Análises histológicas e hematológicas para avaliar os efeitos do Bacillus subtilis em ratos sob estresse térmico

Comece com seções intestinais tingidas com hematoxilina e eosina de ratos sob estresse térmico, uma pré-tratada oralmente com tampão como controle e a outra com uma suspensão de Bacillus subtilis .

O estresse térmico danifica as proteínas da junção apertada intestinal, resultando em vilosidades encurtadas e afinamento da mucosa.

O pré-tratamento com a bactéria promove a liberação de moléculas sinalizadoras que estabilizam proteínas de junção apertada, preservando a altura das vilosidades e a espessura da mucosa.

Observe as seções sob o microscópio óptico de alta resolução para identificar diferenças na altura das vilosidades.

Em seguida, coloque uma gota de sangue fresco de cada rato sobre lâminas de vidro e cubra com lâminas de cobertura.

O estresse térmico desestabiliza as membranas dos eritrócitos, liberando microvesículas na corrente sanguínea.

As bactérias reduzem o estresse oxidativo sistêmico, estabilizando as membranas dos eritrócitos e minimizando a vesiculação.

Observe as amostras de sangue sob o microscópio óptico de alta resolução para avaliar diferenças na vesiculação.

A preservação da altura da vilosidade na região intestinal e a menor quantidade de microvesículas no sangue confirmam o efeito protetor das bactérias sob estresse térmico.

Após preparar e colorir seções do intestino delgado conforme o protocolo de texto, utilize um microscópio de alta resolução para medir as vilosidades intestinais e a espessura total da mucosa. Analise pelo menos quatro amostras de cada rato e faça pelo menos 20 medições em cada amostra.

Para realizar uma microscopia óptica de alta resolução de amostras de sangue, utilize-se a plataforma de isolamento de vibração como base para o sistema de microscópio com câmera de vídeo e computador para gravar imagens ao vivo. Após calibrar as imagens de teste de acordo com o protocolo de texto, coloque sete microlitros de sangue recém-coletado de cada rato em uma lâmina de vidro e adicione uma tampa de cobertura. Depois, fotografe e registre dez quadros de imagem de 72 por 53,3 micrômetros quadrados em cada amostra.

Por fim, usando softwares que fornecem imagens ópticas de alta resolução e visão direta em tempo real, meça a concentração de vesículas.