Diminui quantificar cognitivos causados ​​pela radioterapia craniana

Comprometimento cognitivo decorrentes da gestão radioterápico de tumores cerebrais representa uma condição clinicamente intratáveis ​​que impacta negativamente a qualidade de vida. A capacidade de avaliar criticamente potenciais intervenções para amenizar induzida por radiação decrementa cognitivo depende em última instância a capacidade de realizar rigorosa avaliações quantitativas da cognição.

O objetivo geral deste procedimento é quantificar as alterações comportamentais e cognitivas induzidas pela irradiação craniana. O primeiro passo é testar a memória de reconhecimento espacial baseada no hipocampo usando a nova tarefa de reconhecimento de lugar. Em seguida, os níveis de ansiedade são avaliados usando a tarefa do labirinto em cruz elevado, formação de memória baseada no medo, usando a tarefa de condicionamento justo contextual dependente do hipocampo e da amígdala, e a tarefa de condicionamento do medo na fila dependente da amígdala é então medida.

A etapa final é administrar a tarefa Maurice Water Maze para avaliar a aprendizagem espacial, a memória espacial e a capacidade de aprendizagem reversa. Em última análise, este protocolo detecta mudanças no humor, aprendizagem espacial e não espacial e memória, bem como quaisquer perturbações sensório-motoras induzidas pela irradiação craniana. Embora este método possa fornecer informações sobre os efeitos da irradiação craniana no comportamento e na cognição.

Também pode ser usado para outras situações em que a cognição é prejudicada como um efeito colateral indesejado de outra terapia, como no caso de problemas de aprendizagem e memória induzidos por quimioterapia ou quimioterapia. Indivíduos novos neste método terão dificuldades devido à natureza demorada de configurar e otimizar o equipamento. A interpretação dos resultados pode ser difícil se os procedimentos experimentais não forem rigidamente controlados, e a variação nos dados dificulta a detecção de diferenças entre os grupos controle e experimental.

A demonstração visual dessas metodologias é fundamental, para que o leitor possa apreciar as sutilezas envolvidas na organização ou nas salas experimentais em que o teste cognitivo é realizado, bem como os procedimentos específicos empregados. Para garantir o manuseio consistente dos animais, inicie a fase de familiarização preparando o ambiente de teste, limpe completamente dois blocos plásticos idênticos com etanol 70% e coloque-os em posições específicas dentro da arena. Coloque o animal no centro da arena e deixe-o explorar livremente.

Por cinco minutos, os comportamentos exploratórios são pontuados. Usando um sistema de rastreamento automatizado, a exploração é definida como o nariz de um animal dentro de um raio de quatro centímetros e direcionado para os blocos. Quando o tempo acabar, remova o animal para uma gaiola por mais cinco minutos.

Durante esse tempo, limpe a arena de teste com 70% de etanol. Adicione uma cópia idêntica dos blocos à mesma posição espacial da fase de familiarização e outra a uma nova posição espacial. Após o intervalo de atraso de cinco minutos, reintroduza o animal nas arenas de teste para uma fase de teste de cinco minutos e deixe-o explorar livremente por três minutos.

Se o arranjo espacial dos blocos da fase de familiarização for lembrado, o rato passará mais tempo explorando o bloco na nova localização espacial. No dia seguinte, os animais são devolvidos mais uma vez à arena. Para uma fase de teste de 24 horas, novamente, um bloco permanece em uma posição familiar enquanto outro está em um romance.

Primeiro, coloque o animal no centro da arena e registre a exploração por três minutos. O labirinto em cruz elevado mede os níveis de ansiedade em roedores. Antes de testar, certifique-se de que o labirinto esteja completamente limpo.

Para começar, coloque o animal na parte central do labirinto, de frente para o braço aberto longe do experimentador, permita que o animal explore por cinco minutos. O número de entradas e a quantidade de tempo gasto nos braços abertos e fechados são rastreados usando um software de rastreamento automatizado. Se um rato cair do labirinto, coloque-o rapidamente de volta em um braço aberto e registre o evento.

Observe também qualquer comportamento de congelamento junto com as possíveis causas. O condicionamento do medo é um paradigma comportamental no qual os animais aprendem a temer um estímulo anteriormente neutro. Ao emparelhá-lo com um estímulo nocivo no primeiro dia, coloque o animal em uma câmara completamente limpa.

Comece o teste de treinamento, que consiste em três fases. A primeira é uma fase basal de cinco minutos, quando nenhum choque ou tom é administrado durante a fase de treinamento, vários pares de choque de tom são apresentados durante um período de cinco minutos. Finalmente, durante a fase pós-treinamento, o animal recebe mais cinco minutos.

