Name: Determinação de ácidos graxos tolerável e Concentrações toxina da cólera Usando Humanos células epiteliais intestinais e BALB / c mouse macrófagos (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-30T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 39 s
Description: Aprenda a determinar concentrações toleráveis de ácidos graxos e toxina da cólera usando células epiteliais intestinais humanas e macrófagos de camundongos BALB/c. Este método avalia a viabilidade celular por ensaio MTT.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Agradecemos Paula Cobos e Dr. Evros Vassiliou de assistência laboratório e fornecer os macrófagos de camundongos, respectivamente. Agradecemos também o nosso laboratório gerente Richard Criasia para orientação e ajuda com os materiais. Finalmente, os autores agradecem Ramanpreet Kaur ajuda com produção de vídeo.

1. Cultura de Tecidos <ol><li> Use Mus musculus macrófagos (BALB / c) para as determinações da toxina da cólera. Inicialmente cultura todos M. células musculus seguindo as instruções do fornecedor. </li><li> Propaga BALB / c células ratos em Meio de Eagle Modificado por Dulbecco com L-glutamina completado com 10% de soro fetal bovino, e antibióticos / antimicóticos ou meio RPMI 1640 de base de 1% completado com 10% de soro fetal bovino, 5% de L-glutamina, e 1 % de reagente de antibiótico / antimicótico. </li><li> Cultivar células em 75 cm 2 frascos corning com tampas com respiradouros, a 37 ° C, 95% de ar e 5% de CO 2. </li><li> Levar-se as células epiteliais intestinais humanas no prazo de 24 horas da entrega, conforme instrues do fabricante para a determinação das determinações de ácidos gordos. </li><li> Propagação de células epiteliais intestinais humanas em 75 cm 2 frascos corning com tampas ventiladas em meios HybriCare completados com 10% de FBS e 30 ng / ml de EGF humano a 37 ° C. Não use antibióticosReagentes / antimicóticos conforme instruções do fabricante. </li><li> Dividir todas as células (1:3) a cerca de 70% de confluência. </li><li> Congelar e trazer todas as células ao longo do estudo por meio de protocolos de congelamento padrão. </li><li> Nota: Para a determinação da concentração de escala maior de ácidos gordos, a utilização de crescimento mais rápido e mais fácil de manter, inicialmente, os macrófagos do rato. Para a determinação da concentração de ácido graxo fina escala, usar células epiteliais humanas. Use macrófagos de camundongos para todos os tratamentos toxina da cólera (ver discussão). </li></ol> 2. Ácidos graxos e tratamentos toxina da cólera <ol><li> Transferência de ácidos oléico, linoléico e linolênico de empresa, desde ampolas de vidro para frascos de vidro esterilizados. </li><li> Transferência de cada ácido gordo para um tubo Eppendorf esterilizado em separado e dissolvê-lo em primeiro lugar em etanol a 100% a uma diluição de 1:06, e, em seguida, em meio