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Bioengineering

微流体平台，用于用动态压缩刺激软骨细胞

Published: September 13, 2019 doi: 10.3791/59676
Automatic Translation
1, 2, 1, 3,4
1Department of Genetics, Cell Biology and Anatomy, University of Nebraska Medical Center, 2Department of Physiology and Pharmacology, Karolinska Institutet, 3Department of Mechanical and Materials Engineering, University of Nebraska-Lincoln, 4Nebraska Center for Materials and Nanoscience, University of Nebraska-Lincoln

Summary

本文提供了用于软骨细胞压缩的气动微流体装置的制造和特征的详细方法。

Abstract

众所周知，机械刺激可以调节细胞和组织的生物功能。最近的研究表明，压缩应力会改变生长板软骨结构，导致儿童长骨的生长调节。为了确定压缩应力在骨骼生长中的作用，我们创建了一种由气动压力驱动微流体装置，以动态（或静态）压缩嵌入在藻酸盐水凝胶缸中的生长板软骨细胞。在本文中，我们将介绍制造和描述此设备的详细方法。我们的协议的优点是：1） 在单个平台上的五个技术复制上可以生成五种不同幅度的压缩应力;2） 通过传统的光学显微镜很容易可视化细胞形态;3） 细胞可以快速分离从设备压缩后，以方便下游检测，4）该平台可应用于研究任何细胞类型的机械生物学，可以在水凝胶中生长。

Introduction

微工程平台是研究分子、细胞和组织水平生物学的宝贵工具，因为它们能够动态控制物理和化学微环境1、2、3 ，4，5，6，7，8.因此，可以同时以严格控制的方式测试多个假设。在生长板软骨的情况下，有越来越多的证据表明，通过作用调节骨骼生长，压缩应力在生长板软骨9、10、11、 12，13，14，15，16，17，18，19，20 21，22，23，24，25。然而，对压缩应力的作用机制——特别是应力如何指导生长板中软骨细胞柱的形成——知之甚少。

该协议的目标是创建一个气动微流体软骨细胞压缩装置26，以阐明生长板软骨细胞中的机械生物学机制（图1a-c）。该装置由两部分组成：气动驱动装置和藻酸盐凝胶结构。微流体气动驱动装置是利用聚二甲基硅氧烷（PDMS）在光和软光刻的基础上制造的。本装置包含 5 x 5 阵列的薄 PDMS 膜气球，可根据其直径不同地膨胀。藻酸盐凝胶结构由嵌入在5 x 5阵列的藻酸盐凝胶圆柱中的软骨细胞组成，整个藻酸-软骨细胞结构与驱动单元一起组装。藻酸盐凝胶结构由气动膨胀的PDMS气球压缩（图1b）。微流体装置根据PDMS气球直径的差异，在单个平台上可同时产生五种不同级别的压缩应力。因此，在多种压缩条件下进行软骨细胞中粒体生物学的高通量试验是可能的。

该协议中描述的微流体器件比传统压缩装置（如外部固定器14、21、23和宏观压缩装置16）具有许多优点。19,27,28用于研究软骨细胞微粒生物学：1） 微流体装置具有成本效益，因为它消耗的样品体积比宏观压缩装置小;2） 微流体装置是有效的，因为它可以测试多个同时压缩条件，3） 微流体装置可以通过在微通道中有限混合的基础上形成化学品的浓度梯度来结合机械和化学刺激，4） 各种显微镜技术（延时显微镜和荧光共聚焦显微镜）可与透明PDMS制成的微流体器件一起应用。

我们采用并修改了Moraes等人7、29的方法，在单个装置中产生不同的压缩应力水平，从而对软骨细胞压缩进行高通量的中度生物学研究。我们的方法适用于需要三维（3D）培养环境的细胞（如软骨细胞）和压缩细胞后的生物测定。虽然一些微流体细胞压缩装置可以压缩在二维（2D）基板上培养的细胞30，31，32，但它们不能用于软骨细胞，因为2D培养的软骨细胞去区分。有微流体平台用于压缩光聚合水凝胶7、33中的3D培养细胞，但由于从光聚合中分离细胞，压缩实验后分离细胞的微流体平台有限水凝胶是不容易的。此外，可能需要评估紫外线 （UV） 暴露和照片交联启动器对细胞的影响。相反，我们的方法允许在压缩实验后快速分离细胞进行后生物测定，因为藻酸盐水凝胶可以通过钙包剂快速去聚。详细的器件制造和表征方法在本协议中进行了描述。图2显示了制造微流体软骨细胞压缩装置的简要程序。

