Jednoczesna rejestracja kolokalizowanej elektroencefalografii i lokalnego potencjału pola u gryzoni

Ogólnym celem tej metodologii jest jednoczesne rejestrowanie kolokalizowanej elektroencefalografii i potencjału pola lokalnego u znieczulonego szczura. Aby rozpocząć tę procedurę, zapisz wagę szczura na wadze laboratoryjnej. Znieczulić szczura w komorze izofluranowej.

Następnie umieść go na uchwycie stereotaktycznym, z ręcznikiem papierowym pod ciałem i oprzyj zęby na drążku do gryzienia. Następnie podawać izofluran w sposób ciągły przez twardy, plastikowy stożek nosowy zamontowany na zacisku nosowym. Podłączyć stożek do systemu znieczulającego izofluranem dla małych zwierząt.

Następnie włóż termostatyczną poduszkę grzewczą pod ręcznik papierowy, na którym spoczywa szczur, a następnie zabezpiecz głowę szczura dwoma nausznikami. Monitoruj temperaturę ciała za pomocą termometru doodbytniczego. Teraz ogol czubek głowy zwierzęcia.

Następnie nałóż maść okulistyczną na oczy, aby zapobiec wysuszeniu rogówki. Przed odsłonięciem czaszki nałóż krople lidokainy na skórę głowy i delikatnie wmasuj je w skórę. Następnie wykonaj nacięcie w linii środkowej o długości około dwóch do trzech centymetrów na skórze głowy za pomocą skalpela, aby odsłonić czaszkę.

Ostrożnie oddziel mięsień skroniowy, przeciwległy do opuszki wąsa, który ma być stymulowany od czaszki za pomocą skalera płaszczowego i pary ząbkowanych, zakrzywionych kleszczy preparacyjnych. W razie potrzeby wyczyść czaszkę bawełnianymi wacikami. Za pomocą plecionego, jedwabnego, niewchłanialnego szwu przywiąż oddzielony mięsień do skóry głowy za pomocą ciasnego węzła, a następnie bezpiecznie przywiąż szew do ramy stereotaktycznej.

Następnie użyj współrzędnych stereotaktycznych, aby zlokalizować korę beczkowatą, która ma dwa punkty pięć milimetrów ogonowych do bregma i sześć milimetrów bocznych do linii środkowej. Następnie narysuj kropkę w miejscu kory somatosensorycznej za pomocą cienkiej końcówki, markera permanentnego. Wywierć otwór o średnicy mniejszej niż dwa milimetry w czaszce.

Uważaj, aby nie wiercić w oponie twardej. Rozcieńczyć dno otworu, aby uzyskać przezroczystość. Aby zapobiec przegrzaniu czaszki podczas wiercenia, należy co 10 do 15 sekund nakładać sterylną sól fizjologiczną na obszar roboczy.

Następnie użyj igły o rozmiarze 27, aby przebić oponę twardą, aby umożliwić wprowadzenie mikroelektrody. Następnie przenieś ramkę stereotaktyczną ze szczurem do klatki Faradaya zamontowanej na górze stacji roboczej z izolacją drgań. Przymocuj zacisk czujnika pulsoksymetru, podłączony do jednostki sterującej pulsoksymetru, do tylnej łapy szczura, aby w sposób ciągły monitorować parametry fizjologiczne.

Następnie należy wymienić twardy, plastikowy stożek nosowy i zacisk nosowy na odpowietrznik Micro Flex wyposażony w przezroczysty miękki stożek nosowy, aby umożliwić łatwą stymulację wąsów po jednej stronie opuszki wąsów bez uszczerbku dla podawania izofluranu. Następnie włóż dwie elektrody stymulujące ze stali nierdzewnej do podkładki wąsów odsłoniętej przez wycięcie w stożku nosowym. Następnie podłącz elektrody stymulujące do izolowanego stymulatora prądu.

Następnie podnieś skórę linii środkowej szyi za pomocą kleszczy i wykonaj nożyczkami jedno- lub dwucentymetrowe nacięcie, gotowe do umieszczenia elektrod referencyjnych. W tej procedurze oczyść i osusz czaszkę otaczającą otwór zadziorowy za pomocą bawełnianego wacika. Ostrożnie nałóż przewodzącą pastę EEG na płaską stronę elektrody pająka EEG.

