami piątym a szóstym. Aby zapisać dane, skopiuj listę pomiarów znajdującą się po prawej stronie ekranu.Przed zatopieniem utrwalonych, ale niedekalcyfikowanych żuchew, należy namoczyć je przez noc w 30% sacharozie w PBS. Następnego dnia należy wyciąć nadmiar tkanki miękkiej i ostrożnie odciąć wyrostek stawowy żuchwy. Następnie próbki należy umieścić w plastikowych formach, tak aby powierzchnia przyśrodkowa wyrostka stawowego przylegała do podstawy formy, a próbka znajdowała się równolegle do jej dna.Następnie zanurz je w żywicy do zatapiania i schłodź żywicę za pomocą kawałka suchego lodu. Potem dopełnij formy dodatkową ilością żywicy do zatapiania. Przenieś je do zimnego 2-metyliobutanu, schłodzonego w zamrażarce lub za pomocą suchego lodu.Po schłodzeniu należy przechowywać preparaty w temperaturze -20 °C lub -80 °C do czasu wykonania skrawków. Aby ilościowo ocenić ekspresję Col10a1 w MCC w przekrojach strzałkowych kłykci, należy otworzyć obrazy histologiczne w programie do analizy obrazu i zaznaczyć obszar zainteresowania za pomocą narzędzia lasso. W tym przypadku zaznaczany jest obszar MCC.Zanotuj liczbę pikseli w obszarze, która jest wyświetlana w oknie histogramu. Następnie zaznacz czerwone piksele Col10a1, dostosowując zakres kolorów. Użyj narzędzia pipety, aby wybrać czerwony piksel z obrazu, i kliknij OK. Następnie zapisz liczbę czerwonych pikseli w obszarze, zgodnie z informacją w oknie histogramu.Odsetek czerwonych pikseli w obszarze reprezentuje poziom ekspresji Col10a1. Teraz, stosując tę samą podstawową technikę, należy określić ilościowo aktywność TRAP w MCC oraz w kości podchrzestnej. Najpierw zaznacz chrząstkę w obszarach kości podchrzestnej jako obszary do analizy i zanotuj całkowitą liczbę pikseli.Następnie należy wybrać żółte piksele wygenerowane przez substrat ELF97. Należy odnotować liczbę pikseli dodatnich i obliczyć odsetek pikseli dodatnich pod kątem TRAP. Teraz należy przeprowadzić kwantyfikację komórek dodatnich pod kątem EDU, które zostały przeciwbarwione na niebiesko za pomocą DEPI.Ponownie zaznacz obszar zainteresowania, a następnie dokonaj kwantyfikacji niebieskich pikseli w jego obrębie. Użyj tej samej metody, aby określić liczbę pikseli pozytywnych pod kątem EDU w tym samym regionie. Pomiary morfometryczne myszy poddanych kompresyjnemu obciążeniu stawu skroniowo-żuchwowego (TMJ) wykazały, że obciążenie istotnie zwiększyło długość żuchwy oraz głowy wyrostkażuchwowego.Niemniej jednak obciążenie nie spowodowało istotnej zmiany szerokości wyrostka. Ilościowa analiza rozmieszczenia kolagenu wykazała istotny wzrost ekspresji Col10a1 oraz MCC w wyrostkach zwierząt poddanych obciążeniu. Z kolei ekspresja Col2a1 nie różniła się znacząco od grupy kontrolnej.Aktywność TRAP wzrosła w obszarze podchrzestnym kłykci oraz u obciążonych myszy, podobnie jak proliferacja. Barwienie EDU wskazuje liczbę komórek proliferujących. Rozkład proteoglikanów w MCC została określona poprzez ocenę obszaru zabarwionego błękitem toluidyny oraz mapy dystansów.W grupie obciążonej odnotowano istotny wzrost mapowania odległości w obrębie MCC wyrostków kostnych. Jednakże obszar barwienia proteoglikanów nie wykazywał statystycznie istotnych różnic między grupami. Po obejrzeniu tego filmu powinni Państwo posiadać dobrą wiedzę na temat analizy zmian komórkowych i strukturalnych w wyrostku kostnym żuchwy gryzoni.

a-morphometric-cellular-analysis-method-for-murine-mandibular

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Organizacja komórkowa kości twarzoczaszki od dawna była przedmiotem hipotezy, ale nigdy nie została bezpośrednio zwizualizowana. Wielospektralne znakowanie komórek i obrazowanie na żywo in vivo umożliwiają wizualizację dynamicznego zachowania komórek w dolnej szczęce danio pręgowanego. Tutaj szczegółowo opisujemy protokół manipulowania transgenicznymi rybami Zebrabow i bezpośrednio obserwujemy interkalację komórek i zmiany morfologiczne chondrocytów w chrząstce Meckla.

