Name: Dostrajanie trybów kurczliwości i deformacji aktywnych zespołów na bazie aktyny in vitro: od dwuwymiarowych sieci aktywnych do kropli ciekłokrystalicznych (Wideo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-07-11T16:50:00.000+00:00
Duration: 6 min 48 s
Description: Poznaj metody przygotowania dwuwymiarowych zespołów aktynowych z oczyszczonych białek. Protokół poprawia powtarzalność badań materiałów biologicznych i miękkich układów fizycznych.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dziękujemy Toddowi Thorensonowi, Mike'owi Murrellowi, Jennifer Ross, Patrickowi McCallowi i innym członkom laboratoriów Gardel i Kovar (University of Chicago) za użyteczne dyskusje podczas opracowywania metod. M.A.C. i S.R. byli częściowo wspierani przez Clemson University's College of Engineering Computing and Applied Sciences Undergraduate Research Opportunity Grants, a V. J. A. był wspierany przez Clemson Biophysics REU w ramach NSF Award #2349368 z finansowaniem z DBI i Programy EPSCoR. Praca ta była również częściowo wspierana przez program EPSCoR Narodowej Fundacji Nauki w ramach nagrody NSF #OIA-1655740, częściowo przez i częściowo przez program Clemson Creative Inquiry + Undergraduate Research.