RPMI 1640 incompletos para uma concentração final de 10 ug / ul. </li><li> Vortex cada solução e transfer-o para frascos de vidro para armazenamento no congelador (-20 ° C). </li><li> As células em placas a 2500 células / poço em placas de 96 poços de cultura de tecido. </li><li> Adicionar os meios completos adequados para levar o volume total a 200 bem ul para o tratamento de células com ácidos gordos na preparação para os ensaios MTT. </li><li> Depois de um período de proliferação 24 horas, remova a mídia e substituí-lo com novas mídias. </li><li> Adicionar as concentrações apropriadas de cada ácido gordo a ser testado para os poços (ver resultados). Adicionar meio completo para assim trazer os volumes totais de 200 ul. </li><li> Incubar as placas tratadas por 24 horas antes de se iniciar o ensaio de MTT. </li><li> Dissolve-se a toxina de cólera em PBS a uma concentração de 1 mg / ml e alíquotas da solução em criotubos e armazenar os criotubos a 2-8 ° C. </li><li> Para os tratamentos de células, dilui-se a toxina de 1:100 em PBS esterilizado (pH 7,4) ou DMEM incompleto para uma concentração de trabalho final de 1 ng / ul. </li><li> Para o tratamento de células com a toxina da cólera nopreparação para ensaios de MTT, as células da placa, tal como descrito acima. </li><li> Depois de um período de proliferação de 24 h, adicionar as concentrações apropriadas de toxina da cólera (por nossos concentrações, ver resultados) a serem ensaiadas às cavidades seguindo os procedimentos utilizados em aplicações de ácidos gordos (de cima). </li><li> Incubar as placas tratadas por 24 horas antes de se iniciar o ensaio de MTT. </li><li> Como (c positivo ao longo do papel) positivo e de controlo negativo (negativo c), para ambos os tratamentos ácido gordo e a toxina da cólera, as células a incubar com meio completo e etanol a 70%, respectivamente. </li><li> Para todas as amostras e tratamentos utilizar um mínimo de três repetições (n = 3), com mais repetições de controlos positivos (n = 6 neste estudo). </li></ol> 3. MTT Assay <ol><li> Adicione uma solução de MTT a uma concentração de 2,5 mg / ml. </li><li> Remover a solução em cada poço da placa de 96 poços a serem testados e substituí-la com 200 ml de solução de meio completo fresco. </li><li> Anúnciod 10 uL da solução de MTT a cada poço. </li><li> Incubar a placa a 37 ° C durante 3-4 horas. </li><li> Descartar a solução meios e adicionar 100 ul de 0,04 M de HCl em isopropanol a cada poço. </li><li> Incubar a placa a temperatura ambiente durante cinco minutos. </li><li> Transferir a solução de cada poço para um novo tubo de centrífuga. </li><li> Centrifugar a 20.000 x g, à temperatura ambiente, durante 1 min, ou até que um precipitado foi formado. </li><li> Transferência entre 20-40 mL de cada amostra de um leitor de microplacas. </li><li> Ler a absorvância a 570 nm utilizando um espectrofotómetro. </li></ol>

