Quantificação da formação de babados de membrana usando microscopia eletrônica de varredura

Os estimuladores externos ativam as células e induzem a protrusão tridimensional da membrana circular, ou formação de babados da membrana, essenciais para várias atividades celulares.

Para visualizar a formação de babados de membrana, comece com uma placa de vários poços contendo uma lamínula na base. O topo da lamínula tem macrófagos cultivados.

Trate esses macrófagos com moléculas estimuladoras que ativam as células, facilitando a reorganização do citoesqueleto e a formação de protrusão da membrana. Cubra as células com uma solução fixadora, reticulando as proteínas e preservando a estrutura celular.

Trate os macrófagos fixos com concentrações crescentes de álcool para desidratação completa. Dessece esses macrófagos usando um secador de ponto crítico, eliminando quaisquer vestígios de água para obter melhores imagens.

Monte a lamínula em um suporte de amostra de microscopia eletrônica de varredura, ou SEM, usando fita condutora. O revestimento catódico da lamínula contendo macrófagos com uma fina camada de metal, garantindo boa condutividade eletrônica durante a imagem.

Coloque a lamínula na câmara SEM. Concentre o feixe de elétrons na lamínula. O feixe de elétrons atinge a membr