<ol><li>Marchetti, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrodynamics+of+soft+active+matter%5BTitle%5D)+AND+%22Rev+Mod+Phys%22%5BJournal%5D)">Hydrodynamics of soft active matter.</a> Rev Mod Phys. 85 (3), 1143-1189 (2013).</li>
<li>Needleman, D., Dogic, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Active+matter+at+the+interface+between+materials+science+and+cell+biology%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mater%22%5BJournal%5D)">Active matter at the interface between materials science and cell biology.</a> Nat Rev Mater. 2 (9), 17048(2017).</li>
<li>Murrell, M., Oakes, P. W., Lenz, M., Gardel, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Forcing+cells+into+shape%3A+the+mechanics+of+actomyosin+contractility%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Mol+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Forcing cells into shape: the mechanics of actomyosin contractility.</a> Nat Rev Mol Cell Biol. 16 (8), 486-498 (2015).</li>
<li>Cáceres, R., Abou-Ghali, M., Plastino, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reconstituting+the+actin+cytoskeleton+at+or+near+surfaces+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Biochim+Biophys+Acta+Mol+Cell+Res%22%5BJournal%5D)">Reconstituting the actin cytoskeleton at or near surfaces in vitro.</a> Biochim Biophys Acta Mol Cell Res. 1853 (11), 3006-3014 (2015).</li>
<li>Burla, F., Mulla, Y., Vos, B. E., Aufderhorst-Roberts, A., Koenderink, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+mechanical+resilience+to+active+material+properties+in+biopolymer+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Phys%22%5BJournal%5D)">From mechanical resilience to active material properties in biopolymer networks.</a> Nat Rev Phys. 1 (4), 249-263 (2019).</li>
<li>Bezanilla, M., Gladfelter, A. S., Kovar, D. R., Lee, W. -L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cytoskeletal+dynamics%3A+a+view+from+the+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Cytoskeletal dynamics: a view from the membrane.</a> J Cell Biol. 209 (3), 329-337 (2015).</li>
<li>Alfaro-Aco, R., Petry, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Building+the+microtubule+cytoskeleton+piece+by+piece%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">Building the microtubule cytoskeleton piece by piece.</a> J Biol Chem. 290 (28), 17154-17162 (2015).</li>
<li>Sanchez, T., Chen, D. T. N., DeCamp, S. J., Heymann, M., Dogic, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spontaneous+motion+in+hierarchically+assembled+active+matter%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Spontaneous motion in hierarchically assembled active matter.</a> Nature. 491 (7424), 431-434 (2012).</li>
<li>Foster, P. J., Fürthauer, S., Shelley, M. J., Needleman, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Active+contraction+of+microtubule+networks%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Active contraction of microtubule networks.</a> eLife. 4, e10837(2015).</li>
<li>Murrell, M. P., Gardel, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((F-actin+buckling+coordinates+contractility+and+severing+in+a+biomimetic+actomyosin+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">F-actin buckling coordinates contractility and severing in a biomimetic actomyosin cortex.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 109 (51), 20820-20825 (2012).</li>
<li>Weirich, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Liquid+behavior+of+cross-linked+actin+bundles%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Liquid behavior of cross-linked actin bundles.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 114 (9), 2131-2136 (2017).</li>
<li>Alvarado, J., Sheinman, M., Sharma, A., MacKintosh, F. C., Koenderink, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+motors+robustly+drive+active+gels+to+a+critically+connected+state%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Phys%22%5BJournal%5D)">Molecular motors robustly drive active gels to a critically connected state.</a> Nat Phys. 9 (9), 591-597 (2013).</li>
<li>Keber, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topology+and+dynamics+of+active+nematic+vesicles%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Topology and dynamics of active nematic vesicles.</a> Science. 345 (6201), 1135-1139 (2014).</li>
<li>Zhang, R., Kumar, N., Ross, J. L., Gardel, M. L., De Pablo, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interplay+of+structure%2C+elasticity%2C+and+dynamics+in+actin-based+nematic+materials%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Interplay of structure, elasticity, and dynamics in actin-based nematic materials.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 115 (2), E124-E133 (2018).</li>
<li>Schaller, V., Weber, C., Semmrich, C., Frey, E., Bausch, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Polar+patterns+of+driven+filaments%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Polar patterns of driven filaments.</a> Nature. 467 (7311), 73-77 (2010).</li>
<li>Blanchoin, L., Boujemaa-Paterski, R., Sykes, C., Plastino, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Actin+dynamics%2C+architecture%2C+and+mechanics+in+cell+motility%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Rev%22%5BJournal%5D)">Actin dynamics, architecture, and mechanics in cell motility.</a> Physiol Rev. 94 (1), 235-263 (2014).</li>
<li>Bendix, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+quantitative+analysis+of+contractility+in+active+cytoskeletal+protein+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">A quantitative analysis of contractility in active cytoskeletal protein networks.</a> Biophys J. 94 (8), 3126-3136 (2008).</li>
<li>Köhler, S., Schaller, V., Bausch, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structure+formation+in+active+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Mater%22%5BJournal%5D)">Structure formation in active networks.</a> Nat Mater. 10 (6), 462-468 (2011).</li>
<li>Backouche, F., Haviv, L., Groswasser, D., Bernheim-Groswasser, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Active+gels%3A+dynamics+of+patterning+and+self-organization%5BTitle%5D)+AND+%22Phys+Biol%22%5BJournal%5D)">Active gels: dynamics of patterning and self-organization.</a> Phys Biol. 3 (4), 264-273 (2006).</li>
<li>Svitkina, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Actin+cell+cortex%3A+structure+and+molecular+organization%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Actin cell cortex: structure and molecular organization.</a> Trends Cell Biol. 30 (7), 556-565 (2020).</li>
<li>Reymann, A. -C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Actin+network+architecture+can+determine+myosin+motor+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Actin network architecture can determine myosin motor activity.</a> Science. 336 (6086), 1310-1314 (2012).</li>
<li>Reymann, A. -C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nucleation+geometry+governs+ordered+actin+network+structures%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Mater%22%5BJournal%5D)">Nucleation geometry governs ordered actin network structures.</a> Nat Mater. 9 (10), 827-832 (2010).</li>
<li>Vogel, S. K., Petrasek, Z., Heinemann, F., Schwille, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myosin+motors+fragment+and+compact+membrane-bound+actin+filaments%5BTitle%5D)+AND+%22eLife%22%5BJournal%5D)">Myosin motors fragment and compact membrane-bound actin filaments.</a> eLife. 2, e00116(2013).</li>
<li>Liebe, N. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bioinspired+membrane+interfaces%3A+controlling+actomyosin+architecture+and+contractility%5BTitle%5D)+AND+%22ACS+Appl+Mater+Interfaces%22%5BJournal%5D)">Bioinspired membrane interfaces: controlling actomyosin architecture and contractility.</a> ACS Appl Mater Interfaces. 15 (9), 11586-11598 (2023).</li>