<ol><li>Franceur, M. L., Golden, G. M., Potts, R. O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oleic+Acid%3A+Its+effects+on+stratum+corneum+in+relation+to+%28trans%29+dermal+drug+delivery%5BTitle%5D)+AND+%22Pharm+Res%22%5BJournal%5D)">Oleic Acid: Its effects on stratum corneum in relation to (trans) dermal drug delivery.</a> Pharm Res. 7 (6), 621-627 (1990).</li>
<li>Tandon, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((X-ray+diffraction+and+spectroscopic+studies+of+oleic+acid-sodium+acetate%5BTitle%5D)+AND+%22Chem.+Phys.+Lipids%22%5BJournal%5D)">X-ray diffraction and spectroscopic studies of oleic acid-sodium acetate.</a> Chem. Phys. Lipids. 109 (1), 37-45 (1990).</li>
<li>Kris-Etherton, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+debate+about+n-6+polyunsaturated+fatty+acid+recommendations+for+cardiovascular+health%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Diabetic+Association%22%5BJournal%5D)">The debate about n-6 polyunsaturated fatty acid recommendations for cardiovascular health.</a> Journal of the American Diabetic Association. 110 (2), 201-204 (2010).</li>
<li>Rizzo, W. B., Phillips, M. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adrenoleukodystrophy%3A+dietary+oleic+acid+lowers+hexacosanoate+levels%5BTitle%5D)+AND+%22Annals+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Adrenoleukodystrophy: dietary oleic acid lowers hexacosanoate levels.</a> Annals of Neurology. 21 (3), 232-239 (1987).</li>
<li>Bozan, B., Temelli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chemical+composition+and+oxidative+stability+of+flax%2C+safflower+and+poppy+seed+and+seed+oil%5BTitle%5D)+AND+%22Bioresource+Tech%22%5BJournal%5D)">Chemical composition and oxidative stability of flax, safflower and poppy seed and seed oil.</a> Bioresource Tech. 99, 6354-6359 (2005).</li>
<li>Krein, S., Meldurm, H., Hawkins, S., Foy, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clinical+benefits+of+conjugated+linoleic+acid+to+3-dimensional+wrinkle+morphology%5BTitle%5D)+AND+%22J.+American+Academy+of+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Clinical benefits of conjugated linoleic acid to 3-dimensional wrinkle morphology.</a> J. American Academy of Dermatology. 60 (3), AB30(2009).</li>
<li>Yu, Y., Correll, P. H., Heuvel, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Conjugated+linoleic+acid+decreases+production+of+pro-inflammatory+products+in+macrophages%3A+Evidence+for+a+PPARy+dependent+mechanism%5BTitle%5D)+AND+%22Biochimica+et+Biophysica+Acta%22%5BJournal%5D)">Conjugated linoleic acid decreases production of pro-inflammatory products in macrophages: Evidence for a PPARy dependent mechanism.</a> Biochimica et Biophysica Acta. 1581 (3), 89-99 (2002).</li>
<li>Palombo, J., Ganguly, A., Bistrian, B., Menard, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+anti-proliferative+effects+of+biologically+active+isomers+of+conjugated+linoleic+acid+on+human+colorectal+and+prostatic+cancer+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Letters%22%5BJournal%5D)">The anti-proliferative effects of biologically active isomers of conjugated linoleic acid on human colorectal and prostatic cancer cells.</a> Cancer Letters. 177, 163-172 (2002).</li>
<li>Granda, M., Sinclair, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acids+and+obesity%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Pharm.+Design%22%5BJournal%5D)">Fatty acids and obesity.</a> Current Pharm. Design. 15 (36), 4117-4125 (2009).</li>
<li>Rosenstein, E., Kushner, L., Kramer, N., Kazandjian, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pilot+study+of+dietary+fatty+acid+supplementation+in+the+treatment+of+adult+periodontitis%5BTitle%5D)+AND+%22Prostaglandins%2C+Leukotrienes+and+Essential+F.A%22%5BJournal%5D)">Pilot study of dietary fatty acid supplementation in the treatment of adult periodontitis.</a> Prostaglandins, Leukotrienes and Essential F.A. 68 (3), 213-218 (2003).</li>
<li>Ferretti, A., Flanagan, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antithromboxane+activity+of+dietary+alpha-linolenic+acid%3A+a+pilot+study%5BTitle%5D)+AND+%22Prostaglandins+Leukot.+Essent.+Fatty+Acids%22%5BJournal%5D)">Antithromboxane activity of dietary alpha-linolenic acid: a pilot study.</a> Prostaglandins Leukot. Essent. Fatty Acids. 54 (6), 451-455 (1995).</li>
<li>Arpita, C., Pradeep, K. D., Chowdhury, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+Fatty+Acids+and+Cholesterol+Present+in+Bile+on+Expression+of+Virulence+Factors+and+Motility+of+Vibrio+cholera%5BTitle%5D)+AND+%22Infection+and+Immunity%22%5BJournal%5D)">Effect of Fatty Acids and Cholesterol Present in Bile on Expression of Virulence Factors and Motility of Vibrio cholera.</a> Infection and Immunity. 75 (4), 1946-1953 (2007).</li>
<li>Yamasaki, S., Asakura, M., Neogi, S. B., Hinenoya, A., Iwaoka, E., Aoki, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+virulence+potential+of+Vibrio+cholerae+by+natural+compounds%5BTitle%5D)+AND+%22Indian+J.+Med.+Res%22%5BJournal%5D)">Inhibition of virulence potential of Vibrio cholerae by natural compounds.</a> Indian J. Med. Res. 133 (2), 232-239 (2011).</li>
<li>WHO | Efforts must be intensified to control Zimbabwe cholera outbreak [WHO PRESS RELEASE] [Internet]. , World Health Organization. Available from:
		
