Infarto Agudo do Miocárdio em Ratos

O modelo do rato de infarto agudo do miocárdio (IAM) é útil para estudar as consequências do enfarte do miocárdio sobre a função fisiológica e fisiopatológica cardíaca.

O objetivo geral deste procedimento é modelar o infarto agudo do miocárdio em ratos para o estudo dos mecanismos de sinalização cardíaca associados à resposta imediata do miocárdio à isquemia cardíaca, seguida de lesão de reperfusão. Essas respostas incluem tamanho do infarto, área de risco e morte celular. O primeiro passo é expor o ventrículo esquerdo fazendo uma pequena incisão no quarto espaço intercostal do lado esquerdo do tórax e espalhando as costelas uma vez isoladas.

A artéria descendente anterior esquerda ou DAE é ligada transitoriamente por 30 minutos após o período isquêmico. A ligadura da DA é liberada permitindo a reperfusão cardíaca após um período de reperfusão de quatro horas. A DAE é ligada mais uma vez antes que o coração seja excisado e examinado quanto ao tamanho da área do miocárdio infartado em risco e não em risco.

Em última análise, resulta da avaliação histológica do infarto. O miocárdio pode ser usado para explorar estratégias terapêuticas para o tratamento da insuficiência cardíaca. Essa técnica pode fornecer informações sobre os mecanismos de sinalização associados às respostas imediatas à isquemia, seguidas por lesões proficientes, como tamanho do infarto, área de risco e morte celular.

Este modelo pode ser usado para avaliar novas estratégias terapêuticas para o tratamento da doença isquêmica do coração. Demonstrando o procedimento estará um pesquisador associado sênior e X, um pós-doutorado sênior do laboratório do Dr. Bradley McConnell no Departamento de Ciências Farmacológicas e Farmacêuticas da Universidade de Houston, um membro institucional do Texas Medical Center. Antes que o procedimento cirúrgico possa começar, a superfície cirúrgica deve ser desinfetada com etanol a 70%.

Esterilize todos os instrumentos cirúrgicos com um esterilizador de esferas quentes antes de cada cirurgia individual. Os instrumentos necessários incluem duas tesouras cirúrgicas, uma pinça, uma pinça curva, dois porta-agulhas e um afastador de tórax. Ajuste a temperatura do sistema de cobertor homeotemático para que ele mantenha a temperatura corporal do animal em 37 graus Celsius para mais ou para menos.

O tamanho de um infarto depende da duração da oclusão, bem como da temperatura corporal. Tenha gaze de algodão e aplicadores prontamente disponíveis para controlar o sangramento. Apenas animais que passam por um exame físico por inspeção visual, medição da frequência cardíaca, frequência respiratória, temperatura corporal e peso corporal são usados nesses estudos.

Registre o peso e as características de identificação dos animais saudáveis que serão submetidos à cirurgia no dia anterior à cirurgia. Administre uma dose de máscaras de buprenorfina. Batas e luvas devem ser usadas durante todo o procedimento, e as luvas devem ser trocadas entre as cirurgias individuais.

Para começar, anestesie um rato e prepare o local da cirurgia, raspando completamente o pelo das áreas do pescoço e do peito. Desinfete as áreas raspadas com solução de Betadine, seguida de etanol a 70%. Repita este procedimento três vezes.

Coloque o animal em um sistema de cobertor temático homeo para manutenção adequada da temperatura corporal. Deitado do lado direito. O chanfro das bordas de um tubo de polietileno facilita a inserção na laringe.

Insira o tubo endotraqueal com o auxílio de um microscópio estereoscópico cirúrgico. Manipular suavemente a língua conforme necessário e manter a traqueia à vista. Conecte o tubo endotraqueal a um ventilador que circula a 80 respirações por minuto e um volume corrente de 1,2 mililitros por 100 gramas de peso corporal.

Uma vez alcançada a ventilação mecânica, coloque um campo estéril sobre o rato, deixando apenas a área cirúrgica exposta. Uma vez estabelecida a respiração constante, abra o tórax no quarto espaço intercostal esquerdo. Minimize o grau de corte no tecido para reduzir o risco de sangramento.

Posicione um afastador de tórax dentro do quarto espaço intercostal e espalhe as costelas para expor o ventrículo esquerdo ou o VE, deve-se tomar cuidado para não danificar o pulmão. Em seguida, abra o pericárdio, deixando-o no lugar. Se possível, identifique a artéria descendente anterior proximal esquerda ou a artéria DA com o uso de um microscópio estereoscópico cirúrgico.

Transitoriamente, amarre ou amarre com um nó corrediço a LAD para induzir isquemia. Tomando cuidado para não exteriorizar o coração propriamente dito. A ligadura da DA é confirmada pela observação do branqueamento do tecido miocárdico distal à sutura, bem como disfunção da parede anterior durante o período isquêmico.

Após um período isquêmico de 30 minutos, inicie a reperfusão cardíaca cortando ou liberando a ligadura ao redor da DA com tesoura microcirúrgica. A reperfusão é verificada pelo retorno da cor vermelha ao tecido miocárdico e pela demonstração de alguma recuperação da motilidade da parede anterior observada imediatamente após a liberação da ligadura ADA. O procedimento é idêntico para ratos de controle simulado, exceto que o LAD não é ligado transitoriamente.

Remova o afastador de tórax e junte as costelas com um padrão de sutura interrompido. Uma vez que as costelas estejam fechadas, crie pressão torácica negativa para garantir a respiração adequada, retirando o ar da cavidade torácica. Finalmente, feche a pele com um padrão de sutura contínua Após a cirurgia, coloque o rato em uma gaiola com uma almofada de aquecimento e monitore a temperatura corporal por um termômetro retal, frequência respiratória por inspeção visual, frequência cardíaca por palpitações e sinais anormais de dor até que o animal se torne ambulatorial.

Solução salina estéril deve ser administrada. Se forem observados sinais de desidratação, administre buprenorfina imediatamente após a cirurgia. Após um período de reperfusão de quatro horas, coloque o rato reanestesiado de volta na área cirúrgica.

Visualize o ventrículo esquerdo conforme demonstrado anteriormente e ligue o LADA segunda vez ou o nó corrediço pode ser reamarrado. Injete um mililitro de azul de 5% de Evans e solução salina na câmara ventricular direita e deixe perfundir por dois minutos. Após esse período, injete um mililitro de solução saturada de cloreto de potássio na câmara ventricular direita para impedir que o coração bata rapidamente, excise o coração e incorpore-o em solução salina tamponada com agrofosfato a 2% aquecida.

Assim que o agro solidificar à temperatura ambiente, corte o coração em seções de um a dois milímetros. Manchar o miocárdio viável com cloreto de trientetra oleum a 2% ou TTC por 20 minutos e capturar uma imagem de cada fatia vista. Aqui está uma imagem representativa do coração do rato.

Após quatro horas de reperfusão, a área em azul representa a área perfundida não ocluída ou não em risco. As áreas vermelhas indicam a área de risco de infarto e as áreas amarelas brancas denotam miocárdio infartado dentro da área de risco. Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como se sair no infarto agudo do miocárdio em ratos e no modelo animal usado para imitar a doença cardíaca isquêmica humana.

Este modelo pode ser usado para estudar as respostas imediatas à isquemia, seguida por uma lesão de reperfusão que ocorre nas primeiras horas, como o tamanho do infarto, risco de área e morte celular. Como você observa neste vídeo, boa sorte com seus experimentos.