Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Microbiologia
0 visualizações • 2:01 min. • August 29th, 2025
Coloque uma microscopia eletrônica de transmissão revestida de resina formal de polivinil ou grade TEM em um filme plástico limpo.
Adicione uma suspensão de vesículas extracelulares concentradas e purificadas ou EVs, partículas nanodimensionadas e ligadas à membrana, na grade.
Esses EVs são secretados por cianobactérias e carregam macromoléculas dentro de suas membranas.
Incube a grade para permitir que os EVs adsorvam em sua superfície revestida de resina.
Toque na borda da grade com um papel de filtro limpo para absorver o excesso de suspensão.
Flutue a grade em acetato de uranila para manchar as vesículas aderidas.
O acetato de uranila envolve as vesículas, criando um contorno escuro que aumenta o contraste durante a imagem.
Remova a grade e use papel de filtro para absorver o excesso de mancha.
Lave a grade com água ultrapura para remover qualquer mancha residual. Repita a lavagem e deixe secar ao ar.
Finalmente, visualize os EVs usando MET para avaliar sua morfologia, tamanho e pureza.
Aplique cuidadosamente cinco microlitros de vesícula e deixe descansar por cinco minutos. Remova a amostra tocando a borda de uma grade em um pedaço de papel de filtro limpo.
Pipete 20 a 50 microlitros de acetato de uranilo a 2% sobre uma superfície plana coberta por filme plástico. Em seguida, coloque a grade flutuando em cima dela por dois minutos. Remova o acetato de uranila usando papel de filtro e flutue brevemente em uma gota de água ultrapura para lavar.