Pozostaw mały otwór z dala od pasty EEG na elektrodzie pająka, aby umożliwić przejście mikroelektrody wielopłytkowej przez otwór bez kontaktu z pastą i elektrodą pająka. Wyrównaj elektrodę pająka z otworem w czaszce z pastą EEG skierowaną w stronę czaszki. Ostrożnie dociśnij elektrodę pająka do czaszki, mocno dotykając czaszki za pomocą pasty EEG.

Za pomocą igły na strzykawce usunąć wszelką pastę zasłaniającą otwór zadzioru i usunąć nadmiar pasty EEG poza obwód elektrody pająka, tak aby kontakt między elektrodą pająka a czaszką był ograniczony przestrzennie do rozmiaru elektrody. Następnie rozsmaruj pastę EEG na elektrodzie referencyjnej EEG i umieść ją bezpiecznie w nacięciu z tyłu szyi szczura. Następnie podłącz elektrody EEG do przedwzmacniacza za pomocą pasywnego rozdzielacza sygnału dla sygnałów o niskiej impedancji.

Na tym etapie sprawdź rezystancję sondy EEG, aby upewnić się, że jest poniżej pięciu kiloomów. Jeśli nie, dodaj więcej pasty EEG i upewnij się, że elektroda pająka ma dobry kontakt z czaszką. Następnie zamontuj ramię mikromanipulatora na ramie stereotaktycznej.

Podłącz liniową 16-kanałową mikroelektrodę do 16-kanałowego ostrego stopnia głowicy, bezpiecznie przypiętą do ramienia mikromanipulatora. Następnie rozsmaruj pastę EEG na elektrodzie referencyjnej dla mikroelektrody, a następnie umieść ją bezpiecznie w nacięciu, obok elektrody referencyjnej dla EEG. Wyreguluj kąt ramienia mikromanipulatora tak, aby mikroelektroda była prostopadła do powierzchni kory mózgowej.

Teraz opuść mikroelektrodę pod mikroskopem, tak aby końcówka mikroelektrody była skierowana na maleńki otwór na dnie otworu zadziorowego, aż górna elektroda po prostu wniknie w powierzchnię kory. Należy uważać, aby nie wciskać mikroelektrody na powierzchnię opony twardej, ponieważ mogłoby to spowodować uszkodzenie elektrody. Wprowadzić mikroelektrodę do powierzchni kory mózgowej na głębokości 1 500 mikrometrów.

Mikroregulacja głębokości poprzez zastosowanie ciągu bodźców do podkładki wąsów i obserwację 16-kanałowego LFP wywołanego na monitorze komputera. Ostrożnie obracaj pokrętłem osi z na mikromanipulatorze, aż wystąpi najwyższa amplituda wywoływanego LFP, ponieważ zbiega się to z warstwą czwartą w korze mózgowej. Rysunek ten pokazuje, że ERP zarejestrowany przez sondę EEG jest o rząd wielkości mniejszy niż LFP zarejestrowany przez mikroelektrodę w warstwie nadziarnistej kory beczkowej.

Profil czasowy ERP jest podobny do profilu LFP w warstwie suprakrynarnej, gdy jest znormalizowany do negatywnego wglądu i nałożony. Jednak opóźnienia wglądu w ERP są dłuższe niż odpowiadające im opóźnienia wglądu w LFP. Z drugiej strony, profil czasowy ERP znacznie różni się od profilu warstwy granulowanej LFP.

Co ważne, nie są to swoje lustrzane odbicia z ziarnistym LFP zdominowanym przez pojedynczy negatywny rzut oka. Natomiast ERP składa się przede wszystkim z dwóch spojrzeń o przeciwnej polaryzacji. Wreszcie, sygnały EEG zebrane wokół otworu w czaszce nie różnią się znacząco od zapisów EEG z nienaruszonej czaszki.

Po opanowaniu tej techniki można ją wykonać w ciągu godziny, jeśli zostanie wykonana prawidłowo. Po jej opracowaniu, technika ta utorowała drogę naukowcom zajmującym się EEG i neuronauką obliczeniową do zbadania neurogenezy sensorycznych potencjałów wywołanych. W ten sposób zapewniono ograniczenia dla matematycznego modelowania ERP.

Po obejrzeniu tego filmu powinieneś dobrze zrozumieć, jak jednocześnie rejestrować kolokowane EEG i LFP.