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Protocol

注：在本协议的每一步都佩戴个人防护设备（PPE），如手套和实验室外套。

1. 主模具制造

注：在烟机罩中执行步骤 1.1 - 1.3。

  1. 玻璃处理
    注：为步骤 1.1 佩戴面罩、手套和实验室外套。
    1. 通过混合硫酸（H2SO4）和过氧化氢（H2O2），使皮兰哈溶液（60 mL）的体积比为3：1。
      注意：由于爆炸危险，请勿在同一烟罩中使用Piranha溶液和丙酮。
    2. 在 Piranha 溶液中放置玻璃板（50.8 mm × 76.2 mm × 1.2 mm），在 40°C 下放置 30 分钟。
    3. 用去离子水（diH2O）冲洗玻璃板。
    4. 将玻璃板置于室温下丙酮10分钟。
    5. 用异丙醇冲洗玻璃板，然后用氮气（N2）气体干燥。
    6. 在热板上在 200°C 下烘烤玻璃板 20 分钟。所有后续烘焙步骤均使用热板。
  2. SU-8 种子层形成在玻璃板上
    1. 将 SU-8 5 涂在玻璃板上，并带有一次性移液器，覆盖板表面面积约的 2/3。
    2. 使用 SU-8 5 光阻器在 500 rpm 下旋转玻璃板，用于 35 s（初始旋转循环），然后使用旋转涂层在 40 s（最终旋转循环）中旋转 2，500 rpm。所有后续的旋转涂层步骤都包括相同的初始旋转周期。
    3. 在 65°C 下烘烤 SU-8 5 涂层玻璃板 2 分钟，然后在 95°C 下烘烤 5 分钟。
    4. 将SU-8 5涂层玻璃板暴露在紫外线下（60 mW/cm2，紫外线灯和光掩膜之间的距离为20厘米，总紫外线光能 = 60 mJ/cm2）为1 s。
      注： 紫外线照射时间应根据所用紫外线的功率进行调整。
    5. 在 65°C 下烘烤 SU-8 5 涂层玻璃板 2 分钟，在 95°C 下烘烤 5 分钟。
    6. 将烤玻璃板放在 SU-8 显影中 2 分钟。
    7. 在 180°C 下烘烤 SU-8 5 涂层玻璃 20 分钟。
  3. SU-8 通道图案图使用光刻制作 （图 2a 步骤 1-3）
    1. 将 SU-8 100 倒在 SU-8 5 种子玻璃板上，以覆盖板表面面积约的 2/3。
    2. 在 38 s（± 90 μm） 的转速下，在 3，000 rpm 下旋转 SU-8 100 的玻璃板。
    3. 在 65°C 下烘烤 SU-8 100 涂层玻璃板 10 分钟，然后在 95°C 烘烤 30 分钟。如果 SU-8 100 在此过程后仍然粘稠，在 95°C 下烘烤玻璃板更长时间，直到 SU-8 100 变得不粘。
    4. 在 SU-8 100 涂层玻璃板上放置高分辨率微通道光掩膜（25，400 dpi，参见补充图 1），并将光掩膜覆盖的玻璃板暴露在紫外线下 4 s（总紫外线光能总量 = 240 mJ/cm2）。
      注： 紫外线照射时间应根据所用紫外线的功率进行调整。
    5. 从玻璃板上取出光掩膜，在 65°C 烘烤玻璃板 2 分钟，然后 95°C 烘烤 20 分钟。
    6. 将烤玻璃板放在一个容器中，容器内用铝箔包裹，以阻挡任何光线，以便过夜固化。
    7. 在 SU-8 显影板上开发 SU-8 100 通道图案 15 分钟。
    8. 用同丙醇清洗SU-8图案玻璃板（主模具），用N2气体干燥。如果在此过程中保持白色颗粒，则重复步骤 7 5 分钟。