	 <a target="_blank" href="http://www.who.int/csr/don/2009_01_30/en/">http://www.who.int/csr/don/2009_01_30/en/</a> (2010).</li>
<li>Hendriksen, R. S., Price, L. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Population+Genetics+of+Vibrio+cholerae+from+Nepal+in+2010%3A+Evidence+on+the+origin+of+the+Haitian+outbreak%5BTitle%5D)+AND+%22mBio%22%5BJournal%5D)">Population Genetics of Vibrio cholerae from Nepal in 2010: Evidence on the origin of the Haitian outbreak.</a> mBio. 2 (4), 1-6 (2011).</li>
<li>Schaeffler, A., Gross, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fatty+acid-induced+induction+of+Toll-like+receptor-4%2Fnuclear+factor-kappa+B+pathway+in+adipocytes+links+nutritional+signaling+with+innate+immunity%5BTitle%5D)+AND+%22Immunology%22%5BJournal%5D)">Fatty acid-induced induction of Toll-like receptor-4/nuclear factor-kappa B pathway in adipocytes links nutritional signaling with innate immunity.</a> Immunology. 126 (2), 233-245 (2009).</li>
</ol>

Os autores deste estudo não têm qualquer interesse financeiro a partir dos resultados deste estudo. O financiamento para este estudo foi fornecido para FT pela Universidade Kean, no entanto, FT é atualmente um funcionário Kingsborough Community College.

Sugestão de concentração de ácidos graxos e toxina da cólera Embora o mecanismo exato de como ácidos graxos aumentar a imunidade da mucosa é desconhecida, vários estudos têm tentado investigar os seus efeitos benéficos. Este estudo tem como objectivo proporcionar o método para determinar a concentração máxima de ácidos gordos que as células podem tolerar bem como a concentração máxima de toxina da cólera que as células podem tolerar sem uma influência significativa sobre a sobrevivência da célu...

Os benefícios de saúde de ácidos graxos, como o oléico, linoléico e linolênico têm sido e continuam a ser documentado. Por exemplo, o ácido oleico ajuda a facilitar a penetração dos fármacos lipofílicos no 1,2 corpo, a doença cardíaca coronária reduz em 24% quando substituídos por ácidos gordos saturados 3, e é utilizada para o tratamento de doenças metabólicas como a adrenoleucodistrofia 4 que é um X-ligados distúrbio genético do metabolismo dos ácidos gordos. . Enquanto um precursor necessário para o ácido araquidónico em mamíferos, o ácido linoleico (ao contrário do ácido oleico) não é sintetizada pelo corpo e devem ser obtidos através de fontes externas, tais como o consumo de semente de linho 5 Estudos mostram vários efeitos benéficos à saúde de ácido linoleico, tais como: propriedades anti-envelhecimento para a pele; seis propriedades anti-inflamatórias; 7 reduziu a proliferação de células de carcinoma colorretal e próstata; 8 ea capacidade para combater a obesidade e promoção o9. linolênico f saúde cardiovascular desempenha um papel na redução da inflamação periodontal, tromboxano 10 e modulando a biossíntese da prostaciclina e 11. Arpita 12 estudaram a influência dos ácidos graxos biliares e colesterol em V. expressão de fatores de virulência e motilidade cholerae &#39;s. Yamasaki 13 indicaram que o extrato de metanol a partir de pimentas vermelhas, e outros compostos extraídos naturalmente, pode, potencialmente, diminuir a produção de toxina da cólera. É concebível a considerar a utilização de produtos alimentares que são ricos em ácidos gordos superiores (tais como sementes de linho) na prevenção e alívio de doenças infecciosas tais como a cólera através do fornecimento de imunidade da mucosa. Foi realizado investigações para solubilizar os ácidos gordos e para determinar, usando testes de proliferação de células, a concentração máxima de ácidos gordos que as células epiteliais intestinais humanas pode tolerar sem efeitos prejudiciais sobre a ceviabilidade ll. Colocámos a hipótese de que os ácidos oleico, linoleico e linolénico, proporcionar um efeito benéfico sobre a viabilidade das células em concentrações mais baixas, mas que, em concentrações mais elevadas que são tóxicos para as células. Também solubilizado a toxina da cólera e determinada a concentração máxima de toxina da cólera que BALB / C de rato macrófagos pode tolerar sem uma diminuição significativa da viabilidade celular. Nossa hipótese é um efeito tóxico da toxina da cólera na viabilidade celular, mesmo em nível muito baixo. O método de solubilização de uma toxina da cólera e utilizá-la para determinar a quantidade máxima da toxina que as células podem tolerar sem uma diminuição significativa na capacidade de sobrevivência proporciona uma vantagem para estudos futuros. Por exemplo, uma combinação das metodologias acima podem ser utilizadas para determinar se os ácidos gordos de fornecer células com a imunidade da mucosa contra a infecção de cólera. Para o melhor de nosso conhecimento, esta metodologia racional e não foi explorado. Nós discuss como os nossos dados preliminares podem ser utilizados em investigações posteriores para determinar se o oleico, linoleico e linolénico fornecer células com a imunidade da mucosa contra a infecção de cólera.