<li>Thoresen, T., Lenz, M., Gardel, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thick+filament+length+and+isoform+composition+determine+self-organized+contractile+units+in+actomyosin+bundles%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Thick filament length and isoform composition determine self-organized contractile units in actomyosin bundles.</a> Biophys J. 104 (3), 655-665 (2013).</li>
<li>Stachowiak, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Self-organization+of+myosin+II+in+reconstituted+actomyosin+bundles%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Self-organization of myosin II in reconstituted actomyosin bundles.</a> Biophys J. 103 (6), 1265-1274 (2012).</li>
<li>Winkelman, J. D., Bilancia, C. G., Peifer, M., Kovar, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ena%2FVASP+enabled+is+a+highly+processive+actin+polymerase+tailored+to+self-assemble+parallel-bundled+F-actin+networks+with+fascin%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Ena/VASP enabled is a highly processive actin polymerase tailored to self-assemble parallel-bundled F-actin networks with fascin.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 111 (11), 4121-4126 (2014).</li>
<li>Stam, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Filament+rigidity+and+connectivity+tune+the+deformation+modes+of+active+biopolymer+networks%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Filament rigidity and connectivity tune the deformation modes of active biopolymer networks.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 114 (47), E10037-E10045 (2017).</li>
<li>Weirich, K. L., Stam, S., Munro, E., Gardel, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Actin+bundle+architecture+and+mechanics+regulate+myosin+II+force+generation%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Actin bundle architecture and mechanics regulate myosin II force generation.</a> Biophys J. 120 (10), 1957-1970 (2021).</li>
<li>Scholz, M., Weirich, K. L., Gardel, M. L., Dinner, A. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuning+molecular+motor+transport+through+cytoskeletal+filament+network+organization%5BTitle%5D)+AND+%22J+Soft+Mat%22%5BJournal%5D)">Tuning molecular motor transport through cytoskeletal filament network organization.</a> J Soft Mat. 16 (8), 2135-2140 (2020).</li>
<li>Spudich, J. A., Watt, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+regulation+of+rabbit+skeletal+muscle+contraction%5BTitle%5D)+AND+%22J+Biol+Chem%22%5BJournal%5D)">The regulation of rabbit skeletal muscle contraction.</a> J Biol Chem. 246 (15), 4866-4871 (1971).</li>
<li>Li, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+F-actin+bundler+%CE%B1actinin+Ain1+is+tailored+for+ring+assembly+and+constriction+during+cytokinesis+in+fission+yeast%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Biol+Cell%22%5BJournal%5D)">The F-actin bundler αactinin Ain1 is tailored for ring assembly and constriction during cytokinesis in fission yeast.</a> Mol Biol Cell. 27 (11), 1821-1833 (2016).</li>
<li>Skau, C. T., Kovar, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fimbrin+and+tropomyosin+competition+regulates+endocytosis+and+cytokinesis+kinetics+in+fission+yeast%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Biol%22%5BJournal%5D)">Fimbrin and tropomyosin competition regulates endocytosis and cytokinesis kinetics in fission yeast.</a> Curr Biol. 20 (16), 1415-1422 (2010).</li>
<li>Vignjevic, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+fascin+in+filopodial+protrusion%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Role of fascin in filopodial protrusion.</a> J Cell Biol. 174 (6), 863-875 (2006).</li>
<li>Margossian, S. S., Lowey, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+myosin+and+its+subfragments+from+rabbit+skeletal+muscle%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Preparation of myosin and its subfragments from rabbit skeletal muscle.</a> Methods Enzymol. 85, 55-71 (1982).</li>
<li>Palmgren, S., Ojala, P. J., Wear, M. A., Cooper, J. A., Lappalainen, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interactions+with+PIP2%2C+ADPactin+monomers%2C+and+capping+protein+regulate+the+activity+and+localization+of+yeast+twinfilin%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Interactions with PIP2, ADPactin monomers, and capping protein regulate the activity and localization of yeast twinfilin.</a> J Cell Biol. 155 (2), 251-260 (2001).</li>
<li>Craig, S. W., Lancashire, C. L., Cooper, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+smooth+muscle+alphaactinin%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">Preparation of smooth muscle alphaactinin.</a> Methods Enzymol. 85, 316-321 (1982).</li>
<li>Verkhovsky, A. B., Borisy, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nonsarcomeric+mode+of+myosin+II+organization+in+the+fibroblast+lamellum%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Nonsarcomeric mode of myosin II organization in the fibroblast lamellum.</a> J Cell Biol. 123 (3), 637-652 (1993).</li>
<li>LeBel, R. G., Goring, D. A. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Density%2C+viscosity%2C+refractive+index%2C+and+hygroscopicity+of+mixtures+of+water+and+dimethyl+sulfoxide%5BTitle%5D)+AND+%22J+Chem+Eng+Data%22%5BJournal%5D)">Density, viscosity, refractive index, and hygroscopicity of mixtures of water and dimethyl sulfoxide.</a> J Chem Eng Data. 7 (1), 100-101 (1962).</li>
<li>Lengsfeld, A. M., Lowt, I., Wielandt, T., Dancker, P., Hasselbach, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+phalloidin+with+actin%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci+U+S+A%22%5BJournal%5D)">Interaction of phalloidin with actin.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 31, 846(1974).</li>
<li>Chowdhury, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendronized+fluorosurfactant+for+highly+stable+waterinfluorinated+oil+emulsions+with+minimal+interdroplet+transfer+of+small+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Dendronized fluorosurfactant for highly stable waterinfluorinated oil emulsions with minimal interdroplet transfer of small molecules.</a> Nat Commun. 10 (1), 4546(2019).</li>
<li>Alvarado, J., Mulder, B. M., Koenderink, G. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alignment+of+nematic+and+bundled+semiflexible+polymers+in+cellsized+confinement%5BTitle%5D)+AND+%22J+Soft+Mat%22%5BJournal%5D)">Alignment of nematic and bundled semiflexible polymers in cellsized confinement.</a> J Soft Mat. 10 (14), 2354-2364 (2014).</li>
<li>Weirich, K. L., Israelachvili, J. N., Fygenson, D. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bilayer+edges+catalyze+supported+lipid+bilayer+formation%5BTitle%5D)+AND+%22Biophys+J%22%5BJournal%5D)">Bilayer edges catalyze supported lipid bilayer formation.</a> Biophys J. 98 (1), 85-92 (2010).</li>
<li>Tan, A. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Topological+chaos+in+active+nematics%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Phys%22%5BJournal%5D)">Topological chaos in active nematics.</a> Nat Phys. 15 (10), 1033-1039 (2019).</li>
<li>Nasirimarekani, V., Strübing, T., Vilfan, A., Guido, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tuning+the+properties+of+active+microtubule+networks+by+depletion+forces%5BTitle%5D)+AND+%22Langmuir%22%5BJournal%5D)">Tuning the properties of active microtubule networks by depletion forces.</a> Langmuir. 37 (26), 7919-7927 (2021).</li>
<li>Heymann, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+on+solgel+transformations%3A+I.+the+inverse+solgel+transformation+of+methylcellulose+in+water%5BTitle%5D)+AND+%22Trans+Faraday+Soc%22%5BJournal%5D)">Studies on solgel transformations: I. the inverse solgel transformation of methylcellulose in water.</a> Trans Faraday Soc. 31, 846(1935).</li>
</ol>