2. 气动驱动装置

  1. 微通道层（第 1 层）
    注：在烟罩中执行步骤 2.1.1 - 2.1.2。
    1. 将 200 μL （Tridecafluoro-1，1，2，2-四氢可氢）-1-三氯硅烷滴在盖玻片上，并将其与主模具一起放入真空室中。
    2. 在造型室中应用真空 2 分钟，等待 6 小时（或过夜）以进行模具硅化。
    3. 将 PDMS 与 10：1（预聚合物：固化剂）的重量比混合 5 分钟。
      注：所有后续的PDMS铸造步骤都含有相同的预聚合物和固化剂重量比（10：1）。
    4. 将 PDMS 倒在主模具上，在真空室中除气 PDMS 30 分钟。
    5. 三明治PDMS与一块透明膜。
    6. 用玻璃板、泡沫垫和有机玻璃板夹紧上述夹层组件（图2a 步骤4）。
    7. 在80°C的烤箱中固化PDMS6小时。
    8. 将 PDMS 层（第 1 层）与透明膜隔离为夹层结构（图 2a 步骤 5）。
    9. 使用等离子清洁剂激活第 1 层和清洁玻璃板（玻璃板 1;50.8 mm × 76.2 mm = 1.2 mm）的表面 1 分钟。
      注： 等离子清洁时间可能因使用的等离子清洁剂的功率而异。
    10. 将第 1 层粘到玻璃板 1 上，并将其置于 80°C 的烤箱中 30 分钟。
    11. 从第 1 层中删除透明度膜。
  2. 薄 PDMS 膜（第 2 层）
    1. 在 1，000 rpm 转速下在透明膜上旋转涂层未固化 PDMS 1 分钟，以获得 60 μm 厚的 PDMS 层。
    2. 在80°C下部分固化在烤箱中旋转涂层的PDMS（第2层），20-30分钟。
    3. 使用等离子清洁器在玻璃板 1 和第 2 层激活第 1 层 1 分钟。
      注： 等离子清洁时间可能因使用的等离子清洁剂的功率而异。
    4. 将第 2 层粘结到第 1 层，并在 80°C 的烤箱中放置过夜。
  3. 管块
    1. 将金属管垂直放在培养皿上。
    2. 轻轻将 PDMS 倒入盘中，将大约 3/4 的金属管浸入其中。
    3. 在 60°C 下将 PDMS 固化 6 小时（或过夜）。
    4. 切割一块含有一根金属管的 PDMS 块。
    5. 在入口的第 2 层上打孔。
    6. 使用等离子清洁器激活 PDMS 模块和第 2 层 1 分钟。
    7. 将 PDMS 模块连接到第 2 层的进气部分，并将整个驱动单元置于烤箱中，温度为 80°C 过夜。

3. 藻酸-软骨细胞（或珠）构造

  1. 氨基硅化玻璃板
    1. 使用钻石划线机将玻璃板（50.8 mm × 76.2 mm × 1.2 mm）切割成两个半尺寸玻璃板（50.8 毫米 × 38.1 毫米 × 1.2 毫米）。
    2. 将玻璃板放入 0.2 M 氯化氢 （HCl） 中，轻轻摇动（例如 55 rpm）。
    3. 用 diH2O 冲洗玻璃板。
    4. 在 55 rpm 下摇动 0.1 M 氢氧化钠 （NaOH） 中的玻璃板 1 小时，然后用 diH2O 冲洗。
    5. 在 1% （v/v） 3-氨基丙烯 （APTES） 中摇动玻璃板 1 小时，在 55 rpm 下，用 diH2O 冲洗。
    6. 在烟气罩中干燥氨基硅化玻璃板过夜。
  2. 用于藻酸盐凝胶结构的甘蔗凝胶模具
    1. 在 diH2O 中混合 5% （w/v） 角质和 200 mM 氯化钙 （CaCl2）。
    2. 用微波炉（或热盘）煮沸甘蔗凝胶溶液。沸腾时间因胶胶溶液的体积和微波炉的功率（或热板的温度）而异。
    3. 将煮熟的甘蔗凝胶溶液倒入铝模（参见补充图S2），并将其用玻璃板夹住。
    4. 等待 5 分钟，然后从铝模具中脱模凝固的甘蔗凝胶。
  3. 生长板软骨细胞收获
    1. 从新生儿小鼠的后肢分离生长板。
    2. 将生长板置于1mL的0.25%胶原酶中，在37°C和8%二氧化碳（CO2）的培养箱中放置3小时，以去除细胞外基质（ECM）。
    3. 在125 x g下将消化样品离心5分钟，以产生软骨细胞颗粒，并从样品中去除上清液。在这里，1 x g是重力的加速度。
    4. 在杜尔贝科改良的鹰介质（DMEM）的1 mL中重新悬浮软骨细胞颗粒。
    5. 使用细胞计数器计算 DMEM 中的软骨细胞数。
    6. 在 DMEM 中将软骨细胞在 125 x g下离心 5 分钟，以再次制造软骨细胞颗粒，并从样品中去除上清液。
    7. 可选择在软骨细胞培养基 （CCM）34中重新悬浮含有 2 μM 钙素 AM 的软骨细胞颗粒，并在 37°C 孵育样品 30 分钟。 重复步骤 3.3.6 并移动到步骤 3.3.8。
    8. 在所需量的CCM中重新悬浮软骨细胞颗粒，并在使用前将其保持在37°C和8%CO2的培养箱中。
  4. 藻酸-软骨细胞（或珠子）构造（图2c）
    1. 将1.5%（w/v）藻酸与5毫克/mL的磺胺-NHS混合，10mg/mL的1-乙基-3-（3-二甲基氨基丙基）盐酸甲二酰胺（EDC）。
    2. 在 1 mL 的藻酸盐凝胶溶液中加入 8 x 106 软骨细胞 [或添加 3 μL 的 1 μm 直径荧光珠 （542/612 nm） 中的藻酸盐凝胶溶液 （0.3% （v/v）]。
    3. 将150 μL的藻酸-软骨细胞（或珠）溶液放在步骤3.1中制造的氨基硅化玻璃板上。
    4. 用甘蔗凝胶模具覆盖藻酸盐凝胶溶液3分钟。
    5. 用剃刀刀片去除从胶凝剂凝胶模具中溢出的过量藻酸盐凝胶溶液，并去除甘蔗凝胶模具。然后，在氨基硅化玻璃板上获得圆柱形藻酸-软骨细胞（或珠子）结构。
    6. 将藻酸盐-软骨细胞结构置于交联溶液（50 mM CaCl2 / 140 mM NaCl）中，在 diH2O 中放置 1 分钟，以进一步聚合。

