Charakterystyka sierpa podczas kontrolowanego automatycznego odtleniania za pomocą ektacytometrii gradientu tlenu

Ektacytometria gradientu tlenu jest testem funkcjonalnym, który ocenia indywidualną skłonność do sierpowatości. Do tej pory nie są dostępne ani stosowane żadne inne testy funkcjonalne. Ektacytometria gradientu tlenu jest w stanie określić ciśnienie tlenu, przy którym komórki krwi pacjenta z niedokrwistością sierpowatokrwinkową zaczynają sierpowatokrwinkować.

To ciśnienie tlenu jest specyficzne dla pacjenta i może służyć jako biomarker ciężkości choroby. W niedokrwistości sierpowatokrwinkowej technika ta może być stosowana do monitorowania skuteczności leczenia i może być wykorzystywana do opracowywania nowych metod leczenia. Wizualna demonstracja tej techniki jest ważna, ponieważ jest ona bardzo wrażliwa.

Istnieje wiele czynników, które będą miały wpływ na pomiar, których nie znasz, gdy zaczynasz pracę z tą techniką. Ktoś, kto próbuje tego po raz pierwszy, może doświadczyć, że technika ta jest bardzo wrażliwa na przygotowanie próbki i obchodzenie się z nią. Moja rada to pracować tak ustandaryzowana, jak to tylko możliwe i wypracować rutynę.

Aby rozpocząć tę procedurę, włącz komputer i ektacytometr i otwórz oprogramowanie na komputerze. Otwórz butlę z azotem, aby upewnić się, że azot jest dostępny do odtlenienia próbki. Opuść boczek w miseczce i upewnij się, że kubek może się swobodnie obracać.

Gdy oprogramowanie jest uruchomione, sprawdź, czy pojawia się komunikat, upewnij się, że zawór gazu jest otwarty i kliknij OK. Upewnij się, że ektacytometr rozpoczyna proces samokontroli i wybierz start. Jeśli samokontrola nie powiedzie się, uruchom ją ponownie, klikając opcję Sprawdzanie sprzętu, PO2, samokontrola. Wybierz skanowanie pO2 z różnych testów wymienionych po lewej stronie.

Wybierz ustawienia po prawej stronie ekranu i upewnij się, że są one ustawione zgodnie z parametrami wymienionymi w pierwszej tabeli protokołu tekstowego, upewniając się, że zachowasz te same ustawienia dla każdego pomiaru. Zapisz te ustawienia, klikając przycisk OK, a następnie ponownie klikając przycisk OK. Najpierw należy pobrać próbki krwi przez nakłucie dożylne w probówce zawierającej EDTA i przechowywać krew w temperaturze czterech stopni Celsjusza przez minimum 30 minut, ale nie dłużej niż 24 godziny.

Następnie delikatnie wymieszać próbki przez odwrócenie w celu homogenizacji. Przed pomiarem pozwól próbkom rozgrzać się do temperatury pokojowej na stole rolkowym. Użyj analizatora hematologicznego, aby zmierzyć pełną morfologię krwi, umieszczając igłę aspiracyjną w probówce i naciskając przycisk za igłą analizatora hematologicznego, aby rozpocząć pomiar, a analizator zużyje od 20 do 200 mikrolitrów krwi pełnej.

Następnie standaryzuj próbkę krwi pełnej do liczby RBC wynoszącej 200 milionów czerwonych krwinek w pięciu mililitrach PVP, obliczając objętość próbki, która zostanie dodana. Aby rozpocząć, odetnij końcówkę pipety i wstępnie ją zwilż, trzykrotnie zawieszając krew. Następnie odpipetować obliczoną objętość próbki do fiolki PVP.

Delikatnie wymieszać próbkę ręcznie przez odwrócenie, aż stanie się jednorodna. Powoli pobrać dwa mililitry mieszaniny krwi i PVP do trzymililitrowej strzykawki bez igły. Nacisnąć tłok, aby usunąć wszelkie widoczne pęcherzyki powietrza i nadmiar roztworu próbki, aż w strzykawce pozostanie od 1,5 do 1,8 mililitra.

Wstrzyknąć całkowitą objętość próbki powoli i równomiernie do boba przez złącze. Upewnij się, że poziom próbki znajduje się powyżej sondy lambda i małego otworu ssącego. W oprogramowaniu kliknij nowy i wypełnij identyfikator próbki, uwagi, datę oddania i lepkość PVP.

