Waiting
Processando Login

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

כירורגיה שאנט, צנתור לב ימני, וכלי הדם Morphometry במודל חולדה עבור נגרמת זרימה ריאתי עורקי יתר לחץ דם

Published: February 11, 2017 doi: 10.3791/55065
Automatic Translation
1, 2, 2, 1, 1, 1, 1
1Center for Congenital Heart Diseases, Department of Pediatric Cardiology, Beatrix Children's Hospital, University Medical Center Groningen, University of Groningen, 2Research and Development Facility, University Medical Center Groningen, University of Groningen

Introduction

המטרה של שיטה זו היא ליצור מודל לשחזור עבור חמורה, יתר לחץ דם ריאתי עורקים-induced זרימה אצל חולדות למדוד המודינמי שלה עיקרון ונקודות קצה histopathological.

יתר לחץ דם עורקי ריאתי (PAH) היא תסמונת קלינית שמקיף עלייה הדרגתית התנגדות בכלי הדם הריאתיים מובילה לכישלון ומוות החדר הימני. בתוך ספקטרום המחלה המוסמך של מחלות יתר לחץ דם ריאתי (PH), PAH היא הצורה החמורה ביותר ואחד שנשארה ללא תרופה 1. Arteriopathy הבסיסית PAH מאופיינת צורה טיפוסית של שיפוץ כלי דם כי עלול לחסום כאן את לומן הכלי. Muscularization של הלא muscularized שיט היפרטרופיה נורמלי של השכבה כלי המדיאלי נחשבים תופעות המחלה מוקדם PAH, נראים גם בצורות אחרות של PH 2, והם חשבו להיות הפיך 3. כפי PAHdvances, שכבת intimal מתחילה לשפץ, בסופו של דבר להרכיב נגעי מאפיין neointimal 2. שיפוץ Neointimal מסוג בכלי הדם הריאתיים היא בלעדית PAH ונחשב כיום להיות 4 בלתי הפיך.

כפי PAH היא מחלה נדירה, התקדמות בהבנה שלה pathobiological ופיתוח של טיפולים חדשניים הסתמך במידה רבה על מודלים של בעלי חיים. Monocrotalin (MCT) מודל בחולדות הוא מודל להיט אחד פשוט כי כבר, והוא עדיין, שימוש תכוף. MCT הוא רעלן שגורם לפגיעה arterioles ריאתי ו -5 דלקת האזורי. 60 מ"ג / ק"ג MCT מוביל לעלייה בלחץ בעורק הריאה הממוצע (mPAP), התנגדות בכלי הדם הריאתיים (PVR), וכן היפרטרופיה החדר הימני (RVH) לאחר 3 - 4 שבועות 6. Histomorphology מאופיין היפרטרופיה המדיאלי מבודד ללא נגעים neointimal 5. MCTמודל עכברוש ובכך מייצג צורה מתונה של PH, ולא PAH, למרות שהוא מוצג בכינויו האחרון.

אצל ילדים עם PAH הקשורים שנט מולד שמאל לימין (PAH-CHD), זרימת דם מוגבר ריאתי נחשבת על ההדק החיוני לפיתוח נגעי neointimal 7, 8, 9. בחולדות, זרימת הדם הריאתי מוגבר יכול להיגרם על ידי יצירת שנט בין אבי העורקים בבטן ואת הווריד הנבוב, טכניקה תוארה לראשונה בשנת 1990 10. חלופות כדי ליצור זרימת ריאתי מוגבר הן על ידי pneumonectomy חד-צדדית או על ידי subclavian כדי השקה עורק הריאה 11. חסרונות רעיוניים של מודלים אלה כוללים צמיחת מפצת פוטנציאל של הריאה הנותרת הפעלת מסלול אדפטיבית המושרה על ידי pneumonectomy, או של פגיעת iatrogenic של כלי הדם הריאתי עקבכדי השקת עורק ריאה, הן הכובל את ההשפעות של זרימת דם הריאתי מוגברת.

כאשר מחלף aorto-caval נוצר מוגבר זרימת דם הריאתי מושרה כמו להיט שני בחולדות MCT שטופלה, נגעי neointimal מאפיינים להתרחש, צורה חמורה של PAH וכישלון חדר ממני משויך (RVF) לפתח 3 שבועות לאחר מוגבר לזרום 12. ההתקדמות המודינמי של PAH במודל זה ניתן להעריכם vivo על ידי אקו ו צנתור לב נכון. Histomorphology וסקולרית, עובי בדפנות כלי הדם, מידת ספיגה arteriolar, ופרמטרים לכישלון החדר הימני מהווים את עמודי התווך של אפיון vivo לשעבר של PAH.

שיטה זו מתארת ​​פרוטוקולים מפורטים שנט-caval aorto הניתוח (AC-מחלף), צנתור לב תקין, והערכה איכותית וכמותית של histomorphology וסקולרית.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

הנהלים הקשורים בנושאים בעלי חיים אושרו על ידי הוועד המרכזי ההולנדי לניסויים בבעלי חיים וועדת טיפול בבעלי חיים בבית חרונינגן המרכז הרפואי האוניברסיטאי (NL). חולדות Wistar ולואיס שניהם עם משקולות בין 180 ו -300 גרם שימשו.

שיכון התאקלמות 1.

  1. לאחר הגעה במתקן בעלי החיים המרכזי, חולדות בית בקבוצות של 5 בכל כלוב. במהלך תקופת התאקלמות 7-יום, להרגיל את חולדות הטיפול אנושי, אבל לא לבצע כל פרוצדורות.

הכנת הזרקה 2. סטרילי Monocrotalin

  1. עבור 1 מ"ל של 60 מ"ג / מ"ל ​​monocrotalin (MCT) פתרון, שוקל 60 מ"ג של monocrotalin בתוך שפופרת 2 מ"ל. הוסף 700 μL של 0.9% NaCl. הוספת 200 μL של 1 M HCl. מומלץ לחמם את הפתרון בצינור מתחת למי מערבולת ברז חמימים זה. השתמש 6 N NaOH להביא את ה- pH לכיוון 7.0. השתמש בטכניקה סטרילית להכנת MCT להזרקה לתוך מכרסמים. להזריק 1 מ"ל של סטרילית 60 מ"ג / מ"ל ​​פתרון MCT לק"ג תת עורית בצוואר (0.3 מ"ל של 60 מ"ג / מ"ל ​​MCT עבור עכברוש 300 גרם). הערה: אנחנו מעדיפים שלא להשתמש בכמויות קטנות יותר בשל כך גוברים הסיכויים מהחומר המוזרק לא יהיה מתאים.