4. 设备组件（图 2d）

注：PDMS 垫板和 3D 打印夹需要单独准备。

  1. 在驱动单元第 2 层的四个角上定位四个 1 mm 厚的 PDMS 垫片。
  2. 放置 700 μL 的 CCM 以覆盖第 2 层的空气室。
  3. 将藻酸盐-软骨细胞（或珠子）结构放在第 2 层，同时小心地将结构与空气室对齐。
  4. 用 3D 打印夹夹夹住设备 （图 1c）。

5. 设备驱动

  1. 将空气泵的出口（参见材料表）与带硅管的电磁阀入口连接。
  2. 使用硅管将电磁阀的出口与组装装置的进口连接。
  3. 将电磁阀与功能发生器连接。
  4. 使用功能发生器产生的方波（例如 1 Hz）操作电磁阀。
  5. 打开空气泵以气动设备。

6. 设备中软骨细胞的成像

注：为了获得良好的图像质量，通过玻璃板2在藻酸盐凝胶中的图像软骨细胞（或荧光珠），因为膨胀的PDMS气球和气室可能会扭曲光学图像。如果使用倒置显微镜进行成像，则需要设置设备，以便玻璃板 2 朝下。

  1. 用软骨细胞（或荧光珠）准备设备，如前几节所示。
  2. 分别在压缩前和压缩下使用共聚焦显微镜拍摄软骨细胞（或荧光珠）的z堆栈图像。根据所使用的共聚焦成像系统的景深选择z步长大小。
  3. 软骨细胞（或藻珠-珠结构）的高度可以通过以前文献26、35所示的自动图像处理方法进行测量。

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Representative Results

本文介绍了微流体软骨细胞压缩装置制造的详细步骤（图2）。该器件包含5×5阵列的圆柱形藻状细胞-软骨细胞结构，这些构造可以压缩五种不同程度的压缩（图1，图3和图4）。气动微通道的高度约为90 μm，PDMS气球直径分别为1.2、1.4、1.6、1.8和2.0 mm。该器件的性能通过具有静态压缩条件和图像处理的共聚焦显微镜进行量化。静态压缩用于显微成像，因为z堆栈成像与共聚焦显微镜需要几分钟时间，因此在动态压缩期间，定量成像速度太慢。

图 3a显示了玻璃板 2 上铸造的 5 × 5 阵列的藻酸盐水凝胶柱（直径：±0.8 mm，高度：±1 mm）。通过在凝胶中加入荧光珠来成像这些凝胶结构。图 3b显示了一个示例案例，即凝胶柱被最大的 PDMS 气球压缩了 33.8% 的高度。在PDMS气球直径中，凝胶结构产生的压缩应变每0.2毫米增量增加约5%，如图3c所示。

