Microscopia de Força Atômica Estática para Visualizar e Caracterizar Nucleossomos Montados

Os nucleossomos, a unidade básica de repetição da cromatina eucariótica, compreendem as voltas do DNA enroladas em torno de um núcleo de proteínas histonas.

Para visualizar nucleossomos montados por microscopia de força atômica estática, AFM, comece com uma tira fina de mica, funcionalizada para renderizar a superfície carregada positivamente. Corte a tira em pequenos quadrados. Pipetar uma suspensão de nucleossomas montada.

O DNA carregado negativamente no nucleossomo se liga ao grupo carregado positivamente da tira de mica funcionalizada por meio de interações eletrostáticas. Lave com tampão para evitar a superlotação de nucleossomos.

Prenda a tira de mica em um disco de suporte de amostra. Monte-o no estágio do instrumento AFM.

Prenda o suporte da sonda à cabeça óptica do instrumento. O suporte contém um cantilever AFM pré-montado com uma ponta em seu ápice.

Alinhe o feixe de laser na parte traseira do cantilever para uma medição precisa da deflexão. Posicione a ponta em contato direto com a superfície contendo o nucleossomo.

Durante a imagem em modo de contato, à medida que a ponta do cantilever varre a superfície do nucleossomo, as forças repulsivas surgem após as interações e