כירורגיה 3. אבי העורקים-caval שאנט

  1. הַרדָמָה.
    1. ממלא את חדר האינדוקציה עם 5% isoflurane / 100% O 2 (זרימה: 1 L / min) ומקום החולדה בתא. בדקו עומק נאות של ההרדמה על ידי ביצוע קמצוץ בוהן אחורי. לשקול את העכברוש.
    2. לגלח ולנקות את הבטן על שטח הוא כ 8 ס"מ ו -3 ס"מ. מניחים את החולדה על גבו על מחצלת חום (37 מעלות צלזיוס) מכוסה מחצלת סטרילי.
    3. מניח את החוטם עם מסכה / ברדס אוורור עם 2 - 3% isoflurane / 100% O 2 (זרימה: 1 L / min). בדוק את עומק ההרדמה על ידי ביצוע קמצוץ בוהן אחורי. החל העין משחה למניעת יובש לאחר הרדמה.
  2. Sur שאנטגרי.
    1. לשפשף את העור עם כלוריד-hexidine לחיטוי. להזריק 0.01 מ"ג / ק"ג עצירות תת עורי על שיכוך כאבים שלאחר הניתוח.
    2. השתמש בכלים סטריליים לניתוחים. עושים חתך בסכין אזמל # 10 בבטן על קו האמצע, החל מיום 1 ס"מ מתחת לסרעפת הארכת למטה כדי בדיוק מעל איברי המין.
    3. הרם את המעי עם מקלון צמר גפן, מכסים את המעיים גזה סטרילי, רטוב (0.9% NaCl), ומניחים אותם אל הצד השמאלי של החיה.
    4. השתמש צמר גפן כדי להפריד את הקרומים המחברים את אב העורקים בבטן ואת הווריד הנבוב הנח אל הרקמות הסובבות.
      הערה: אין לנתח את הקרומים בין אבי העורקים ואת הווריד הנבוב.
    5. בעזרת מלקחיים קיסם, להסיר את השומן אבי העורקים perivascular רק מעל הסתעפות, רק בצד ימין של האאורטה ורק באתר שבו המחט תוכנס.
    6. השתמש צמר גפן להפריד את הווריד הנבוב האאורטה מ Supe מ"מ 2rior לאתר שבו המחט תוכנס כדי ליצור מרחב מלחציים Biemer.
    7. באזור זה, המקום הראשון ליגטורה רופף (5-0 תפר) סביב האאורטה. ליצור מתח על ליגטורה ידי צבת מהדק קוצ'ר עליו, ולאחר מכן למקם את קוצ'ר עדיפה על (איור 1 א) החתך. מניחים את Biemer מהדק פשוט מעולה המיתר (1A דואר Figur).
    8. באמצעות מקלון צמר גפן, לדחוס את הווריד הנבוב כמו distally ככל האפשר כדי לחסום את זרימת (איור 1 א). מחט בנד (18 G בפרוטוקול זה) לתוך בזווית של 45 מעלות, עם הצבעה פתח כלפי חוץ (איור 1 א).
    9. בזווית של 90 מעלות, להכניס את המחט באב העורקים, רק מעל ההסתעפות, עם הפתח של מחט מצביע לשמאל (איור 1 א). לתפעל את קצה המחט שמאלה ולהכניס אותו לתוך הווריד הנבוב.
      הערה: חוד המחט אמור להיות visible ב הווריד הנבוב (איור 1B).
    10. השתמש מקלון צמר גפן שני כדי לדחוף את הדם שנותר האאורטה מחוץ לאתר ההכנסה כדי למנוע פקקו. יבש את האזור סביב המחלף עם גזה סטרילית על מנת דבק להיצמד כראוי.
    11. משוך את המחט כולו מתוך האאורטה ומיד להחיל טיפת דבק רקמות על גבי האתר לנקב האאורטה. ודא שלא דבק המקלון לרקמה. Unclamp האאורטה.
    12. בדוק את המחלף באופן ידני על ידי משיכת ושחרור ליגטורה על הפרוקסימלי אבי העורקים אל המחלף. התרופפות צריכה לצבוע את דיסטלי הווריד הנבוב לצינורית באדום בוהק וליצור מערבולת באתר המחלף.
      הערה: החמרה תהפוך את דם הווריד הנבוב חזרה לאדום כהה.
    13. מניחים את המעיים בחזרה החיה. סגור את שכבת השריר ואת העור עם 4-0 התפרים resorbable. לאוורר את חיה עם 100% O 2 להתאושש מההרדמה.
      הערה: אין להשאיר ani mal ללא השגחה עד שהוא שב להכרתו מספיק כדי לשמור שכיבה sternal.
  3. ניתוח דמה.
    1. לבצע את כל התהליך המתואר לעיל למעט החדרת המחט לתוך אבי העורקים.
  4. טיפול לאחר ניתוח.
    1. מניחים את החולדה בכלוב יחיד לתוך באינקובטור ב 37 מעלות צלזיוס עד למחרת בבוקר.
    2. בסביבות 6 שעות לאחר הניתוח, מזריקים 0.01 מ"ג / ק"ג עצירות תת עורי על שיכוך כאבים שלאחר הניתוח. חזור למחרת בבוקר אם החולדה מראה סימנים של אי נוחות.
      הערה: 3 הימים הראשונים לאחר הניתוח, חולדות נוטים לאכול ולשתות פחות (זה חשוב במיוחד כאשר האוכל או מי שתייה מעורבבים עם תרופות). רוב החולדות להראות נורמלית התנהגות 3 ימים לאחר הניתוח. אם לא, לעקוב מקרוב. הרזיה העולה על 15% ב 1 בשבוע נחשב נורמלי, וחולדות כזה צריך להיות מורדמים על ידי מיצוי של נפח הדם במחזור לאחר הרדמה.

"Jove_title"> 4. פיתוח של PAH

הערה: בפרוטוקול זה, החיה מורדמת על ידי המיצוי של נפח דם במחזור לאחר הרדמה.

  1. להקריב 1 יום לאחר הניתוח (MF8) עבור התגובות הסלולר ופונקציונלי מוקדם לזרימת דם ריאתי מוגבר (למשל, עד-רגולציה של גנים או גורמי שעתוק מוקדם).
  2. להקריב 1 שבוע לאחר הניתוח (MF14) עבור פנוטיפ כלי הדם PAH בשלב מוקדם (היפרטרופיה המדיאלי ללא נגעים neointimal).
  3. להקריב 2 שבועות לאחר הניתוח (MF21) עבור פנוטיפ כלי הדם PAH בשלב מתקדם (מסומן היפרטרופיה המדיאלי והיווצרות neointimal) עם הגבהה קלה RVP ו mPAP.
  4. להקריב 3 שבועות לאחר הניתוח (MF28) עבור פנוטיפ כלי דם סופנית PAH (חסימת neointimal מסומנת) וההעלאה חזקה RVP ו mPAP. סימנים קליניים של אי ספיקת החדר הימני נפוצים בשלב זה.
  5. הקורבן לאחר 28 יום (MF-RVF) עקב חוסר החדר הימני הקשורים PAH (RVF), מוגדר קלינית כמו קוצר נשימה, עייפות קשה, וירידה במשקל (<10% ב 1 בשבוע). לסיים חולדות כאשר אחד הסימנים הללו הוא ההווה. לעתים קרובות, חולדות לפתח תסמינים אלו בין ימים 28 ו -35 ו, אם נותר ללא שמירה, למות באופן ספונטני במהלך מרווח הזמן הזה.