Kliknij przycisk OK i przypieczenie. Po 60 sekundach zasysania kubek obraca się i ponownie zasysa przez 15 sekund. Po zatrzymaniu obrotu kliknij przycisk OK. Zamknij pokrywę urządzenia.

Kliknij kontynuuj i rozpocznij teraz, ponieważ ektacytometria gradientu tlenu jest wykonywana ze stałym wzmocnieniem. Po pomiarze wydrukuj raport, który pokazuje krzywą i parametry, które są automatycznie obliczane przez oprogramowanie. Upewnij się, że surowe dane są automatycznie przechowywane w wyznaczonym folderze w ustawieniach.

Najpierw wyjmij strzykawkę z próbką i zastąp ją strzykawką wypełnioną wodą destylowaną lub wodą dejonizowaną. Naciśnij clean i powoli przepłucz złącze podczas płukania, upewniając się, że spłukuje się w obu kierunkach. Następnie wyjmij strzykawkę i podnieś bob.

Użyj miękkiej szmatki, aby dokładnie wysuszyć bob i łącznik. Następnie użyj dużej strzykawki, aby przepłukać złącze, aby usunąć wodę pozostałą w rurce i bob. Trzymaj strzykawkę na wlocie i zablokuj wylot boba, aby uzyskać ponowne ciśnienie w rurkach, usuwając w ten sposób pozostałą wodę.

Następnie osusz kubek, unikając dotykania plamki tlenowej. Opuść bob i kubek, przygotowując maszynę do następnego pomiaru. Po upewnieniu się, że urządzenie jest prawidłowo wypłukane, sprawdź, czy właściwe rurki są związane z roztworem czyszczącym.

Zamknij oprogramowanie, naciśnij zamknij i naciśnij start, aby rozpocząć program czyszczenia na koniec dnia. Następnie opróżnij butelkę na odpady i użyj miękkiej szmatki, aby wysuszyć bob i kubek. Zamknij pokrywę urządzenia.

Zamknij butlę z azotem i wyłącz komputer i maszynę. Ektacytometria gradientu tlenu może być stosowana do badania sierpowatego zachowania czerwonych krwinek w zakresie stężeń tlenu. W ektacytometrii gradientu tlenu ciągłe odtlenianie próbki przez gazowy azot następuje po szybkim ponownym natlenieniu przez powietrze otoczenia.

W tych warunkach można zaobserwować sierpowatość czerwonych krwinek podczas odtleniania. Spowoduje to zniekształcenie wzoru dyfrakcyjnego, ponieważ sierpowate krwinki czerwone nie ustawią się prawidłowo pod przyłożonym naprężeniem ścinającym. Krwinki czerwone sierpowate wykazują zmianę kształtu podczas odtleniania, która naśladuje warunki podczas ektacytometrii gradientu tlenu, ale nie wykazują zmiany kształtu po natlenieniu.

Proces ten powoduje zniekształcenie wzoru dyfrakcyjnego podczas ektacytometrii gradientu tlenu, a tym samym spadek wskaźnika wydłużenia. Reprezentatywna krzywa uzyskana za pomocą ektacytometru pokazuje sześć parametrów, które odzwierciedlają różne cechy zachowania sierpa: maksymalny wskaźnik wydłużenia, minimalny wskaźnik wydłużenia, delta EI, punkt sierpowa, obszar pod krzywą i powrót do zdrowia. Przedstawiono tutaj reprezentatywne krzywe czerwonych krwinek od zdrowych osób z grupy kontrolnej, pacjentów z cechami HbS oraz pacjenta z homozygotyczną niedokrwistością sierpowatokrwinkową.

Wyraźne różnice w reprezentatywnych krzywych homozygotycznych pacjentów z niedokrwistością sierpowatokrwinkową leczonych mocznikiem hydroksylowym i transfuzją podkreślają przydatność tego testu. Istnieje wiele czynników, które wpływają na ektacytometrię gradientu tlenu, takich jak temperatura, pH i osmolarność PVP, ale także resztki wody i stopień wymieszania roztworu próbki krwi mogą wpływać na pomiary. Dlatego niezbędna jest ustandaryzowana obsługa próbek.

Wyniki ektacytometrii gradientu tlenu mogą być bezpośrednio wdrożone do praktyki klinicznej, przyczyniając się w ten sposób do rozwoju medycyny spersonalizowanej. Technika ta umożliwia badanie zachowania sierpowatego w celu zbadania potencjału nowych metod leczenia niedokrwistości sierpowatokrwinkowej i może służyć jako klinicznie istotny biomarker ciężkości choroby.