<table><tbody><tr><td colspan="4">Cells/Reagent</td></tr><tr><td>Mus musculus macrófagos</td><td>ATCC</td><td>ATCC RAW 264.7</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Modified Eagle's Medium</td><td>ATCC</td><td>30-2002</td><td></td></tr><tr><td>L-glutamina</td><td>ATCC</td><td>30-2115</td><td></td></tr><tr><td>Soro fetal bovino </td><td>Bio-west</td><td>S0250</td><td></td></tr><tr><td>Antibiótico/ antimicótico </td><td>Hyclone</td><td>SV3007901</td><td></td></tr><tr><td>Células epiteliais intestinais humanas </td><td>ATCC</td><td>ATTC CCL-241</td><td></td></tr><tr><td>HybriCare media </td><td>ATCC</td><td>46-X</td><td></td></tr><tr><td>Ácido oleico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>O1008</td><td></td></tr><tr><td>Ácido linoleico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L-1376</td><td></td></tr><tr><td>Ácido linolênico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L-2376</td><td></td></tr><tr><td>Toxina da cólera</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C8052</td><td></td></tr><tr><td colspan="4">Equipment</td></tr><tr><td>BD Falcon Placas de cultura de células de 96 poços</td><td>BD Biosciences</td><td>351172</td><td></td></tr><tr><td>Spectrophotometer com software Dynex Revelations 4.22</td><td>Dynex</td><td>91000101</td><td></td></tr></tbody></table>

determinação de ácidos graxos tolerável e concentrações toxina da cólera usando humanos células epiteliais intestinais e balb / c mouse macrófagos

Determination of Tolerable Fatty Acids and Cholera Toxin Concentrations Using Human Intestinal Epithelial Cells and BALB/c Mouse Macrophages

O papel positivo dos ácidos graxos na prevenção e combate de doenças não-humanos e humanos têm sido e continuam a ser amplamente documentado. Essas funções incluem influências sobre doenças infecciosas e não infecciosas, incluindo a prevenção da inflamação, bem como a imunidade da mucosa para doenças infecciosas. A cólera é uma doença intestinal aguda causada pela bactéria Vibrio cholerae. Ela ocorre em países em desenvolvimento e se não tratada, pode resultar em morte. Embora existam vacinas para a cólera, eles nem sempre são eficazes e são necessários outros métodos preventivos. Partimos para determinar as concentrações toleráveis ​​de três ácidos graxos (ácidos oléico, linoléico e linolênico) e toxina da cólera usando o mouse BALB / C macrófagos e células epiteliais intestinais humanas, respectivamente. Nós solubilizado os ácidos gordos superiores e os ensaios de proliferação de células utilizadas para determinar as gamas de concentração e concentrações específicas dos ácidos gordos que não estãot prejudiciais para a viabilidade da célula epitelial intestinal humana. Nós solubilizado a toxina da cólera e utilizado num ensaio para determinar as gamas de concentração e concentrações específicas de que a toxina da cólera não é estatisticamente diminuir a viabilidade celular em ratinhos BALB / C macrófagos. Encontrámos as concentrações óptimas de ácidos gordos para estar entre 1-5 ng / mL, e que, para a toxina da cólera de ser &lt;30 ng por tratamento. Estes dados podem ajudar estudos futuros que visem encontrar um papel mucosa protetora para os ácidos graxos na prevenção ou alívio de infecções de cólera.