5. ימין לב צנתור

  1. הַרדָמָה.
    1. ממלאים את החדר אינדוקציה עם 5% isoflurane / 100% O 2 (זרימת: 1 L / min) ומניחים את העכברוש בתיבה. בדקו עומק נאות של ההרדמה על ידי ביצוע קמצוץ בוהן אחורי. לשקול את העכברוש.
    2. לגלח ולנקות את הצוואר בחלק הימני-הגחון של חולדה, עבור פרוטוקול אקוקרדיוגרפיה, בית החזה והבטן העליונה.
    3. מניח את החולדה על גבה על מחצלת חום (37 מעלות צלזיוס) ומקום חוטם במנדף אוורור מסכה / עם 2 - 3% isoflurane / 100% O 2 (זרימה: 1 L / min). החוטם צריך להיות מתמודד כלפי החוקר.
  2. פרוטוקול אקו.
    1. בצעו את אקו לפי הפרוטוקול שתואר על ידי בריטן et al. ב יופיטר 13.
  3. פרוטוקול צנתור.
    הערה: פרוטוקול זה משתמש צינורית נוקשה עם טיפ מתבצע כפופה 20 מעלות כדי להנחות את הקטטר סיליקון 15 סנטימטר עם מ"מ כדור 2 מהקצה. מחט 20-G עם הפתח שלה כפוף מעט לחלק הפנימי משמשת להוספת הצינורית לוריד הצוואר הימני (ראה רשימת חומרים). חולדות בכל שלב של התקדמות ושליטה PAH ניתן להשתמש בפרוטוקול זה.
    1. לחטא את הצוואר עם כלוריד-hexidine. ביצוע חתך 1.5 ס"מ עם להב אזמל # 10 בצד הימני-הגחוןשל הצוואר, מלשד עצם צווארון זכות העצם בלסת התחתון,.
    2. מורחים את רקמות באמצעות מספריים. בעזרת פינצטה, למשוך את הרקמות בעדינות בנפרד עד וריד הצוואר מופיע. לנתח את הקרומים סביב וריד הצוואר באמצעות מלקחיים קיסם.
    3. שים מתח על וריד הצוואר על ידי הצבת ליגטורה רופפת (5-0 תפר) ברחבי הספינה. הגדל את המתח ואת קלטת המיתר על מסכת אוורור (איור 2 א).
    4. Downstream של הכניסה לאתר, למקם ליגטורה רופף סביב הכלי להדק לאחר הקנייה היא באתרו כדי למנוע דליפה ואובדן לחץ.
    5. באמצעות הידיות של מלקחיים, מעט לכופף את קצה מחט 20-G עם פתח לחלק הפנימי לנהל את הצינורית עם קטטר.
    6. הצג את קצה מחט 20-G לווריד ובמהירות למקם את הצינורית המכילה את הקטטר בתוך הכלי. משוך את המחט, ולאחר מכן לסגור את ליגטורהכי היה מוכן בשלב 5.3.4.
    7. לנהל את הצינורית המכילה קטטר לתוך וריד הצוואר. הטיפ של הצינורית הוא בעיקול של 20 מעלות (ראה שלב 5.3.5). לתמרן את הצינורית תחת עצם הבריח ולקדם קצת להיכנס אטריום ימין (איור 2 ג).
    8. כדי להזין את החדר הימני, תכוון את קצה של צינורית שמאלה, לכיוון הלב (איור 2 ד). על צג המיטה, עקומת לחץ RV אמורה להופיע, התאמת איור 2 ד.
    9. כאשר עקומת הלחץ RV הוא קבוע, לרשום את הלחץ החדר הימני הסיסטולי והדיאסטולי 1 (sRVP1 / dRVP1).
    10. לתפעל את הקצה של הצינורית שמאלה ולמעלה. לקדם את הקטטר בתוך צינורית (איור 2E).
    11. לקדם את קטטר לתוך עורק הריאה הראשי (PA). אין התנגדות צריכה להיות מורגשת כאשר עובר את שסתום ריאתי.
      הערה: כאשר הקטטר נכנס עורק הריאה הראשי, דלחץ iastolic יעלה. על צג המיטה, עקומת לחץ הרשות אמורה להופיע, התאמת האיור 2E.
    12. כאשר עקומת הלחץ הרשות הוא קבוע, לרשום את סיסטולי, דיאסטולי, ולהתכוון הרשות בלחץ 1 (sPAP1, dPAP1, mPAP1).
    13. בהמשך לקדם את הקטטר בתוך הצינורית עד הכדור על קצה הצנתר מקבל תקוע בתוך עורק ריאה. שים את עקומת הלחץ על ירידת צג המיטה ולהתאים את העקומה לחץ טריז באיור 2F.
    14. כאשר עקומת לחץ טריז הוא קבוע, לרשום את סיסטולי, דיאסטולי, ולהתכוון לחץ טריז.
    15. משוך לאחור את הקטטר לאט ולאחר מכן למדוד ולרשום את הערכים עבור sPAP2, dPAP2, mPAP2, sRVP2, ו dRVP2, כמו בצג המיטה.
    16. כאשר ב RV, מעט למשוך בחזרה את הצינורית ואת קטטר כדי למדוד את מתכוון ברגע לחץ פרוזדורים (RAP). העקומה צריכה להתאים את עקומת RAP באיור 2A.
      לאTE: בפרוטוקול זה, החולדות מומתות לאחר פרוטוקול הצנתור על ידי המיצוי של נפח דם במחזור לאחר הרדמה.

6. הערכת מורפולוגיה Morphometry

הערה: בפרוטוקול זה, החיה מורדמת על ידי המיצוי של נפח דם במחזור לאחר הרדמה. חולדות בכל שלב של התקדמות ושליטה PAH ניתן להשתמש בפרוטוקול זה.

