Budowa mikroelektrod potencjału lokalnego pola do nagrań in vivo z wielu struktur mózgu jednocześnie

Obecny protokół opisuje konstrukcję specjalnie wykonanych układów mikroelektrod do rejestrowania lokalnych potencjałów pola in vivo z wielu struktur mózgu jednocześnie.

Naukowcy często muszą rejestrować lokalne potencjały pola z wielu struktur jednocześnie. Nasza prosta konstrukcja mikroelektrod pozwala nam rejestrować LFP z kilku struktur mózgu na różnych głębokościach jednocześnie. Dostępne na rynku mikroelektrody często nie są elastyczne i nie pozwalają na zapis z wielu struktur mózgu.

Nasza konstrukcja mikroelektrody pozwala na łatwą modyfikację konstrukcji tak, aby pasowała do dowolnej pożądanej konstrukcji. Zacznij od wzięcia drutu niklowo-chromowego pokrytego dianalem o średnicy 50 mikrometrów. Przyklej jeden koniec drutu do tylnej części platformy i owiń drut trzy razy wokół najbliższego pokrętła na platformie.

Rozciągnij drut wokół najdalszego drugiego pokrętła, aby utworzyć dwie pętle między pokrętłami. Owiń drut jeszcze trzy razy wokół pierwszego pokrętła, aby zamocować drut na miejscu i przyklej koniec z tyłu platformy. Umieść pręty napinające pod drutami z owiniętą wokół nich taśmą.

Za pomocą mikroskopu i cienkich kleszczyków wykonaj trzymilimetrową przerwę między drutami, aby wykonać mikroelektrody korowe, brzuszno-boczne, jądra wzgórza lub 4,5-milimetrową szczelinę, aby wykonać mikroelektrody prążkowiowo-nidrowe. Jeśli w mikroskopie używane jest powiększenie, należy obliczyć i dostosować różnicę powiększenia do rzeczywistej odległości między przewodami. Wytnij cztery małe kawałki plastiku o grubości 0,5 milimetra o szerokości około sześciu milimetrów i wysokości trzech milimetrów.

Nałóż klej na plastik. Umieść plastikowe kawałki w odległości około jednego centymetra od środka drutu, który jest oddalony o jeden centymetr od pręta napinającego. Usuń nadmiar kleju bawełnianym wacikiem.

Po wyschnięciu kleju przetnij drut drobnymi nożyczkami. Wytnij cztery siedmiomilimetrowe szklane rurki za pomocą dostępnego w handlu zestawu i włóż drut elektrody do szklanych rurek. Umieść klej u podstawy szklanych rurek, aby połączyć je z plastikiem.

Poczekaj, aż klej wyschnie, a następnie przetnij szklane rurki i druty za pomocą skalpela. Użyj super kleju, aby przymocować tworzywa sztuczne w żądanej kolejności obszarów docelowych. Nałóż żywicę epoksydową na plastik, aby związać ze sobą elektrody.

Weź gruby drut i zrób pętlę na jednym końcu, zanurz pętlę w roztworze żywicy epoksydowej i umieść ją na plastiku, upewniając się, że gruby drut leży płasko, aby ten drut mógł służyć jako uchwyt. Przytnij drut na dwa centymetry. Pogrupuj druty i zeskrob jeden milimetr izolowanych końców skalpelem.

Zegnij elektrody korowe i oddziel przewody. Za pomocą drobnych kleszczy wykonaj pętlę na końcu każdego drutu. Trzymaj 10-pinowy zestaw słuchawkowy z hemostatem i użyj drewnianej końcówki bawełnianego wacika, aby nałożyć minimalną ilość topnika na szpilki.

Za pomocą drewnianej końcówki bawełnianego wacika nałóż topnik na pętle z drutu. pętle przewodów do 10-pinowego zestawu słuchawkowego. Wysusz zestaw słuchawkowy, aby zapobiec zwarciu między stykami.

Weź cienki drut o długości około 0,05 do 0,008 cala jako przewody odniesienia i uziemienia i zdejmij plastik z jednego końca. Zrób pętlę na drugim końcu drutu. odizolowaną stronę przewodów odniesienia i uziemienia do odpowiednich pinów.

Trzymając gruby drut, nałóż cement do kranioplastyki wokół mikroelektrod, zwłaszcza w miejscu, w którym druty łączą się z kołkami. Unikaj dotykania właściwych końców elektrody cementem. Po wyschnięciu cementu umieść żywicę epoksydową u podstawy szklanych rurek, drutów mikroelektrod prążkowia i wokół całej elektrody.

Unikaj dotykania końców elektrod żywicą epoksydową. Zapisy potencjału pola lokalnego wykonano z prawej kory przedruchowej, lewego VL, prążkowia i SNR. Początek napadu stwierdzono jako odchylenie ścieżki napięcia co najmniej dwukrotnie w stosunku do wartości podstawowej.

Wykres widma mocy przedstawia rozkład częstotliwości dla zarejestrowanych lokalnych nagrań potencjału. Opóźnienia początku napadu można było porównać między każdą strukturą z dokładnością do milisekundy. Na końcu nagrań zastosowano impuls prądowy, aby zaznaczyć i potwierdzić położenie końcówek elektrod tworzących zmianę.

Jeśli mikroelektrody są skonstruowane dla różnych struktur mózgu, pamiętaj, aby zmodyfikować przerwy między przewodami zgodnie ze współrzędnymi stereotaktycznymi pożądanej struktury. Umieść elektrody o głębokiej strukturze w szklanych rurkach i wyreguluj długości mikroelektrod. Następnie przymocuj tworzywa sztuczne w wymaganej kolejności.