Determinação da concentração ótima de Ácidos Graxos A concentração óptima de ácidos gordos é definida como a concentração máxima em que o crescimento celular é comparável ou superior à das células de controlo, com relativamente baixa variabilidade nos resultados. Para determinar a concentração óptima de oleico, células de ácidos linoleico e linolénico, foram inicialmente tratadas com várias concentrações de cada ácido gordo em grandes incrementos e depois com pequenos incrementos. Figur...

Partimos para determinar as concentrações toleráveis ​​de três ácidos graxos (ácidos oléico, linoléico e linolênico) e toxina da cólera que não significativamente e adversamente afetar a sobrevivência da célula por solubilização dos ácidos graxos e da toxina e usá-los em ensaios de sobrevivência celular.

Determinação de ácidos graxos tolerável e Concentrações toxina da cólera Usando Humanos células epiteliais intestinais e BALB / c mouse macrófagos

The positive role of fatty acids in the prevention and alleviation of non-human and  human diseases have been and continue to be extensively documented. ...

O objetivo geral deste procedimento é determinar as concentrações toleráveis de ácidos graxos e da toxina da cólera que não influenciem negativamente a sobrevivência celular. Isso é realizado primeiramente cultivando o tipo apropriado de células. O segundo passo é incubá-las com diferentes concentrações dos três ácidos graxos a serem testados ou com a toxina da cólera.Após 24 horas, a sobrevivência celular é avaliada utilizando um ensaio de MTT. Em última análise, os dados de espectrometria do ensaio de MTT mostram as concentrações ideais de ácidos graxos e toxina da cólera com as quais as células podem ser tratadas sem redução significativa na sobrevivência. As implicações dessa técnica estendem-se para a prevenção de infecções por cólera, pois as vacinasnem sempre são eficazes.Macrófagos de camundongos Mus musculus da linhagem Bowel C serão utilizados para todas as determinações de co-toxina e para a determinação em maior escala da concentração de ácidos graxos. As células são cultivadas em um dos dois meios seguintes: DMEM com L-glutamina suplementado com 10% de soro fetal bovino e 1% de antibiótico-antimicótico, ou meio RPMI 1640 suplementado com 10% de soro fetal bovino, 5% de

determination-tolerable-fatty-acids-cholera-toxin-concentrations

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Aqui, nós detalhe uma metodologia para o isolamento rápido de células de ratinho intestinais dendríticas (DC) e macrófagos. Caracterização fenotípica de DCs intestinais e macrófagos é realizada utilizando várias cores análise de fluxo citométrico enquanto enriquecimento grânulo magnético seguido por separação de células é usado para produzir populações altamente puros para estudos funcionais.

Isolamento e caracterização de células dendríticas e macrófagos a partir do intestino do rato

Um ensaio de elevado débito para a Salmonella in vitro o fenótipo ou outra associação bacteriana, invasão e replicação em células fagocíticas, com capacidade de alto rendimento foi desenvolvido. O método foi empregado para avaliar knockout gene Salmonella cepas mutantes de seus envolvimentos na interação patógeno-hospedeiro.

De alta capacidade: Ensaio para Fenótipo Salmonella enterica Typhimurium Association, invasão e replicação em macrófagos

Descrevemos a quantificação de Salmonella typhimurium citosólica e vacuolar em macrófagos derivados da medula óssea usando permeabilização diferencial de digitonina.

Quantificação de citosólico vs vacuolar<em&gt; Salmonella</em&gt; Em macrófagos primários por Permeabilização Diferencial

De novo a lipogênese e oxidação do ácido β-gordo constituem vias metabólicas importantes em hepatócitos, caminhos que são perturbados em vários distúrbios metabólicos, incluindo a doença de fígado gordo. Aqui demonstramos isolamento de hepatócitos primários de rato e descrever quantificação da oxidação de ácidos graxos e β-lipogênese.