  1. אחרי הקרבה, להוציא את הריאות על ידי חיתוך קנה הנשימה על 5 מ"מ מעל הסתעפות הסימפונות ואת כלי המתחברים מהריאות אל הלב. מכניס את הריאות מלוחות קר. לנתח את הריאה השמאלית. חותך את הסמפונות בכירים עזבו ב ההסתעפות.
  2. ממלאים מזרק 50 מ"ל עם paraformaldehyde 4%, לצרף צינור עם צינורית כדי המזרק, ולתלות את המזרק כמטר מעל שולחן העבודה. התאימו את הצינורית של הסמפונות השמאלי הראשי כדי למלא את הריאות באופן פסיבי עם paraformaldehyde.טפל paraformaldehyde בזהירות.
  3. דגירת הריאה השמאלית ב paraformaldehyde למשך 48 שעות.
  4. מייבשים את הריאה השמאלית ידי דוגרים אותו ברצף באתנול 70% (1 ח), 80% אתנול (1 ח), 90% אתנול (1 ח), 100% אתנול (3 שעות), xylol (2 ח), וכן פרפין ( 2 h).
  5. שבץ הריאה השמאלית פרפין, עם hilum של הריאה מול הקלטת.
  6. הכתם מוטבע פרפין, 4-מיקרומטר סעיפים הריאות באמצעות מכתים Gieson Verhoeff או Elastica-ואן, לפי הוראות היצרן 29. ודאו רבדי אלסטי הם מובחנים היטב (כמו באיור 3). סרוק את הסעיפים מוכתמים בהגדלה 40X.
  7. מחלק את הריאות לתוך 4 רביעים. בכל רבע, למצוא 10 כלי בקוטר חיצוני <50 מיקרומטר (-acinar התוך) ו -10 כלי בקוטר חיצוני> 50 מיקרומטר (-acinar מראש). קח תמונה (2 x 40 תמונות לכל ריאה). זום פנימה באופן אקראי עד 20x הגדלה ולצלם כל כליבתחום של השקפה זו כדי למזער את הטית בחירה.
  8. אל תכלול כלי שיש להם יחס קוטר ארוך / קצר> 2, צורה מעגלית שלמה, או קריסה של יותר מרבע בדפנות כלי הדם.
    הערה: דוגמא כלי נשלל מוצגת באיור 3 ב להפוך כל תמונה על אותו הגדלה (40X) וכולל סרגל קנה מידה.
  9. ImageJ פתח את התמונה הראשונה. צייר קו ישר על בר המידה בתמונה להגדיר הסולם באמצעות "נתח" ו "קבע בקנה מידה." לקבלת "מרחק ידוע," להשתמש בערך על סרגל קנה המידה של התמונה. השתמש מיקרומטר (מיקרומטר) כיחידת אורך. הגדר את קנה המידה הגלובלי.
  10. באמצעות "בחירות חופשיות," למתוח קו על הגבול הפנימי של האזור לומינל (איור 3), ולהשתמש "למדוד" (Crtl מ ') כדי למדוד את שטח זה. ואז, למתוח קו סביב Elast החיצוניic lamina (איור 3) כדי למדוד את שטח הכלי הכולל.
  11. חשב את luminal ו קוטר חיצוני ( משוואה ) באמצעות משוואה .
  12. לחשב את עובי הקיר באמצעות משוואה .
  13. חשב את היחס קיר / לומן באמצעות משוואה .
  14. לחשב את ציון החסימה באמצעות משוואה .
  15. ציון על כלי השיט muscularization (לא, חלקית, או מלאה muscularization) (איור 3 ב).
    הערה: כלי עם lamina כפול אלסטי יותר ממחצית ההיקף מוגדר לחלוטין muscularized. ספינות עם lamina כפול אלסטי פחות ממחצית ההיקף מוגדרות חלקית muscularized.
  16. ציון הספינה על הנוכחות של neointima (כן או לא) (איור 3 ג).
    הערה: כלי ללא lamina אלסטי פנימי מוגדר היטב בשילוב עם (לעתים קרובות האקסצנטרי) חסימת luminal מוגדר נגעי neointimal.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

תוצאות נציגים מוצגות באיור 4. התוצאות המוצגות להראות מאפיינים של MCT + FLOW בחולדות לואיס הקבוצות הבאות: בקרת (n = 3), MF8 (n = 5), MF14 (n = 5), MF28 (n = 5), ו MF-RVF ( n = 10). ניתוחים סטטיסטיים בוצעו באמצעות ANOVA חד כיווני עם תיקון בונפרוני.

60 מ"ג / ק"ג MCT ו הגדיל את יתרון זרימת הדם הריאתי על עלייה ממוצעת בלחץ החדר הימני הסיסטולי (sRVP) (23 ± 6 עד 56 ± 11 מ"מ כספית), הלחץ בעורק הריאה הסיסטולי (SPAP) (20 ± 4 ל 54.0 ± 10 מ"מ כספית ), ולהתכוון הלחץ בעורק הריאה (mPAP) (16 ± 3 כדי 36 ± 4 מ"מ כספית) לאחר 28 יום (MF28). הם נשארים באותה מידה גבוהה עד השלב שבו תקין כישלון חדרית מפתחת (MF-RVF) (איור 4). בשלבים PAH מוקדם (MF8 ו MF14), אין עליית sRVP, SPAP, ו mPAP הוא ציין. PAP הדיאסטולי זכותעלייה בלחץ משפט בשלבים מאוחר, אך לא באופן משמעותי. לחצים וודג לא השתנו באופן משמעותי במהלך התקדמות מחלה.

חדרית-לשמאל החדר הימני ועליות יחס משקל במחיצה משמעותית מן MF14 כדי MF-RVF, המציין היפרטרופיה החדר הימני. יחס המשקל הרטוב-אל-יבש של הכבד הוא גדל באופן משמעותי בשלב MF-RVF, המציין בצקת כבדה ואי ספיקת חדר ממני מוגדשת.

Muscularization כלי תוך acinar <50 מיקרומטר עליות בהדרגה במהלך התקדמות PAH. ספינות בגודל זה בדרך כלל אין שכבה המדיאלי שרירית בחולדות בקרה. בשעה MF14, כמעט מחצית הכלים האלה (43 ± 17%) יש תקשורתי מוחלט שרירים (כמו באיור 3 ב). בשעה MF28 ו MF-RVF, כמעט בכל עורקיק הוא muscularized (98.7 ± 2.5% ל- 100 ± 0%). נגעי Neointimal הראשונים להתרחשיש בבית MF21, תוך MF28 ו MF-RVF, כ -65% מכלל arterioles שכבה neointimal (כמו באיור 3C). Arteriolar מקיר אל לומן יחס ועשרות חסימה הן עלייה משמעותית מ MF14 כדי MF28 (בהתאמה, 10.4 ± 3.9 ל 71.5 ± 30 (קון: 7.1 ± 0.2) ו 20.0 ± 2.8 ל 54.7 ± 10.6 (קון: 12.2 ± 0.3) ). המאפיינים המודינמי ו histomorphological של התקדמות PAH ב MCT + FLOW בחולדות Wistar דומות 14.