Wizualizacja interkalacji chondrocytów i proliferacji kierunkowej za pomocą analizy komórek klonalnych Zebrabow w embrionalnej chrząstce Meckla

Wiele struktur biologicznych nie ma łatwo definiowalnych punktów orientacyjnych, co utrudnia zastosowanie nowoczesnych metod morfometrycznych. Tutaj ilustrujemy metody badania baculum myszy (kości w penisie), w tym sekcję i skanowanie mikrotomografią komputerową, a następnie metody obliczeniowe do definiowania półpunktów orientacyjnych, które są używane do ilościowego określania zmienności rozmiaru i kształtu.

Preparacja, tomografia komputerowa i analizy morfometryczne baculum

Przedstawiamy metodę oceny przestrzennego zasięgu uszkodzenia/śmierci komórek na powierzchni stawowej nienaruszonych stawów mysich po zastosowaniu kontrolowanych obciążeń mechanicznych lub uderzeń. Metoda ta może być wykorzystana do zbadania, w jaki sposób choroba zwyrodnieniowa stawów, czynniki genetyczne i/lub różne schematy obciążenia wpływają na podatność chondrocytów in situ.

Wizualizacja i analiza w czasie rzeczywistym uszkodzeń chondrocytów spowodowanych obciążeniem mechanicznym w całkowicie nienaruszonych eksplantatach chrząstki myszy

Ten protokół opisuje mikrodysekcję laserową do izolacji chrząstki i kości ze świeżo zamrożonych fragmentów zarodka myszy. Chrząstka i kość mogą być szybko uwidocznione przez barwienie fioletem krezylo i precyzyjnie zebrane w celu uzyskania wysokiej jakości RNA do analizy transkryptomicznej.

Laserowe wychwytywanie mikrodysekcji chrząstki embrionalnej i kości myszy w celu analizy ekspresji genów

Przedstawiamy protokół generowania ruchów zębów ortodontycznych u myszy oraz metody wizualizacji 3D włókien kolagenowych i naczyń krwionośnych więzadła przyzębia bez sekcji.

Obrazowanie 3D włókien kolagenowych PDL podczas ortodontycznego ruchu zębów w mysim modelu żuchwy

Obecny protokół opisuje kontrolowane zadrapania mikroostrza na powierzchni chrząstki stawowej po destabilizacji kolana myszy poprzez przecięcie przyśrodkowego więzadła minipiszczelowego. Ten model zwierzęcy przedstawia przyspieszoną postać choroby zwyrodnieniowej stawów (OA) odpowiednią do badania tworzenia osteofitów, osteosklerozy i bólu we wczesnym stadium.

Destabilizacja przyśrodkowego łąkotki i chrząstki rys mysiego modelu przyspieszonej choroby zwyrodnieniowej stawów

Ten protokół krok po kroku pokazuje, jak wydobyć pierwszy ząb trzonowy żuchwy u myszy. Stanowi alternatywną metodę dla badaczy zajmujących się gojeniem i regeneracją kości szczęki.

Opracowanie modelu gojenia zębodołu po ekstrakcji zębów trzonowych żuchwy u myszy

Tutaj demonstrujemy krok po kroku łatwy do opanowania, ortodontyczny protokół ruchu zębów operowany na mysim modelu szczęki. Dzięki wyraźnemu wyjaśnieniu każdego kroku i wizualnej demonstracji, naukowcy mogą opanować ten model i zastosować go do swoich potrzeb eksperymentalnych za pomocą kilku modyfikacji.

Opracowanie mysiego modelu ortodontycznego szczęki

Tutaj prezentujemy protokół do badania ortodontycznego ruchu zębów (OTM), służący jako odpowiedni model do badania mechanizmów adaptacji kości, resorpcji korzeni i reakcji komórek kostnych na bodźce mechaniczne. Ten obszerny przewodnik zawiera szczegółowe informacje na temat modelu OTM, akwizycji mikrotomografii komputerowej i późniejszej analizy.

Badanie ruchów zębów ortodontycznych u myszy

Tutaj szczegółowo opisujemy metodę, która opiera się na mikrotomografii komputerowej, do segmentacji i pomiaru modeli 3D kości czaszkowo-szczękowo-twarzowych u myszy, dla lepszej oceny rozwoju kości czaszkowo-szczękowo-twarzowej u myszy niż jest to możliwe przy użyciu obecnych metod.

Analiza malformacji czaszkowo-szczękowo-twarzowych u myszy za pomocą trójwymiarowej mikrotomografii komputerowej

W tym badaniu opisujemy krok po kroku protokół i kładziemy nacisk na kluczowe szczegóły dotyczące określania cech morfologicznych mitochondriów w żywych komórkach, w tym przygotowanie próbki, akwizycję obrazu i analizę danych. Ta metoda jest powszechnie stosowana do badania morfologii mitochondriów w celu badania różnych schorzeń.

Oznaczanie morfologii mitochondriów w żywych komórkach za pomocą mikroskopii konfokalnej

Poznaj metodę analizy morfometrycznej i komórkowej mysiego kłykcia żuchwy przy użyciu radiografii i analizy histologicznej. Technika ta pozwala badać zmiany strukturalne wywołane obciążeniem kompresyjnym.

Metoda analizy morfometrycznej i komórkowej mysiego kłykcia żuchwy

Przeglądaj więcej filmów