Na ausência de choque ou tom, a porcentagem de tempo que cada animal passa congelando é medida a partir dos 60 segundos finais da fase inicial e dos 60 segundos finais da fase pós-treinamento. 24 horas depois, retorne o animal à câmara para um teste contextual de cinco minutos e registre a porcentagem de tempo gasto congelando uma hora após o teste. No contexto familiar, remova o piso da grade, adicione painéis na parte externa da câmara e limpe com um limpador doméstico perfumado.

Para testar o condicionamento do medo sugerido, coloque o animal no novo contexto e registre o comportamento de congelamento na presença e ausência do tom que foi previamente emparelhado com o estímulo nocivo. O Morris Water Maze é um teste de aprendizado espacial que requer o uso de pistas distais para localizar uma plataforma de fuga submersa em uma grande piscina de água opaca, a tarefa é administrada ao longo de oito dias e consiste em quatro fases, teste de fila e aquisição. Fase de um teste de sonda de 24 horas e um teste de aprendizado de reversão.

Para iniciar o teste na fila, coloque uma bandeira preta e branca distinta no meio da plataforma para que o local de fuga seja óbvio para o animal. Para cada teste CUD, coloque o animal em um local de partida predeterminado diferente no perímetro da piscina, mova a plataforma para um quadrante diferente. Para cada uma das quatro tentativas, permita ao animal 30 segundos para encontrar a plataforma de fuga.

Se o tempo máximo for atingido, guie os animais até lá com as mãos. Deixe o animal permanecer na plataforma por 20 segundos antes de colocá-lo em uma gaiola aquecida. No dia seguinte, inicie a fase de aquisição que consiste em quatro tentativas por dia durante cinco dias consecutivos.

Durante esta fase, a plataforma oculta permanece no mesmo local e os animais aprendem a navegar até ela. Usando dicas de sala distal, coloque o animal na piscina em um ponto de partida predeterminado diferente. Para cada teste, registre a latência média para encontrar a plataforma e o comprimento do caminho como medidas de aprendizado espacial.

Se o animal não tiver escapado dentro do tempo máximo de natação de 60 segundos, guie-o manualmente até a plataforma e deixe-o permanecer lá por 20 segundos. 24 horas após o teste final de treinamento, realize um 62º teste de sonda no qual a plataforma é removida para determinar a preferência do animal pelo quadrante que costumava conter a plataforma. Após este teste de sonda, retorne a plataforma para o mesmo quadrante e administre três testes de aquisição adicionais para o teste de aprendizado reverso.

No oitavo dia, mova a plataforma para um novo local. Apresente o animal à piscina e meça a quantidade de tempo gasto procurando a plataforma em seu local anterior versus o novo aqui. Os resultados dos animais de controle e irradiados na nova tarefa de reconhecimento de lugares mostraram que as duas posições foram exploradas igualmente durante a fase de familiarização.

No entanto, os animais de controle mostraram uma clara preferência pela nova posição espacial após os intervalos de atraso de cinco minutos e 24 horas, enquanto os animais irradiados não. No labirinto elevado em cruz, os animais de controle e irradiados passaram menos tempo explorando os braços abertos do que seria esperado por acaso. A porcentagem de congelamento durante a exposição inicial à câmara foi muito baixa em comparação com o período pós-treinamento no dia seguinte.

O comportamento de congelamento ainda foi aumentado dentro do contexto familiar, embora muito menos em animais irradiados quando colocados em um novo contexto, o comportamento de congelamento retornou aos níveis basais, mas foi aumentado novamente pela apresentação do tom no Morris Water Maze. Animais de controle de tarefas localizaram a plataforma de fuga mais rapidamente em testes sucessivos em comparação com animais irradiados. Os animais irradiados também levaram mais tempo e um caminho mais longo até a plataforma em um teste de sonda, 24 horas depois, durante o Teste de Aprendizagem Reversa, quando a localização da plataforma é trocada, os animais normais gradualmente param de pesquisar o quadrante antigo e aprendem a nova localização da plataforma, enquanto os animais irradiados não.

Ao realizar essas tarefas, é importante fazer anotações detalhadas sobre quaisquer eventos ou comportamentos anormais, bem como quaisquer problemas de rastreamento que surjam e que precisem ser resolvidos antes que os dados sejam analisados. Não se esqueça de que trabalhar com animais experimentais pode ser perigoso e precauções como o uso de equipamentos de proteção individual devem sempre ser usadas ao realizar esses procedimentos. Também é fundamental obter aprovação institucional e seguir as diretrizes institucionais e federais para o uso seguro e ético de animais.