איור 1
באיור 1. ייצוג סכמטי של ניתוח שאנט Aorto-caval. א) אבי העורקים הוא מתוח הידק נעלה הכניסה לאתר. הווריד הנבוב נדחס נח הכניסה לאתר. המחט, כפופה בזווית של 45 מעלות עם פתח אל החוץ, מוכנסת לתוך אב העורקים בזווית של 90 מעלות. B) אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 2
איור 2. Right לב צנתור נוהל ועקומות לחץ נציג. א) וריד הצוואר הימני הוא מתוח עם ליגטורה והדביק על מסכת האוורור. קטטר מושם לתוך וריד הצוואר. ב) לפקח מיטה מוצג גל לחץ חדר ממני. קטטר C) בתוך צינורית להציב אטריום ימין לאחר הקדמה לווריד הצוואר הימני. להלן: גל לחץ טיפוסי תקין פרוזדורים. קטטר D) בתוך צינורית להציב החדר הימני. להלן: א ventricul תקין טיפוסיגל הלחץ ar ב PAH סופנית. קטטר E) הוא מתקדם הצינורית להיכנס עורק הריאה הראשי. להלן: גל לחץ דם טיפוסי ריאתי. קטטר F) הוא התקדם לתוך עורקי הריאה עד גל לחץ טריז מוצג על המסך. להלן: גל לחץ טריז טיפוסי ריאתי. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 3
איור 3. מורפולוגיה כלי דם Morphometry בחולדות הבקרה PAH. א) כלי רגיל, שאינו muscularized עם ציון חסימה של 3.7%. ב) עורקיק muscularized לחלוטין עם ציון חסימה של 24.3%. C). פצע neointimal עם ציון חסימה של 54.1%. D) ה) מדידת שטח הספינה לומינל הכולל (בתוך סיר עם ייצוג סכמטי של נגע neointimal), כולל חישובים. הברים מייצגים 50 מיקרומטר. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 4
איור 4. נציג תוצאות של ופרמטרים המודינמיים ריאתית דם מורפולוגיה / Morphometry. הניתוחים הסטטיסטיים בוצעו באמצעות ANOVA חד כיווני עם תיקוני Bonferroni. ערכים מיוצגים כממוצע ± SEM. קון: שליטה; MF (monocrotalin + תזרים); RVF: כישלון חדרית נכון; s: סיסטולי; ד: הדיאסטולי; מ: ממוצע; RVP: לחץ החדר הימני; PAP: pulmonarלחץ דם y; RAP: לחץ פרוזדורים נכון. RV: החדר הימני; LV: החדר השמאלי; IVS: מחצה interventricular; BW: משקל גוף. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

שיטה זו מתארת ​​את הליך כירורגי של המחלף aorto-caval בחולדות טרום שטופלו MCT ליצור PAH זרימה המושרה ואת טכניקות כדי להעריך את המודינמי העיקרון ונקודות קצה histopathological המאפיינות PAH ודגם זה.

צעדים קריטיים בתוך הפרוטוקול ופתרון הבעיות

כירורגיה שלאחר הניתוח. במהלך ניתוח המחלף-caval aorto, השלב הקריטי ביותר הוא דיסקציה של הווריד הנבוב האאורטה. הממברנות התוחמים את הווריד אבי העורקים ואת הווריד צריך להיות גזור מספיק כדי ליצור 1) ראות טובה של האזור אבי העורקים, שבו המחט תוכנס, ושל עמדת מחט הווריד הנבוב לאחר הכניסה ו -2) מספיק מקום כדי מהדק את אבי העורקים מעל הכניסה לאתר. אותו ממברנות, לעומת זאת, משמשים גם כדי לנהל את הדם אאורטלי באמצעות האתר לנקב בין שני כלי השיט (איור 1). ביתור הממברנות מדי יהיהלגרום המחלף לדלוף. דבק רקמות עשוי לפתור את הדליפה, אבל זה יכול אז גם לחלחל לתוך המחלף, להתפשר גודל. כאשר הדבק הגביל זרימה דרך המחלף או גם על כלי השיט, הדבק ניתן להסיר בעדינות, אבל הקרע של הווריד הנבוב או של ממברנות העורכות את המחלף עלול להתרחש. הגודל או ההלימות של המחלף יכול להיות מוערך על ידי השוואת צבע הבדל מידת המערבולת של דם הווריד הנבוב במהלך דחיסה ופריסה של אב העורקים הפרוקסימלי עם מקלון צמר גפן.

מחט 18-G הוכחה ליצור מחלף נאות כי תוצאות בצורה עקבית לשחזור של התקדמות PAH אצל לואיס (מאמר זה) ו Wistar (ראה התייחסות 14) חולדות של עומס נפח חדר ממני 15. מחט 18-G יצרה את המחלף ביותר מאוזן היטב, עם הגדילה משמעותית זרימת ריאתי מחד ושיעור סיבוכים נמוך שלאחר ניתוח מצד השני. הבעיה שאחרי הניתוח הנפוצה ביותר היא ירידה במשקל. ירידה במשקל של עד 10% ב 1 שבוע מתרחשת בכל החולדות לאחר ניתוח, ככל הנראה בשל צריכה נמוכה בימים הראשונים לאחר הניתוח. חולדות מורדמות כאשר ההרזיה עולה על 15% ב 1 שבוע, כמו זה נחשב סימן של להיות חולה. צ'או נוזלי יכול לשפר האכלה בשבוע הראשון לאחר הניתוח. סיבוכים לאחר ניתוח נדירים הם אחורית איסכמיה רגל שיתוק מעיים, אשר גם לגרום המתת חסד. בסך הכל, פחות מ -5% של החולדות והורדמו לאחר ניתוח.

צנתור. צעדים קריטיים במהלך פרוטוקול הצנתור להתחיל עם הסדרת ההרדמה. עומק ההרדמה צריך להיות מינימאלי ככל האפשר (1.5 - 2% isoflurane בפרוטוקול זה), כהגדלת עומק הרדמה נראית להקטין חדר ממני ולחצי עורק ריאה, במיוחד אצל חולדות עם אי ספיקת חדר ממני. יש מדידות נטייה becomהדואר אמין כאשר הפרוטוקול עולה על 20 דקות משך.

