Modelo Experimental de Endocardite resistente à meticilina Staphylococcus aureus (MRSA) em Rato

O objetivo geral deste procedimento é estabelecer um modelo experimental de endocardite infecciosa em ratos. Isso é feito primeiro cultivando aureus e preparando cateteres cirúrgicos para infecção. Em seguida, a área cirúrgica é preparada e o animal é anestesiado.

Uma vez que o animal é anestesiado, um cateter é inserido através da artéria carótida direita em direção ao coração. A etapa final é infectar animais com aureus por injeção na veia da cauda. Por fim, os tecidos-alvo são dissecados e preparados para cultura quantitativa.

A principal vantagem dessa técnica sobre os métodos existentes, como um modelo de endocardite rápida, é que o modelo de endocardite vermelha pode ser usado com o sistema de imagem in vivo. Ivus. Este método pode ajudar a responder a perguntas-chave no campo da patogênese oral da etapa, como virulência e eficácia do agente antimicrobiano. Geralmente, os indivíduos novos nessa técnica terão dificuldades porque o procedimento cirúrgico é desafiador.

Primeiro inocule uma alça cheia de cultura M SSA de um estoque congelado para uma caixa de viagem de sangue de ovelha. Placa de trado de soja: incube a cultura durante a noite a 37 graus Celsius depois de se certificar de que não há contaminação. Escolha uma colônia do prato e use-a para inocular cinco mililitros de caldo de soja em um tubo de 15 mililitros.

Incubar o inóculo a 37 graus Celsius durante a noite em uma incubadora agitada. Defina em 200 RPM para preparar os cateteres primeiro. Corte o tubo de polietileno em comprimentos de 10 centímetros e esterilize os cateteres em solução desinfetante cex por 30 minutos.

Em seguida, derreta uma extremidade de um tubo esterilizado pressionando a ponta com uma pinça estéril aquecida para criar um cateter que passará da artéria carótida direita para o ventrículo esquerdo e causará danos ao endocárdio quando o coração bater. Em seguida, anestesiar o rato colocando-o em uma câmara contendo uma mistura de oxigênio de flúor um para um até que o anestésico faça efeito. Confirme a anestesia verificando se os músculos estão relaxados e se os reflexos pedais estão ausentes.

E mantenha um estado anestesiado durante a cirurgia usando um cone nasal que é conectado à mistura de gases. Limpe a área cirúrgica com Betadine e etanol 70% usando técnica estéril durante toda a cirurgia. Coloque o rato em posição dorsal e faça uma incisão verticalmente através da camada de pele do pescoço acima do esterno usando dissecção romba.

Separe a fáscia para expor a artéria carótida direita. A artéria carótida direita está localizada ligeiramente à direita da linha média acima das clavículas. Puxe cuidadosamente a artéria para fora da cavidade do pescoço e coloque dois comprimentos de 10 centímetros de sutura de seda sob a artéria para amarrá-la na extremidade cefálica exposta.

Em seguida, coloque um clipe na artéria para evitar sangramento. Faça um pequeno orifício na parte superior da artéria usando um introdutor de cateter usando uma pinça. Insira a extremidade não selada do cateter através do orifício na artéria.

Remova o clipe e empurre o cateter para baixo em direção ao coração. Até que a resistência seja encontrada inserida corretamente, o cateter deve se estender de quatro a cinco centímetros na artéria e pulsar com os batimentos cardíacos do rato. Assim que o cateter estiver no lugar, amarre a sutura solta ao redor da extremidade do mimo da artéria e prenda o cateter no lugar.

Com a sutura de seda, corte o excesso de sutura e as extremidades do cateter e, em seguida, coloque as pontas sob a pele do pescoço. Feche a pele com grampos de pele. Coloque o rato em uma gaiola limpa e mantenha-o em um local quente até se recuperar da anestesia.

Forneça comida e água e verifique o rato com frequência, durante e após a recuperação. A infecção pode ser realizada entre um e sete dias após a cirurgia, mas o tempo deve permanecer consistente dentro dos experimentos. Limpe a cauda do rato com etanol 70% e injete 0,5 mililitros da cultura de MRSA na célula desejada.

Conte até a veia da cauda. Usando uma agulha de calibre 27 de meia polegada, aplique pressão no local da injeção até que qualquer sangramento pare antes de retornar o rato à sua gaiola. Depois de sacrificar o rato, limpe o peito com etanol a 70% e, em seguida, faça uma incisão em forma de V no tórax abaixo do esterno.

Corte a cartilagem das costelas de cada lado do esterno. Para expor o coração, puxe-o suavemente para cima e corte o tecido próximo à aorta e disseque para cima Para liberar o coração. Coloque o coração em uma placa de Petri estéril forrada com gaze de quatro por quatro polegadas e, em seguida, faça um corte na parede interna do ventrículo esquerdo e abra a câmara do lado esquerdo.

Verifique para confirmar a colocação correta do cateter e, em seguida, remova-o. Examine e remova as vegetações da válvula com tesoura e fórceps. Remova também os rins e o baço e, após pesar e homogeneizar os tecidos e vegetações, faça diluições seriadas em PBS para cultura quantitativa.

Aqui é mostrado um cateter posicionado corretamente, conforme indicado pela seta mais à esquerda. Ele se estende pela válvula aórtica e pelo lado esquerdo da câmara cardíaca, e numerosas vegetações são visíveis ao redor das válvulas aórticas, conforme indicado pelas setas do meio e da direita. Esta tabela fornece um exemplo da virulência de uma cepa de ssus no modelo de endocardite de rato.

Todos os animais foram desafiados com inocular de 10 para o quinto e 10 para o sexto. A UFC desenvolveu endocardite com altas densidades de ssus em vegetações cardíacas, bem como nos rins e baço, uma vez dominado. Este procedimento cirúrgico pode ser feito em 10 minutos se for realizado corretamente.

Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de manter o animal em um estado avaliado durante a cirurgia após este procedimento. Não métodos como ivus podem ser realizados para responder a perguntas adicionais, como monitoramento em tempo real da eficácia de agentes antimicrobianos E a expressão gênica in vivo após seu desenvolvimento. Esta técnica é o caminho para pesquisadores na área de step orus e ficção explorarem seu fator de virulência patogênica na infecção endovascular.

Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como estabelecer um modelo experimental de endocardite em ratos. Não se esqueça de que trabalhar com ARM pode ser extremamente perigoso e precauções como usar laboratório, jaleco e luva devem ser tomadas durante a realização deste procedimento.