Humanos da artéria mamária interna (IMA) Transplante e implante de stent: um modelo humano para estudar o desenvolvimento de reestenose intra-stent

O objetivo geral deste procedimento é estudar o desenvolvimento da hiperplasia intimal em um modelo humanizado. Isso é feito primeiro desnudando, uma seção da artéria mamária humana ou IMA, usando um cateter de nebulosidade de dois franceses. Em seguida, um stent é inserido no AIM.

Em seguida, um segmento da aorta abdominal de rato é substituído por um IMA com stent. Por fim, a ferida é suturada e o animal pode recuperar o dano endotelial devido ao procedimento invasivo de dilatação do balão e o implante de stent resulta em inflamação e produção de citocinas inflamatórias. Isso leva à proliferação de células musculares lisas, que ocluem progressivamente o lúmen do vaso, resultando em estenose.

Em última análise, podem ser obtidos resultados que mostram a proliferação de células musculares lisas humanas por meio de microscopia confocal de imunofluorescência. Hoje mostraremos um modelo para a avaliação da estenose do punho em artérias humanas em um hospedeiro vermelho. A vantagem deste modelo de técnicas existentes, como a posição abdominal úmida da aorta, é que podemos avaliar stents humanos em tecido humano.

Tivemos a ideia para esse método pela primeira vez quando pretendíamos encontrar um modelo translacional in vivo para remodelação vascular. Para preparar o IMA, comece usando um cateter de embolectomia arterial de Fogarty de dois French para desnudar o endotélio arterial, movendo o cateter para dentro do vaso para garantir o dano endotelial. Insira um stent humano de oito milímetros de comprimento e 2,5 a três milímetros de diâmetro no vaso.

Usando a pressão apropriada do balão, implante o stent para atingir o diâmetro desejado. Armazene o IMA com stent no gelo a quatro graus Celsius em RPMI e heparina até o transplante. Após a anestesia, um rato com isoflurano, raspe os pelos abdominais, coloque uma máscara facial sobre o nariz e a boca para manter a anestesia a 2% com iodo provo, desinfete amplamente a área abdominal e siga-a com 80% de etanol.

Repita essas etapas duas vezes. Aperte as patas traseiras para ter certeza de que o rato está suficientemente sedado. Em seguida, realize uma laparotomia mediana superior para expor a aorta abdominal infrarrenal.

Em seguida, coloque os intestinos em uma luva hidratada com solução salina e dobre a luva ao redor dos intestinos para evitar a perda de umidade Sob um microscópio cirúrgico, disseque a aorta da região infrarrenal até a bifurcação, tomando cuidado para não causar danos nos ramos dos vasos. Para interromper o fluxo sanguíneo aórtico, use micropinças para pinçar primeiro a extremidade proximal e depois a extremidade distal. Remova um segmento aórtico de aproximadamente 0,5 a 0,7 milímetros e lave a aorta restante com 200 unidades de heparina.

Em seguida, encurte a AIM com stent para um comprimento adequado e posicione-a na lacuna aórtica. Em seguida, usando suturas contínuas, conecte o IMA à aorta receptora. Abra cuidadosamente primeiro o mimo e depois a pinça craniana.

Deve haver um pulso visível na AIM transplantada e na extremidade distal da aorta. Coloque os intestinos de volta no abdômen e lave-o com solução salina estéril pré-aquecida. Use seis suturas de corrida com prolina para fechar a camada muscular da parede abdominal, seguida pela camada de pele.

Enquanto o rato ainda está sob anestesia subcutânea. Injete quatro a cinco miligramas por quilograma de carprofeno. Monitore o animal diariamente até a remoção do IMA para identificar a origem da proliferação.

O IMA humano foi transduzido de forma estável para superexpressar GFP no vaso. Os cortes histológicos foram corados com anticorpos contra GFP mostrados aqui em verde e actina de músculo liso humano ou SMA vistos em vermelho. Os núcleos das células estão em azul.

Aqui é mostrada uma imagem confocal que mostra a origem das células proliferadas. Este vídeo 3D mostra a colocalização de SMA em vermelho e GFP em verde Após a cirurgia. Outros métodos, como histopatologia e microfluorescência confocal, podem ser realizados para responder a questões como obliteração luminal, morfologia e celularidade.

Este método é um modelo promissor para pesquisa translacional. Obrigado por assistir e boa sorte com seus experimentos.