השלב הקריטי הבא הוא מניפולציה של הקטטר ב RV ו בעורק הריאה הראשי. זה יכול להיות מאתגר. הסמקה את הקטטר יכולה לעזור להתעקם קטטר בדרכי היצוא כאשר הקצה תקוע של trabeculae RV. המניפולציה עצמה יכולה לגרום dyskinesia RV, אשר מראה עקומות הלחץ לא סדיר על הצג ליד המיטה. המבוא של קטטר לתוך החדר הימני ואת עורק הריאה צריך לפעול בצורה חלקה. כאשר הקצה נתקע על שסתום ריאתי, התנגדות מורגשת. לחיצה באמצעות התנגדות זו עלולה לגרום שסתום ריאתי קרע, אשר מגביל את האמינות של מדידות עוקבות.

בפרוטוקול הנוכחי, חולדות מוקרבות לאחר הצנתור. בתאוריה, אולם, וריד הצוואר ואת פצע כירורגים יכולים להיסגר לאחר קטטר הוא שלף, כחיות יכול לחיות רק עםהנותרים עזבו וריד הצוואר.

Morphometry. להערכת ציוני עובי חסימת קיר כלי דם, השלב הקריטי ביותר הוא לזהות את רבדי אלסטי. מניסיון, את סיכויי ההצלחה למטרה זו הוא הגדול ביותר עם מכתים היטב הבדיל Verhoeff או Elastica-ואן Gieson. בעוד לומן בדרך כלל ניתן להבחין בקלות מן אינטימה (כדי למדוד את שטח כלי דם פנימי), הבחנה של מדיה מן adventitia עשויה לדרוש מבט מקרוב (כדי למדוד את השטח וסקולרית החיצוני). חלק intimal פרוטוקולי מידה ועובי המדיאלי בנפרד, המגדיר אינטימה כשכבה בין לומן ואת lamina אלסטי הפנימי, והתקשורת כשכבה בין lamina אלסטי הפנימי והחיצוני. זה בדרך כלל אפשרי MCT בשלב מוקדם + FLOW PAH. עם זאת, arterioles ב מחלה מתקדמת, במיוחד נגעי neointimal, עשוי להציג רבדים מרובים אלסטי מאבד פעמים רבות את היושרה של רבדי אלסטי (

יתרונות ומגבלות של הוספת תזרים כמפעיל

שימוש זרימת דם הריאתי מוגבר ליצור PAH בחולדות יש מספר יתרונות, שהבולט להיות שזה טריגר פיסיולוגי ידוע (patho-) למחלה, אשר מעדיף תרגום PAH-CHD אדם (פיזיולוגית אייזנמנגר), אלא גם לצורות אחרות של PAH 9. המודל מאפשר להסדרת הזרימה ידי שינוי הגודל של המחט בעת יצירת מחלף AC.

ב huאיש PAH-CHD, סגירת המחלף תביא להיפוך PAH בשלב המוקדם של מחלה, אלא התקדמות של PAH בשלבי מחלה מתקדמים. סגירת המחלף in vivo תאפשר אחד כדי לחקור את ההשפעה של הסרת ההדק בנקודות זמן שונות של התקדמות המחלה ובכך לחקור את המנגנונים של (אי) היפוך של PAH. למרבה הצער, כיום, סגירת מחלף אינה ריאלית במודל הנוכחי. ההשפעות של נורמליזציה המודינמי (למשל, הסרת תזרים עודף הנורמליזציה של לחץ בעורק ריאה) בחולדות עם PAH זרימה קשורה יכולים להיחקר על ידי השתלת הריאה השמאלית מושפעת לעכברוש נמען עם מחזור רגיל. הוכח בעבר כי נורמליזציה המודינמי, בחולדות על ידי השתלת ריאות בבני אדם PAH-CHD על ידי סגירת מחלף לב, מוביל לרגרסיה של היפרטרופיה המדיאלי בתחילת שלבית 21 PAH. ההשפעות של המודינמי נורמליization בשלבים המתקדמים של-PAH זרימת ניסיוני כרגע לא ידוע.

משמעות ביחס מודלים חלופיים

מודל MCT יחיד להיט. הזרקה תת עורית של MCT 60 מ"ג / ק"ג היא דרך פשוטה ויעילה ליצור מודל עבור יתר לחץ דם ריאתי אצל חולדות. MCT גורם לפגיעה תא האנדותל ריאתי עורקי, ואחריו יתר של השכבה השרירית של עורקי הריאה 5. למרות המנגנונים המדויקים עדיין אינם ברורים, מסלולים שונים גורמי גדילה זוהו להשתתף היפרטרופיה המדיאלי הבאים MCT. התערבות תרופות על המסלולים האלה יש לעתים קרובות בהצלחה מופחתת היפרטרופיה המדיאלי mPAP ב-חולדות MCT. עם זאת, מאז היפרטרופיה המדיאלי הוא ידוע כבעל נטייה טבעית הפוכה בבני אדם 3 וגם תואר להפוך באופן ספונטני MCT-חולדות 16, את ההשפעה של טיפולים אלהיש מקום לבצע הערכת האנושות.

מודל MCT + FLOW הפעמים פגעו. תוספת של דם ריאתי מוגבר לזרום 7 ימים לאחר ההזרקה MCT אנושות משנה את הפנוטיפ (כלי דם) בצורה אופיינית שהזמן גרמן. בשעת MF14 (7 ימים לאחר האינדוקציה של זרימה מוגברת), בדרך כלל כלי שאינו muscularized להתחיל לפתח שכבה המדיאלי שרירים. בשעת MF21, מגדילת העובי המדיאלי ואת נגעי neointimal הראשונים להתרחש. בשעת MF28, שכבת neointimal פתחה ברוב המכריע של כלי. בין MF28 MF35 ו, רוב חולדות לפתח אי ספיקת לב ימנית וימותו sequellae שלה. מחקרים קודמים MCT + חולדות זרימה הראו כי תוספת של זרימת MCT מוביל ההפעלה של אשכולות ספציפיים של גנים. באשכולות מסוימים, זרימה התנגדה השפעות מושרות על ידי MCT; אצל אחרים, זרימת משופרת השפעות אלו, ואשכול אחד הכיל גנים שהיו במיוחד למעלה מוסדר לאחר זרימת 17. אחד גני זרימה ספציפית אלו הואבתגובת -1 צמיחה המוקדמת גן 14 (EGR-1). עיכוב מוקדם של EGR-1 הביא את ההנחתה של PAH והיווצרות neointimal ב MCT + חולדות תזרים 18. EGR-1 גם היה קשור שיפוץ neointimal ב PAH האדם (PAH-CHD ו PAH אידיופתית) 19. תצפיות אלה מוסיפים לראיות כי גדל או מופרעים זרימת הדם הריאתי הוא טריגר מרכיב חיוני לייצור neointimal.