Autorzy nie mają żadnych konfliktów do ujawnienia.

Istnieje wiele czynników związanych z produkcją powtarzalnych zespołów aktyny. Jednym z najbardziej krytycznych elementów tworzenia powtarzalnych, możliwych do przeanalizowania danych jest powierzchnia szkła nakrywkowego komory próbki. Białka w próbkach aktyny in vitro, zwłaszcza miozyna, są niezwykle lepkie i przylegają do nieobrobionych lub źle obrobionych powierzchni szklanych, sprawiając, że próbka staje się bezużyteczna (ryc. 5A). Omówiliśmy standardowy sposób przygotowania pow...

<a href="https://app.jove.com/t/6643">This corrects</a> the article <a href="https://dx.doi.org/10.3791/68127">10.3791/68127</a>

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/68127">Tuning the Contractility and Deformation Modes of Active Actin-Based Assemblies In Vitro: From Two-Dimensional Active Networks to Liquid Crystal Drops</a>. The Affiliations&#160;section was&#160;updated.

Erratum: Tuning the Contractility and Deformation Modes of Active Actin-Based Assemblies In Vitro: From Two-Dimensional Active Networks to Liquid Crystal Drops

Aktywne materiały biologiczne leżą u podstaw procesów mechanicznych w różnych procesach fizjologicznych, w tym transportu wewnątrzkomórkowego, migracji komórek, regulacji kształtu komórki i generowania siły biologicznej1,2,3. Zespoły in vitro układów cytoszkieletowych, zbudowane z oczyszczonych i zmodyfikowanych składników białkowych samoorganizujących się w buforze, są uznanym narzędziem do charakteryzowania podstawowych procesów biofizycznych i biochemicznych4,5,6,7. Te uproszczone systemy modelowe pozwalają na badanie białek bez złożoności środowisk komórkowych, co pozwala na określenie ról poszczególnych składników. Oprócz wspierania podstawowych badań biologicznych, zespoły cytoszkieletu in vitro są również szeroko rozwijane jako systemy eksperymentalne do badania materiałów ciekłokrystalicznych oraz aktywnych lub niezrównoważonych8,9,10,11,12,13,14,15.
Aktyna jest kluczowym biopolimerem w zespołach cytoszkieletu, regulującym mechanikę i dynamikę komórek poprzez siły motoryczne i napędzane polimeryzacją3,16. Eksperymenty z mikroskopią fluorescencyjną umożliwiają wizualizację zmian strukturalnych sieci aktynowej podczas procesów takich jak skurcz napędzany silnikiem i wiązanie aktyny przez sieciowanie białek. Obrazowanie trójwymiarowych sieci aktynowych w trakcie ich przebudowy przez wbudowane białka motoryczne rzuciło światło na rolę środków sieciujących aktyny w kurczeniu się sieci i tworzeniu wzorców12,17,18,19. Jednak quasi-dwuwymiarowe sieci aktynowe pokonują wyzwania związane z obrazowaniem z wystarczającą rozdzielczością czasoprzestrzenną, aby uchwycić zmiany strukturalne sieci. Dodatkowo, quasi-dwuwymiarowe struktury aktynowe o dużej gęstości są bliższym naśladownictwem zespołów komórkowych, takich jak gęsta kora aktynowa komórki20. Strategie wytwarzania quasi-dwuwymiarowych struktur aktynowych obejmowały przyłączanie białek zarodkujących aktynę do szkiełka nakrywkowego21,22, sprzężenie aktyny z powierzchnią za pomocą cząsteczek łącznikowych10,23,24, tworzenie gęstych wiązek aktyny przyczepionych do koralików na powierzchni szkiełka nakrywkowego25,26oraz stężenie włókien aktynowych na powierzchni szkiełka nakrywkowego za pomocą molekularnych środków tłumiących10,27.
Tutaj szczegółowo opisujemy metodę tworzenia powtarzalnych modeli zespołów opartych na aktynie i jak je modyfikować, aby przygotować warianty od aktywnych sieci do quasi-2D ciekłych kryształów i kropel nematycznych. Wcześniej używaliśmy podobnych metod do badania powstawania oddzielonych fazowo kropelek ciekłokrystalicznych krótkich włókien aktynowych z dodatkiem środka sieciującego11, zmiany w trybach deformacji sieci aktynowej generowanej przez miozynę II (np. wyboczenie filamentu lub względne przesuwanie) z sieciowaniem i łącznością filamentu28, różnice w siłach generowanych przez miozynę II na wiązkach aktyny o różnych odstępach i zgodności29oraz miozyna II transport30. Zastosowanie białek sieciujących i białek cappingujących aktynę pozwala na systematyczną zmianę długości włókien aktynowych i architektury składania.