Determinação da oxidação de ácidos gordos e Lipogênese em Rato Os hepatócitos primária

As células Caco-2 podem servir como um modelo in vitro para estudar o transporte de lipídios por enterócitos e drogas/vitaminas lipossolúveis. O sistema de membrana permeável separa o compartimento apical do basolateral, enquanto o sistema de expressão de lentivírus oferece um método eficaz de superexpressão gênica. O isolamento das lipoproteínas é confirmado por TEM.

Usando Caco-2 em células para estudo LIPID Transportes pelo intestino

Este protocolo descreve o modelo do rato cefoperazona de infecção por Clostridium difficile (CDI), utilizando uma estirpe clinicamente relevante e geneticamente-tratável, R20291. Ênfase na monitorização clínica da doença, C. difficile enumeração bacteriana, a citotoxicidade de toxinas, e alterações histopatológicas em todo CDI em um modelo de rato estão detalhadas no protocolo.

tratados com Cefoperazone Rato Modelo de clinicamente relevante<em&gt; Clostridium difficile</em&gt; R20291 Strain

Aqui são apresentados dois métodos para determinar a função de barreira intestinal. Um medidor epitelial (volts/ohms) é usado para a medição da resistência elétrica transepitelial de epitélios cultivadas diretamente nos poços de cultura de tecidos. Nos ratos, o método de gavage FITC-dextrano é usado para determinar a permeabilidade intestinal na vivo.

In Vitro e In Vivo de abordagens para determinar a permeabilidade da célula epitelial Intestinal

Este protocolo descreve um ensaio para a caracterização da formação do gota do lipido (LD) em organóides intestinais humanos em cima da estimulação com ácidos gordos. Nós discutimos como este ensaio é usado para a quantificação da formação do LD, e como pode ser usado para a seleção elevada da taxa de transferência para as drogas que afetam a formação do LD.

Um ensaio à base de fluorescência para caracterização e quantificação da formação de gotas lipídicas em organóides intestinais humanos

Função de barreira epitelial intestinal disregulada e respostas imunológicas são marcas de doença inflamatória intestinal que permanecem mal investigadas devido à falta de modelos fisiológicos. Aqui, descrevemos um modelo de alça intestinal de camundongos que emprega um segmento intestinal bem vascularizado e exteriorizado para estudar a permeabilidade mucosa e o recrutamento de leucócitos in vivo.

Avaliação Funcional da Permeabilidade Intestinal e Migração Transepitelial de Neutrófilo em Camundongos usando um Modelo de Laço Intestinal Padronizado

Escherichia coli causa sepse em neonatos que ingerem a bactéria na época do nascimento. O processo envolvido na capacidade da E. coli de viajar do trato entérico para a corrente sanguínea é pouco compreendido. Este modelo in vitro avalia a capacidade das cepas de E. coli de viajar através das células epiteliais intestinais.

Avaliação da Transcitose Intestinal de Isolados de Bacteremia de Escherichia coli Neonatal

Aqui descrevemos a construção de um sistema básico de linhagem celular intestinal tridimensional (3D) e um protocolo de inclusão em parafina para avaliação microscópica de luz de equivalentes intestinais fixos. A coloração de proteínas selecionadas permite a análise de múltiplos parâmetros visuais de um único experimento para uso potencial em estudos pré-clínicos de triagem de drogas.

Sistema Modelo Intestinal Tridimensional Básico (3D) com um Componente Imunológico

Aprenda a determinar concentrações toleráveis de ácidos graxos e toxina da cólera usando células epiteliais intestinais humanas e macrófagos de camundongos BALB/c. Este método avalia a viabilidade celular por ensaio MTT.

Determinação de ácidos graxos tolerável e Concentrações toxina da cólera Usando Humanos células epiteliais intestinais e BALB / c mouse macrófagos (Vídeo) | JoVE Journal

Determinação de ácidos graxos tolerável e Concentrações toxina da cólera Usando Humanos células epiteliais intestinais e BALB / c mouse macrófagos

Explorar mais vídeos