הסינגל פגע מודל תזרים בלבד. בחולדות עם מחלף aorto-caval ללא הזרקת MCT, יתר לחץ דם ריאתי (mPAP> 25 מ"מ כספי) מפתחת בין 10 ו -20 שבועות לאחר מחלף אינדוקציה 20. בגיל 20 שבועות, היסטולוגיה בכלי הדם הריאתיים הוא נשלט על ידי היפרטרופיה המדיאלי של העורקים מראש acinar וניאו-muscularization של arterioles התוך acinar. למרות שחלק נגעים neointimal גם תוארו במודל זה 20, התפתחות נגעים אלה צריך t o יאושר לכמת.

מודל Sugen-היפוקסיה. מודל נוסף נפוץ PAH עם נגעים neointimal הוא עכברוש Sugen5416-היפוקסיה (SuHx). Sugen5416 בלוקים הגורם (vascular endothelial growth VEGF) הקולטן. זה גורם נזק לתאים האנדותל מפל איתות כי, בשילוב עם היפוקסיה, מעוררת אפופטוזיס אנדותל ושגשוגם 22. לאחר הזרקת Sugen5416, העכברוש הוא ממוקם בתא היפוקסי במשך 4 שבועות, שעליו PAH מפתחת. העכברוש הוא מחדש חשופים normoxia למשך 4 שבועות. תרכובות תרופתיות כי למקד-התנגדות אפופטוזיס האנדותל או מפלי האיתות של TGF-B ו- BMP הראו את הפוטנציאל להפוך את נגעי neointimal במודל זה 23, 24, 25. גרסה חדשה של מודל SuHx היא מודל Sugen-pneumectomy, שתוצאתה גם PAH החמור עם נגעי neointimal > 26. עם זאת, מודל זה לא כבר מאופיין במלואו עדיין. שיטה גנטית חדשנית לגרום PH בחולדות כרוכה מוטציה בגן BMP-קולטן 2, שתוצאתה muscularization המשמעותי (PH), אך לא היווצרות neointimal (PAH) 27.

תוצאות דומות דווחו לגבי מספר נגעי neointimal ומידת חסימת luminal ב סופנית של מטופל SuHx ו MCT + חולדות תזרים 28. ההבדלים העיקריים בין שני הדגמים הם 1) כי mPAP ב MCT + הזרימה בהדרגה מגבירה, ואילו SuHx, את mPAP הוכח להפחית בהדרגה לאחר מחדש חשיפת normoxia 28; 2) כי מודל MCT + הזרימה יודע בשלב מוקדם של מחלה, מאופיינת היפרטרופיה המדיאלי וחוסר תפקוד האנדותל; 3) כי הזמן שלוקח שני הדגמים להגיע סופנית-שם תקין כישלון חדרית מתחיל לפתח (4 שבועות MCT + זרימה, 8 שבועות SuHx)EF "> 28 שונה; ו -4) כי Sugen5416 מפריע בתוך מסלול מולקולרי (VEGF) שתפקידו בפתוגנזה של PAH עדיין לא ברור זה עלול לעכב את התרגום האנושי PAH..

יישומים או כיוונים עתידיים

שלבי המחלה הברורים של MCT + מודל התזרים לאפשר אחד 1) כדי לבדוק את המנגנונים של התקדמות מחלה (רקמה אנושית בכלל זמינה רק מן שלאחר מוות או נהלי explant) ו -2) כדי לבדוק התערבויות אסטרטגיות שונות. אסטרטגית מניעה יכולה להיות יזם על בניית המחלף (MF7). התערבות מוקדמת יכולה להיות יזם ב MF14. זה עשוי להיות רלוונטי כאסטרטגית טיפול לפני מחלף סגירה בילדים עם שנט לב מולד PAH הכלולה אשר התקדם לתוך האזור האפור בין מחלה הפיכה ובלתי הפיכה. אסטרטגיות היפוך יכול להיות יזם ב MF21 MF28 או. בשלבים מאוחרים יותר הן להראות נגעים neointimal, ביטוי של PAH סופנית. </ P>

לסיכום, התוספת של זרימת ריאתי עלתה ל MCT בחולדות יוצרת מודל של PAH המתקדמת וחמורה המחקה את התפתחות מחלה אנושית. צנתור לב ימני ואת הערכה איכותית וכמותית של histopathology וסקולרית מהווים את אבני היסוד של אפיון המחלה הזאת ומודלים אחרים עבור PAH.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Shunt Surgery
Sterile surgical gloves
Duratears Eye ointment Alcon 10380
Chloride-Hexidine
Cotton swabs
Histoacryllic tissue glue B. Braun Medical 1050052
Silkam 5-0 sutures black non-resorbable B. Braun Medical F1134027
Safil 4-0 sutures violet resorbable B. Braun Medical
18 G needle Luer NN1838R BD tip bent in 45 degrees orifice to the outside
Gauzes 10 x 10 cm Paul Hartmann 407825
Temgesic Buprenorphine RB Pharmaceuticals 5429 subcutaneous injection
Sodium Chloride 0.9%
Ventilation mask Rat
Scalple blade
Biemer clamp 18 mm, 5 mm opening  AgnTho 64-562
Heat mat
Kocher Clamp
Shaving machine
Microscope Leica
Right Heart Catheterization
Sterile surgical gloves
Eye ointment Duratears
Chloride-Hexidine
Cotton swabs
Gauzes 10 x 10 cm Paul Hartmann 407825
Silkam 5-0 sutures black non-resorbable B. Braun Medical F1134027
Needle 20 G Luer Tip slightly bent to the inside
Cannula 20 G Luer to introduce catheter, tip pre-formed in 20 degrees
Silastic Catheter 15 cm long 0.5 mm ball 2 mm from tip
Pressure transducer Ailtech
Bedside monitor Cardiocap/5 Datex-Ohmeda
Shaving machine
10 mL Syringe
Sodium Chloride 0.9% for flushing
Vascular Morphology
50 mL Syringe
4% Formaldehyde
18 G cannula with tube
Verhoef staining kit Sigma-Aldrich HT254 http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sigma/ht254?lang=en&region=US
Digital slide scanner Hamamatsu C9600
ImageJ
Elastic (Connective Tissue Stain)  Abcam ab150667 http://www.abcam.com/elastic-connective-tissue-stain-ab150667.html
http://www.abcam.com/ps/products/150/ab150667/documents/ab150667-Elastic%20Stain%20Kit%20(website).pdf