软骨细胞的压缩变形是通过在凝胶结构中心附近的613 μm × 613 μm × 40×55 μm（x = y = z）体积中成像细胞来确定的，如图4a所示。图 1d显示了软骨细胞的示例图像，该细胞被最大的 PDMS 气球压缩了 16%。图 4b显示了测量的细胞压缩应变值的分布，并且整体细胞被较大的 PDMS 气球压缩得更多。因此，藻酸盐凝胶和软骨细胞压缩量由PDMS气球的直径（图3和图4）控制，恒定压力为14 kPa。

Figure 1
图 1.微流体软骨细胞压缩装置。
（a） 组装装置的原理图.5 × 5 阵列的藻酸盐-软骨细胞结构在 PDMS 气球上对齐，其直径为 5个不同的（D = 1.2、1.4、1.6、1.8 和 2.0 mm），其中D是 PDMS 气球（或气室）的直径。（b） 设备操作的原理图。该装置由膨胀PDMS气球的气动压力驱动。（c） 实际装置的图像（硬币直径 = 19 mm）。（d ） 软骨细胞在最大 PDMS 气球（D = 2.0 mm） 上（D = 2.0 mm）之前（左）和下（右）压缩的垂直横截面（细胞压缩应变，[细胞][细胞高度变化/初始细胞高度]x 100 = 16%）。这个数字是从26日转载的。

Figure 2
图 2.微流体软骨细胞压缩装置制造的详细步骤。
（a） 光刻用于生成 SU-8 主模具，并遵循软光刻，用于使用气动微通道（第 1 层）创建 PDMS 层。（b） 在旋转涂层产生的透明膜上的薄 PDMS 膜（第 2 层）。（c） 玻璃上的圆柱藻凝胶铸造方法（玻璃板2）。（d） 微流体软骨细胞压缩装置的组装.这个数字是从26日转载的。请点击此处下载此图的较大版本。

Figure 3
图 3.静态压缩下藻酸盐凝胶变形的测量。
（a） 5 x 5 阵列的圆柱形藻凝胶结构（直径：±800 μm，高度：±1 mm）。（b） 由最大的 PDMS气球（D = 2.0 mm）压缩的藻胶。藻酸盐凝胶的压缩应变为33.8%。（c） 藻酸盐凝胶的压缩应变（*凝胶） 增加约 5% 每 0.2 毫米增量的 PDMS 气球直径 （D.错误栏：标准偏差。红线：线性拟合线此图从26日转载。

Figure 4
图 4.静态压缩下软骨细胞变形的测量。
（a） z-堆栈图像 [613 μm ] = 613 μm × 40±55 μm （x = y = z） 在凝胶结构中间获得， 从凝胶底部获得 300×400 μm.（b） 不同幅度的软骨细胞压缩应变 （*细胞） 是 PDMS 气球直径 （D） 的函数。Icon ：平均值。Icon ：每个数据点。框的上（或下）和中线分别是标准差和中值。这个数字是从26日转载的。

图 S1。微通道光掩膜设计步骤 1.3.4 （单位 = 毫米）.请点击此处下载此图。

图 S2.步骤 3.2.3 （单位 = mm） 的铝模具设计。请点击此处下载此图。

图 S3.在 1 h 长动态 （1 Hz） 和静态压缩下，藻酸盐凝胶永久变形（1.5%，w/v）。这个数字是从26日转载的。请点击此处下载此图。

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Discussion

为了测试压缩应力对生长板软骨细胞的影响，我们开发了微流体软骨细胞压缩装置（图1），用于将不同级别的压缩应力应用于3D藻酸水凝胶支架中的软骨细胞高吞吐量方式的文化。为了帮助其他研究人员采用我们的设备或开发类似的设备，我们在本协议文章中提供了设备制造步骤的详细信息。

该协议的关键步骤是 1） 使用气动微通道（第 1 层）制造 PDMS 层，没有任何气泡，因为第 1 层中的气泡可能会损坏气动微通道，同时将背衬透明度膜剥离，2） 保持用于固化 PDMS 气球（第 2 层）的恒定温度（例如 80°C），因为 PDMS 的弹性已知取决于固化温度36，3）使用新鲜的氨基硅化玻璃将藻酸盐凝胶结构与 PDMS 气球对齐 4板（玻璃板2）用于在盐渍化处理后两天内将藻酸盐凝胶柱粘结在玻璃板上2。

该协议的主要局限性是，制造设备相对耗费大量人力，因为该过程涉及光刻和软光刻的多个步骤。此外，每当使用不同类型的水凝胶和细胞时，都需要评估基于我们协议制造的微流体细胞压缩装置的性能。这是因为水凝胶和电池的机械性能的任何差异都会影响设备性能。

尽管我们的微流体细胞压缩装置用于对软骨细胞进行动态压缩，但其性能通过静态压缩藻酸盐凝胶和细胞的成像来评估。这是因为很难用传统的共聚焦显微镜在动态压缩下成像凝胶和细胞。我们比较了静态（14 kPa，1 h） 和动态压缩 （14 kPa， 1 Hz， 1 h， 1 h） 的藻酸盐凝胶的永久变形，发现与静态压缩相比，动态压缩下的凝胶的永久变形可以忽略不计（参见补充图S3。

我们方法的一个优点是，它可以用于其他需要 3D 培养环境的单元格类型。通过改变 PDMS 气球的直径和厚度和/或气球中的压力，可根据应用来调节器件的压缩效果。还可以通过调整预聚合物和固化剂之间的混合比来改变PDMS气球的弹性。该设备中的细胞可以使用光/荧光显微镜进行实时成像，并且可以快速拆卸该器件以进行细胞采集，从而进行下游分析。另一个优点是能够生成五个不同的机械应力级别，每个应力级别使用单个设备进行五次技术复制。结合复制和剂量反应分析可确保结果的高度严格性和可重复性。

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Disclosures

作者没有什么可透露的。

Acknowledgments

我们感谢克里斯托弗·莫雷斯和斯蒂芬·莫林博士对设备设计和制造的支持。这项研究得到了内布拉斯加大学林肯分校（UNL）和内布拉斯加大学医学中心（UNMC）的人类健康生物工程资助，并得到了NIH/NIAMS的AR070242资助。我们感谢内布拉斯加大学医学中心高级显微镜核心设施的Janice A. Taylor和James R. Talaska为共聚焦显微镜提供帮助。

Materials

Name Company Catalog Number Comments
(3-Aminopropyl)triethoxysilane (ATPES) Sigma-Aldrich 741442-100ML
(Tridecafluoro-1, 1, 2, 2-Tetrahydrooctyl)-1-Trichlorosilane United Chemical Technologies T2492-KG
Acrylic sheet McMaster-Carr 8560K354
Air pump Schwarzer Precision SP 500 EC-LC4.5V DC We used the model purchased in 2015. The internal design and performance of air pump (SP 500 EC-LC) changed in early 2016. Also, air pump performance has changed in the course of time. Thus, air pressure generated by an SP 500 EC-LC air pump should be calibrated before use.
Alginate powder FMC Corporation Pronova UP MVG
Barb Straight Connectors (Metal tube) Pneumadyne EB40-250
Calcein AM Invitrogen C3100MP
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) Gibco 11960-044
Dyed red aqueous fluorescent particles Thermo Fisher Scientific R0100
EDC (1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride) Thermo Fisher Scientific 22980
Foam pad GRAINGER Item # 5GCE8
Function / Arbitrary Waveform Generator Keysight Technologies 33210A
Hydrochloric acid Fisher Chemical A144-500
Hydrogen peroxide Fisher BioReagents BP2633500
Isopropyl alcohol BDH1174-4LP VWR
Microscope slides Thermo Fisher Scientific 22-267-013
Plasma cleaner Harrick Plasma PDC-001
Polydimethylsiloxane (PDMS) Dow Corning 184 SIL ELAST KIT 0.5KG
Power supply Keysight Technologies E3630A
SeaKem LE Agarose Lonza 50004
Sodium hydroxide Fisher Chemical S318-1
Solenoid manifold Pneumadyne MSV10-1
Solenoid valve Pneumadyne S10MM-30-12-3
Spin coater Laurell Technologies WS-650Mz-23NPPB
SU8 Developer MicroChem Corp. Y020100 4000L1PE
SU8-100 MicroChem Corp. Y131273 0500L1GL
SU8-5 MicroChem Corp. Y131252 0500L1GL
Sulfo-NHS (N-hydroxysulfosuccinimide) Thermo Fisher Scientific 24510
Sulfuric acid EMD Millipore MSX12445

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

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生物工程， 问题 151， 微流体， 光刻， 软光刻， 生长板软骨细胞， 机械生物学， 细胞力学， 藻酸盐水凝胶， 共聚焦显微镜， 图像分析
微流体平台，用于用动态压缩刺激软骨细胞
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