<table><tbody><tr><td>Probówka do mikrowirówek 0,6 ml</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-408-123</td><td></td></tr><tr><td>008-Fluorosurfaktant</td><td>RAN Biotechnologies</td><td>00115081361-6525</td><td>Alternatywa dla wstępnie zmieszanego roztworu</td></tr><tr><td>008-FluoroSurfaktant w HFE7500</td><td>RAN Biotechnologies</td><td>008-FluoroSurfaktant-2wtH-50G</td><td>Wstępnie zmieszany roztwór</td></tr><tr><td>2-merkaptoetanol (&beta;-merkaptoetanol)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>63689</td><td>Numer CAS: 60-24-2 Roztwór podstawowy: 25 mM w wodzie MilliQ, przechowywany w temperaturze 4 & stopni; Kwas</td></tr><tr><td>C 4-(2-hydroksyetylo)piperazyno-1-etanosulfonowy (HEPES)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H3375</td><td>Numer CAS: 7365-45-9</td></tr><tr><td>5 min Epoksyd</td><td>Devcon</td><td>14250</td><td></td></tr><tr><td>Cytoszkielet aktynowy, Inc.</td><td></td><td>AKL99-A</td><td>>99% czysty mięsień szkieletowy królika (alternatywa dla oczyszczania)</td></tr><tr><td>Aktyna (znakowana rodaminą)</td><td>Cytoszkielet, Inc.</td><td>AR05-A</td><td>Mięśnie szkieletowe królika (Alternatywnie do oczyszczania)</td></tr><tr><td>Adenozyna 5&prime;-trifosforan (ATP)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A6419</td><td>Numer CAS: 34369-07-8 Roztwór podstawowy: 25 mM w wodzie MilliQ, przechowywać w temperaturze -20 &deg; C Przechowywać w stanie zamrożonym, aby uniknąć hydrolizy</td></tr><tr><td>Chlorek wapnia (CaCl2)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C5670</td><td>Numer CAS: 10043-52-4</td></tr><tr><td>Białko zamykające (mysz)</td><td></td><td></td> <td>Oczyszczone z nadekspresji w E.coli za pomocą HisTag Roztwór podstawowy: 20 mM w buforze białkowym ograniczającym w temperaturze -80 & stopni; C</td></tr><tr><td>Katalaza z wątroby bydlęcej</td><td>Sigma Aldrich</td><td>C9322</td><td>Numer CAS: 9001-05-2 Roztwór podstawowy: 85 ku/ml, przechowywać z oksydazą glukozową w temperaturze -20&; C</td></tr><tr><td>Szkło osłonowe</td><td>Fisherbrand</td><td>12544C</td><td>borokrzemian, #1,5, 24 mm x 40 mm Fisherbrand not Fisher Finest</td></tr><tr><td>D-(+)-Glucose</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G8270</td><td>Numer CAS: 50-99-7 Roztwór podstawowy: 225 mg/ml w wodzie MilliQ, przechowywać w temperaturze -20 &deg; C</td></tr><tr><td>Dithiothreitol (DTT)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>3860-OP</td><td>Numer CAS: 3483-12-3 Roztwór podstawowy: 1 M w wodzie MilliQ, przechowywać w temperaturze -20 &deg; C</td></tr><tr><td>Taśma dwustronna</td><td>3M</td><td>3136</td><td></td></tr><tr><td>Alchohol etylowy 200 Proof</td><td>PHARMCO</td><td>111000200</td><td>Numer CAS: 64-17-5 200 proof</td></tr><tr><td>Kwas glikolu etylenowego-bis(2-aminoetylo)-N,N,N&prime;,N&prime;-tetraoctowy (EGTA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E3889</td><td>Numer CAS: 67-42-5</td></tr><tr><td>Kwas etylenodiaminotetraoctowy (EDTA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>E9884</td><td>Numer CAS: 60-00-4</td></tr><tr><td>Oksydaza glukozowa</td><td>Sigma Aldrich</td><td>345386</td><td>Numer CAS: 9001-37-0 Roztwór podstawowy: 135 mg/ml w wodzie MilliQ, przechowywać z katalazą w temperaturze -20 &; C</td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Sigma Aldrich</td><td>356352M</td><td>Numer CAS: 56-81-5</td></tr><tr>Bioodczynniki<td>Imidazol</td><td>Fisher&nbsp;</td><td>BP305-50</td><td>Numer CAS: 288-32-4</td></tr><tr><td>Chlorek magnezu (MgCl2)</td><td>Odczynniki Fisher&nbsp;</td><td>BP214</td><td>Numer CAS: 7786-30-3, 7791-18-6</td></tr><tr><td>Metyloceluloza</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M0512</td><td>Numer CAS: 9004-67-5 15 centytypuazowe</td></tr><tr><td>szkiełka mikroskopowe Zwykła</td><td>mikroskopia elektronowa Sciences / Złota pieczęć</td><td>63710-05</td><td>&nbsp; 3 "x1", grubość 1 mm</td></tr><tr><td>MilliQ woda Millipore</td><td></td><td>CUFBI001</td><td>Ultraczysta woda</td></tr><tr><td>Novec-7500 Płyn inżynieryjny</td><td>3M</td><td>7100134816</td><td>Alternatywny do wstępnie zmieszanego roztworu</td></tr><tr><td>Chlorek potasu (KCl)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P3911</td><td>Numer CAS: 7447-40-7</td></tr><tr><td>Fosforan potasu (KPO4)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P3786</td><td>Numer CAS: 7758-11-4</td></tr><tr><td>Aceton do mięśni szkieletowych królika w proszku</td><td>Pel-Freez Biologicals</td><td>41995-1</td><td>Stosowany do oczyszczania aktyny (alternatywa dla zakupu) Przechowywać około 30 mM w buforze aktyny G w temperaturze -80 & stopni; C</td></tr><tr><td>Azydek sodu</td><td>Sigma Aldrich</td><td>71289</td><td>Numer CAS: 26626-22-8</td></tr><tr><td>Tetrametylorodamina-C6-maleimid</td><td>AnaSpec</td><td>AS-81445</td><td>Numer CAS: 174568-68-4 Używany do oczyszczania aktyny (alternatywa dla zakupu) Przechowywać około 30 mM w buforze aktynowym G w temperaturze -80 stopni C. Używany do etykietowania aktyny (alternatywa do zakupu)</td></tr> <tr><td>Kwas solny Tris (Tris HCl)</td> <td>Sigma Aldrich</td><td>648317</td><td>Numer CAS: 1185-53-1</td></tr><tr><td>Kąpiel ultradźwiękowa</td><td>Emerson Branson&nbsp;</td><td></td><td></td>CPX2800H</tr></tbody></table>

dostrajanie trybów kurczliwości i deformacji aktywnych zespołów na bazie aktyny in vitro: od dwuwymiarowych sieci aktywnych do kropli ciekłokrystalicznych

Tuning the Contractility and Deformation Modes of Active Actin-Based Assemblies In Vitro: From Two-Dimensional Active Networks to Liquid Crystal Drops

Materiały oparte na cytoszkieletach aktynowych są szeroko badane jako modelowe materiały komórkowe do wyjaśnienia fizycznych mechanizmów mechaniki komórki, takich jak regulacja kształtu i wytwarzanie siły, a także intrygujące miękkie materiały polimerowe. W tej metodzie szczegółowo opisujemy tworzenie zespołów na bazie aktyny in vitro przy użyciu oczyszczonego białka do badań mikroskopii fluorescencyjnej. Polimeryzujemy długie włókna aktynowe w komorze próbki i używamy zubożenia polimeru do stłoczenia włókien w dwuwymiarowej (2D) splątanej sieci na powierzchni pasywowanej warstwą środka powierzchniowo czynnego. Dodanie włókien miozyny II mięśni szkieletowych w obecności adenozynotrifosforanu (ATP) indukuje skurcz sieci aktyny. Łącząc filamenty aktynowe z środkiem sieciującym, dostrajamy kurczliwość montażu, przechodząc od materiału, który się wygina, do materiału, który ślizga się w mikroskali. Zmniejszając długość włókien aktynowych poprzez kopolimeryzację aktyny w obecności białka zamykającego, dostrajamy materiał z sieci 2D do ciekłego kryształu. Sieciowanie rozproszonych krótkich filamentów aktynowych powoduje tworzenie się trójwymiarowych (3D) kropelek ciekłokrystalicznych.

Szeroki zakres struktur aktynowych można tworzyć w systemach modelowych z wykorzystaniem oczyszczonych białek, stosując ogólną strategię opisaną w niniejszych metodach, polegającą na polimeryzacji aktyny w filamenty w obecności białek akcesoryjnych, które modyfikują architekturę kompleksu (Rysunek 1). Gdy aktyna polimeryzuje w filamenty bez udziału białek sieciujących lub białek zamykających, tworzy splątane sieci filamentów (Rysunek 1A). Dodanie białek sieciują...

Tutaj prezentujemy metody przygotowania quasi-dwuwymiarowych (2D) splątanych, usieciowanych i ciekłokrystalicznych zespołów aktynowych z oczyszczonych białek.

Dostrajanie trybów kurczliwości i deformacji aktywnych zespołów na bazie aktyny in vitro: od dwuwymiarowych sieci aktywnych do kropli ciekłokrystalicznych

Actin cytoskeleton-based materials are widely investigated as model cellular materials to elucidate physical mechanisms of cell mechanics, such as shape ...

Badania te koncentrują się na miękkich materiałach biologicznych i mają na celu zbadanie podstawowych mechanizmów fizycznych, które regulują kształt i organizację oraz materiałów inspirowanych komórkami biologicznymi.Systemy biologiczne i modele in vitro są z natury złożone i obarczone wieloma pułapkami, a przygotowanie próbek ma kluczowe znaczenie dla ich odtwarzalności. Protokół ten ma na celu poprawę odtwarzalności w tych systemach.Wyniki te torują drogę do wykrywania, charakteryzowania mechanizmów i zrozumienia funkcji sił fizycznych i biomateriałów. Można to uogólnić na różne biopolimery i organelle.[Narrator] Na początek przygotuj próbkę do załadowania, dodając pięć mikrolitrów buforu 10XF do mikroprobówki wirówkowej i dodaj objętość dejonizowanej wody destylowanej tak, aby końcowa objętość próbki wynosiła 50 mikrolitrów po dodaniu pozostałych składników. Odpipetować jeden mikrolitr 25% beta-merkaptoetanolu, jeden mikrolitr 225 miligramów na mililitr glukozy, jeden mikrolitr mieszaniny oksydazy glukozowej i 85 000 jednostek na mililitr katalizatora do roztworu. Następnie dodaj jeden mikrolitr 25 milimolowych ATP i 10 mikrolitrów 2%, 15 centypuazowej metylocelulozy i dokładnie wymieszaj pipetując. Aby rozpocząć polimeryzację aktyny, wymieszaj nieznakowaną aktynę ze znakowaną aktyną i dodaj mieszaninę aktyny do przygotowanego roztworu buforowego F. Pipetować roztwór w górę i w dół, aby zapewnić prawidłowe wymieszanie. Pozostaw aktynę do polimeryzacji w temperaturze pokojowej w probówce do mikrowirówki. Następnie, aby przygotować komórkę przepływową, umieść dwa kawałki taśmy dwustronnej równolegle do siebie na całej szerokości szkiełka mikroskopowego, aby utworzyć granice kanału komórki przepływowej. Umieść szkiełko nakrywkowe nad kanałem taśmy, upewniając się, że jest prostopadłe do szkiełka mikroskopu. Dociśnij obszar szkiełka nakrywkowego, który styka się z taśmą dwustronną, aby uzyskać dobre uszczelnienie i wyeliminować kieszenie powietrzne. Za pomocą żyletki odetnij nadmiar taśmy ze szkiełka mikroskopowego i szkiełka nakrywkowego tak, aby jedyna widoczna taśma znajdowała się w kanale próbki. Aby przygotować komorę na próbkę cylindra na dwie próbki odblokowywacza, należy najpierw przepłukać szkiełko nakrywkowe etanolem, wodą i etanolem. Wysuszyć go przefiltrowanym powietrzem. Nałożyć cienką warstwę pięciominutowej żywicy epoksydowej, aby przykleić szklany cylinder do klonowania do szkiełka nakrywkowego. Dodaj 3,5 mikrolitra roztworu środka powierzchniowo czynnego do przezroczystej lub jasnej probówki mikrowirówkowej. Nie mieszając, odpipetować pięć mikrolitrów roztworu aktyny na wierzch warstwy olejowego środka powierzchniowo czynnego. Zamknij rurkę. Przytrzymaj górną część probówki mikrowirówki i przesuń dolną krawędź, aby utworzyć początkową pianę z widoczną emulsją i kontynuuj trzepanie, aż utworzy jednolite mikroemulsje. Przed załadowaniem komory przepływowej wymieszaj niewielką ilość pięciominutowej żywicy epoksydowej. Aby załadować celę przepływową, należy odpipetować od jednego do trzech mikrolitrów roztworu środka powierzchniowo czynnego w oleju do kanału próbki komory przepływowej, aby utworzyć małą zatyczkę, która zwilży kanał. Przed dodaniem próbki przechylić komorę przepływową, aby usunąć wszelkie szczeliny powietrzne, które tworzą się z powodu cofającego się menisku środka powierzchniowo czynnego oleju. Natychmiast odpipetować zawiesinę emulsji roztworu próbki do wejścia do komory przepływowej w celu napełnienia kanału. Uszczelnij każdą stronę kanału komory przepływowej pięciominutową żywicą epoksydową. Aby załadować komorę na próbkę cylindra dla próbek niezawierających emulsji, należy odpipetować pięć mikrolitrów roztworu środka powierzchniowo czynnego w oleju na dno komory szklanego cylindra. Przechyl i powoli obróć szkiełko nakrywkowe, aby pokryć powierzchnię i dolny cylinder roztworem środka powierzchniowo czynnego. Usuń nadmiar roztworu środka powierzchniowo czynnego oleju za pomocą pipety, aby uzyskać cienką warstwę, jednocześnie zapobiegając całkowitemu odparowaniu oleju. Natychmiast dodać roztwór próbki do komory. Przykryj komorę małym kawałkiem politetrafluoroetylenu lub taśmą PTFE, aby zapobiec parowaniu i przepływowi. Zamontuj próbkę na stoliku mikroskopu. Rozpocznij obrazowanie poklatkowe aktyny za pomocą obiektywu 20x, 40x, 60x lub 100x z zanurzeniem w oleju lub wodzie, aby zapewnić wystarczająco wysoką aperturę numeryczną do obrazowania o wysokiej rozdzielczości. W przypadku polimeryzacji w komorze na próbkę należy pozostawić polimeryzację na około 30 minut lub do momentu, gdy nie będzie widocznego wydłużenia lub ruchu filamentu. Dodaj środek sieciujący do próbki, a następnie dodaj miozynę w postaci wstępnie spolimeryzowanych włókien, powoli pipetując około połowy całkowitej objętości do próbki. Na koniec rozpocznij obrazowanie poklatkowe. Reprezentatywny obraz fluorescencji konfokalnej splątanej sieci aktynowej pokazano tutaj. Splątana sieć aktynowa jest równomiernie rozłożona na powierzchni. Jasne plamy na tym zdjęciu reprezentują nakładanie się włókien, podczas gdy ciemne obszary wskazują na minimalną obecność aktyny. Fluktuacje termiczne prowadzą do lokalnych zmian intensywności i widocznego wygięcia filamentów aktynowych. Dodatek miozyny II powoduje wygięcie i reorganizację sieci aktynowej z widoczną akumulacją miozyny puncta w długim czasie. Skurcz sieci zależy od stężenia miozyny i stężenia ATP. W usieciowanych sieciach aktynowych skurcz indukowany miozyną prowadzi do skoordynowanego ruchu w dłuższych skalach w porównaniu z sieciami splątanymi.

tuning-contractility-deformation-modes-active-actin-based-assemblies

Research

JoVE Journal

Biology

Biologia

Demonstrujemy przygotowanie elastomerów ciekłokrystalicznych (LCE) na bazie siloksanów i epoksydów oraz nanokompozytów LCE. LCE są charakteryzowane pod względem odkształcenia odwracalnego, uporządkowania ciekłokrystalicznego i sztywności. Jako potencjalne zastosowanie demonstrujemy ich zastosowanie jako substratów reagujących na kształt w niestandardowym urządzeniu do aktywnej hodowli komórek.

Otrzymywanie monodomenowych elastomerów ciekłokrystalicznych i nanokompozytów elastomerów ciekłokrystalicznych

Tutaj wytwarzamy 3D polimerowe mikro/nano struktury, w których zarówno kształt, jak i wyrównanie molekularne mogą być zaprojektowane z dokładnością do skali nanometrowej za pomocą bezpośredniego pisma laserowego. Indukowane światłem odkształcenia kilku typów mikrostruktur elastomerów ciekłokrystalicznych mogą być kontrolowane w skali mikroskopowej.