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Hoeper, M. M., Bogaard, H. J., Condliffe, R., et al. Definitions and diagnosis of pulmonary hypertension. J Am Coll Cardiol. 62, D42-D50 (2013).
  2. Stacher, E., Graham, B. B., Hunt, J. M., et al. Modern age pathology of pulmonary arterial hypertension. Am J Respir Crit Care Med. 186 (3), 261-272 (2012).
  3. Levy, M., Maurey, C., Celermajer, D. S., et al. Impaired apoptosis of pulmonary endothelial cells is associated with intimal proliferation and irreversibility of pulmonary hypertension in congenital heart disease. J Am Coll Cardiol. 49 (7), 803-810 (2007).
  4. Sakao, S., Tatsumi, K., Voelkel, N. F. Reversible or irreversible remodeling in pulmonary arterial hypertension. Am J Respir Cell Mol Biol. 43 (6), 629-634 (2010).
  5. Gomez-Arroyo, J. G., Farkas, L., Alhussaini, A. A., et al. The monocrotaline model of pulmonary hypertension in perspective. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 302 (4), L363-L369 (2012).
  6. Jones, J. E. Serial noninvasive assessment of progressive pulmonary hypertension in a rat model. Am J Physiol - Heart Circ Physiol. 283 (1), 364-371 (2002).
  7. Hoffman, J. I., Rudolph, A. M., Heymann, M. A. Pulmonary vascular disease with congenital heart lesions: Pathologic features and causes. Circulation. 64 (5), 873-877 (1981).
  8. van Albada, M. E., Berger, R. M. Pulmonary arterial hypertension in congenital cardiac disease--the need for refinement of the evian-venice classification. Cardiol Young. 18 (1), 10-17 (2008).
  9. Dickinson, M. G., Bartelds, B., Borgdorff, M. A., Berger, R. M. The role of disturbed blood flow in the development of pulmonary arterial hypertension: Lessons from preclinical animal models. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 305 (1), L1-L14 (2013).
  10. Garcia, R., Diebold, S. Simple, rapid, and effective method of producing aortocaval shunts in the rat. Cardiovasc Res. 24 (5), 430-432 (1990).
  11. Okada, K., Tanaka, Y., Bernstein, M., Zhang, W., Patterson, G. A., Botney, M. D. Pulmonary hemodynamics modify the rat pulmonary artery response to injury. A neointimal model of pulmonary hypertension. Am J Pathol. 151 (4), 1019-1025 (1997).
  12. van Albada, M. E., Schoemaker, R. G., Kemna, M. S., Cromme-Dijkhuis, A. H., van Veghel, R., Berger, R. M. The role of increased pulmonary blood flow in pulmonary arterial hypertension. Eur Respir J. 26 (3), 487-493 (2005).
  13. Brittain, E. Echocardiographic assessment of the right heart in mice. JVis Exp. (e81), (2013).
  14. Dickinson, M. G., Bartelds, B., Molema, G., et al. Egr-1 expression during neointimal development in flow-associated pulmonary hypertension. Am J Pathol. 179 (5), 2199-2209 (2011).
  15. Borgdorff, M. A., Bartelds, B., Dickinson, M. G., Steendijk, P., de Vroomen, M., Berger, R. M. Distinct loading conditions reveal various patterns of right ventricular adaptation. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 305 (3), H354-H364 (2013).
  16. Ruiter, G., de Man, F. S., Schalij, I., et al. Reversibility of the monocrotaline pulmonary hypertension rat model. Eur Respir J. 42 (2), 553-556 (2013).
  17. van Albada, M. E., Bartelds, B., Wijnberg, H., et al. Gene expression profile in flow-associated pulmonary arterial hypertension with neointimal lesions. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 298 (4), L483-L491 (2010).
  18. Dickinson, M. G., Kowalski, P. S., Bartelds, B., et al. A critical role for egr-1 during vascular remodelling in pulmonary arterial hypertension. Cardiovasc Res. 103 (4), 573-584 (2014).
  19. van der Feen, D. E., Dickinson, M. G., Bartelds, M. G., et al. Egr-1 identifies neointimal remodeling and relates to progression in human pulmonary arterial hypertension. Jheart lung transplant. 35 (4), 481-490 (2016).
  20. Rungatscher, A. Chronic overcirculation-induced pulmonary arterial hypertension in aorto-caval shunt. Microvasc Res. 94, 73-79 (2014).
  21. O'Blenes, S. B., Fischer, S., McIntyre, B., Keshavjee, S., Rabinovitch, M. Hemodynamic unloading leads to regression of pulmonary vascular disease in rats. J Thorac Cardiovasc Surg. 121 (2), 279-289 (2001).
  22. Sakao, S., Taraseviciene-Stewart, L., Lee, J. D., Wood, K., Cool, C. D., Voelkel, N. F. Initial apoptosis is followed by increased proliferation of apoptosis-resistant endothelial cells. FASEB J. 19 (9), 1178-1180 (2005).
  23. Spiekerkoetter, E. FK506 activates BMPR2, rescues endothelial dysfunction, and reverses pulmonary hypertension. J Clin Invest. 123 (8), 3600-3613 (2013).
  24. Nickel, N. P., Spiekerkoetter, E., Gu, M., et al. Elafin reverses pulmonary hypertension via caveolin-1-dependent bone morphogenetic protein signaling. Am J Respir Crit Care Med. 191 (11), 1273-1286 (2015).
  25. Meloche, J., Potus, F., Vaillancourt, M., et al. Bromodomain-containing protein 4: The epigenetic origin of pulmonary arterial hypertension. Circ Res. 117 (6), 525-535 (2015).
  26. Happé, C. M. Pneumonectomy combined with SU5416 induces severe pulmonary hypertension in rats. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 310 (11), L1088-L1097 (2016).
  27. Ranchoux, B., Antigny, F., Rucker-Martin, C., et al. Endothelial-to-mesenchymal transition in pulmonary hypertension. Circulation. 131 (11), 1006-1018 (2015).
  28. de Raaf, M. A. SuHx rat model: Partly reversible pulmonary hypertension and progressive intima obstruction. Eur Respy J. 44 (1), 160-168 (2014).
  29. Elastic (Connective Tissue Stain) Instructions for Use. , Available from: http://www.abcam.com/ps/products/150/ab150667/documents/ab150667-Elastic%20Stain%20Kit%20(website).pdf (1506).

Tags

רפואה גיליון 120 יתר לחץ דם עורקי ריאתי מודל עכברים מוגברת זרימת ריאתי המחלף caval-aorto / פיסטולה צנתור לב תקין מורפולוגיה וסקולרית
כירורגיה שאנט, צנתור לב ימני, וכלי הדם Morphometry במודל חולדה עבור נגרמת זרימה ריאתי עורקי יתר לחץ דם
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

van der Feen, D. E., Weij, M.,… More

van der Feen, D. E., Weij, M., Smit-van Oosten, A., Jorna, L. M., Hagdorn, Q. A. J., Bartelds, B., Berger, R. M. F. Shunt Surgery, Right Heart Catheterization, and Vascular Morphometry in a Rat Model for Flow-induced Pulmonary Arterial Hypertension. J. Vis. Exp. (120), e55065, doi:10.3791/55065 (2017).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter