Ocena wad niedrożności połączeń dróg moczowych za pomocą iniekcji barwnika błękitu metylenowego

Ogólnym celem tej procedury jest określenie niedrożności połączeń dróg moczowych poprzez wstrzyknięcie barwnika metylenowego do nerek. Ta metoda może pomóc odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie rozwoju nerek i dolnych dróg moczowych, takie jak połączenie pęcherza moczowego. Główną zaletą tej techniki jest to, że zapewnia prostą metodę wizualizacji struktury dróg moczowych w najgorszym przypadku rozwoju masy, umożliwiając analizę rozwoju dróg moczowych.

Aby rozpocząć eksperyment, odmierz 0,1 grama niebieskiego proszku metylenowego. Rozpuść błękit metylenowy w 10 mililitrach 1x soli fizjologicznej buforowanej fosforanem lub PBS i zwiruj mieszaninę. Następnie przefiltruj 10 miligramów na mililitr roztworu błękitu metylenowego za pomocą filtra strzykawkowego, aby wyeliminować zatykanie podczas wstrzykiwania.

Następnie złóż sterylny zestaw żył skóry głowy za pomocą trzymililitrowej jednorazowej strzykawki i napełnij strzykawkę trzema mililitrami przefiltrowanego roztworu błękitu metylenowego. Wyczyść nożyczki preparacyjne i kleszcze 70% etanolem. Aby pobrać zarodki okołoporodowe w E18.5 lub E19.5, najpierw poddaj ciężarne myszy eutanazji za pomocą inhalacji dwutlenku węgla.

Następnie należy wykonać zwichnięcie szyjki macicy zgodnie z wytycznymi NIH. Następnie rozpyl 70% etanol na brzuszną powierzchnię brzucha zwierzęcia. Następnie za pomocą sterylnych nożyczek preparacyjnych i kleszczy otwórz brzusznie jamę brzuszną.

Podnieś całą macicę i oddziel ją od ciała na końcach rogów macicy. Następnie przepłucz całą macicę 1x PBS na szalce Petriego. Przeciąć macicę segmentowo nożyczkami preparacyjnymi i usunąć decyduę łożyskową za pomocą kleszczy preparacyjnych, aby odsłonić zarodki i woreczki żółtkowe.

Najpierw usuń woreczek żółtkowy, a następnie usuń błonę owodniową za pomocą kleszczy preparacyjnych, aby uwolnić zarodki okołoporodowe. Odetnij głowę zarodka nożyczkami preparacyjnymi. Przypnij zarodek jego brzuszną powierzchnią do góry na mikroskopie preparacyjnym wyposażonym w kamerę cyfrową do obrazowania.

Zbierz jego ogon do genotypowania. Za pomocą kleszczy ostrożnie rozerwij skórę, aby otworzyć jamę brzuszną zarodka. Następnie ostrożnie usuń nadmiar narządów i tkanek, takich jak wątroba, żołądek i jelita za pomocą kleszczy, przecinając je lub wyciągając, aby odsłonić nerki, moczowody i pęcherz moczowy, które znajdują się grzbietowo.

Wchłonąć nadmiar krwi z wypreparowanego zarodka za pomocą sterylnych gazików, a następnie kontynuować wstrzyknięcie barwnika. Usunąć pęcherzyki z igły i rurki, usuwając roztwór błękitu metylenowego z końcówki igły za pomocą ciśnienia hydrostatycznego. Podnieść strzykawkę zawierającą roztwór barwnika powyżej poziomu końcówki igły, aby rozpocząć przepływ.

A następnie opuścić strzykawkę, aby zatrzymać przepływ. Następnie wbij igłę do miedniczki nerkowej w pobliżu bliższego moczowodu, uważając, aby nie naruszyć jej po umieszczeniu. Wykonaj wstrzyknięcie barwnika do nerki, aby określić jej niedrożność dróg moczowych.

Po wprowadzeniu jednej igły do miedniczki nerkowej, aby badanie zakończyło się sukcesem, należy wprowadzić igłę do miedniczki nerkowej w kierunku moczowodu, nie przechodząc ani przez nerkę, ani w kierunku naczynia krwionośnego. Podnieś strzykawkę na około 20 centymetrów, aby zapewnić ciśnienie hydrostatyczne i pozwól przepłynąć 15 do 16 mikrolitrów roztworu barwnika. Następnie monitoruj niebieski kolor barwnika, zaczynając najpierw w miedniczce nerkowej, następnie na długości moczowodu, a na końcu w świetle pęcherza moczowego.

Umieścić strzykawkę w dół, aby zatrzymać przepływ barwnika i wyjąć igłę z nerki. Zapisz wodonercze nerki, hydromoczowód i końcowe położenie roztworu barwnika w zeszycie laboratoryjnym. Na koniec wykonaj wstrzyknięcie przeciwległej nerki i pozwól barwnikowi płynąć przez łącznie 20 sekund.

Wykonaj zdjęcia nerki, moczowodu i pęcherza moczowego prześledzone roztworem barwnika za pomocą aparatu i programu do obrazowania podłączonego do mikroskopu stereoskopowego. Po wstrzyknięciu do jednej nerki niebieski barwnik metylenowy przepływa z miedniczki nerkowej przez moczowód do pęcherza moczowego, powodując widoczne niebieskie zabarwienie moczowodu i światła pęcherza. Silniejszy niebieski kolor pojawia się w świetle pęcherza moczowego z powodu dłuższego przepływu około 20 sekund po wstrzyknięciu obu nerek barwnikiem, co wskazuje na brak niedrożności połączenia dróg moczowych w drugim układzie moczowym.

Podczas wstrzykiwania nieprawidłowo rozszerzonego hydromoczowodu ostateczna pozycja roztworu barwnika jest niejasna. A niedrożność połączenia moczowodowo-pęcherzowego lub UVJO nie może być zweryfikowana pomimo braku barwnika w świetle pęcherza moczowego, ponieważ nieprawidłowy moczowód moczowodowy został uszkodzony w środku. Podejmując się tej procedury, należy pamiętać o obliczeniu worka barwnikowego zarodków okołoporodowych, aby uzyskać nienaruszony układ moczowy.

I usuń bąbelki, aby nie blokować przepływu barwnika.