Siłowniki do oświetlenia o dowolnym kształcie -- Wytwarzanie i sterowanie uruchamianiem w skali mikroskopowej

To badanie przedstawia metodologię przygotowania 3D, biodegradowalnych, pianopodobnych rusztowań komórkowych opartych na biokompatybilnych elastomerach ciekłokrystalicznych o łańcuchu bocznym (LCE). Eksperymenty z mikroskopią konfokalną pokazują, że podobne do piany LCE pozwalają na przyłączanie komórek, proliferację i spontaniczne ustawianie mioblastów C2C12.

Synteza biokompatybilnych pianek elastomerowych ciekłokrystalicznych jako rusztowań komórkowych do przestrzennych hodowli komórkowych 3D

Celem protokołu jest stworzenie ciekłokrystalicznych warstw polimerowych, które mogą mechanicznie oscylować pod wpływem ciągłego promieniowania światłem. Szczegółowo opisujemy koncepcję folii wolnostojących, od metody wyrównywania ciekłokrystalicznego po fotoaktywację. Protokół eksperymentalny zastosowany do przygotowania tego materiału ma szerokie zastosowanie.

Przygotowanie sieci ciekłokrystalicznych do makroskopowych ruchów oscylacyjnych indukowanych światłem

Ten artykuł opisuje proces mikroprzepływowy i parametry przygotowania cząstek uruchamiających z elastomerów ciekłokrystalicznych. Proces ten pozwala na przygotowanie cząstek uruchamiających oraz zmianę ich wielkości i kształtu (od spłaszczonej do silnie prolate, morfologii rdzeń-powłoka i janus), a także wielkość aktywacji.

Przygotowanie mikroprzepływowe siłowników z elastomeru ciekłokrystalicznego

Prezentujemy protokoły prostych testów mikroprzepływowych filamentów aktynowych, w połączeniu z mikroskopią fluorescencyjną, które pozwalają na dokładne monitorowanie poszczególnych filamentów aktynowych w czasie rzeczywistym, podczas sekwencyjnego wystawiania ich na działanie różnych roztworów białkowych.

Wykorzystanie mikrofluidyki i mikroskopii fluorescencyjnej do badania dynamiki składania pojedynczych filamentów i wiązek aktyny

Ten protokół opisuje tworzenie wspieranych dwuwarstw lipidowych oraz dodawanie włókien cytoszkieletu i białek motorycznych w celu zbadania dynamiki odtworzonych, połączonych błoną sieci cytoszkieletu za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej.

Rekonstytucja minimalnych kory aktynowych połączonych błoną na podpartych dwuwarstwach lipidowych

W tym manuskrypcie demonstrujemy eksperymentalne techniki hermetyzacji cytoszkieletu F-aktyny w gigantyczne jednowarstwowe pęcherzyki lipidowe (zwane również liposomami) oraz metodę tworzenia warstwy F-aktyny naśladującej korę mózgową na wewnętrznej wlotce błony liposomowej.

In vitro Rekonstrukcja cytoszkieletu aktynowego w gigantycznych pęcherzykach jednowarstwowych

Ten artykuł przedstawia protokoły do inżynierii i charakteryzowania przestrajalnych trójwymiarowych sieci kompozytowych współsplątanych filamentów aktynowych i mikrotubul. Kompozyty przechodzą aktywną restrukturyzację i ruch balistyczny, napędzany silnikami miozyny II i kinezyny, a także są dostrojone przez względne stężenia aktyny, mikrotubul, białek motorycznych i pasywnych środków sieciujących.

Rekonstrukcja i charakterystyka kompozytów aktynowo-mikrotubulowych o regulowanej dynamice i mechanice napędzanej silnikiem

Przedstawione tutaj są metody przygotowania aktywnych nematyków z mikrotubul i silników kinezynowych, w tym przygotowanie i budowa białek oraz wykorzystanie studni do aktywnego uwięzienia nematycznego.

Formowanie, ograniczanie i obserwacja aktywnych nematyk opartych na mikrotubulach

W tej pracy zastosowano podejście do rekonstytucji in vitro do badania poroselastyczności żeli z aktomiozyną w kontrolowanych warunkach. Określa się ilościowo dynamikę żelu aktomiozyny i wbudowanego rozpuszczalnika, za pomocą której wykazano porosprężystość sieci. Omawiamy również wyzwania eksperymentalne, typowe pułapki i znaczenie dla mechaniki cytoszkieletu komórkowego.

Mechanika (poro-)elastycznych kurczliwych sieci aktomyozyny jako modelowy układ cytoszkieletu komórkowego

Poznaj metody przygotowania dwuwymiarowych zespołów aktynowych z oczyszczonych białek. Protokół poprawia powtarzalność badań materiałów biologicznych i miękkich układów fizycznych.

Dostrajanie trybów kurczliwości i deformacji aktywnych zespołów na bazie aktyny in vitro: od dwuwymiarowych sieci aktywnych do kropli ciekłokrystalicznych (Wideo) | JoVE Journal

Dostrajanie trybów kurczliwości i deformacji aktywnych zespołów na bazie aktyny in vitro: od dwuwymiarowych sieci aktywnych do kropli ciekłokrystalicznych

Przeglądaj więcej filmów