Ligadura altamente eficiente de pequeno RNA moléculas microRNA para quantificação por sequenciamento de alto rendimento

O objetivo geral deste procedimento é preparar microRNAs de forma imparcial para sequenciamento de alto rendimento. Isso é feito primeiro preparando ou comprando oligonucleotídeos de DNA que são competentes para ligação às três extremidades principais do micro RNA. O segundo passo é ligar os três oligonucleotídeos de DNA primários às três extremidades principais do micro RNA.

Em seguida, o produto de ligação é purificado em gel e o ligante de oligonucleotídeo de cinco RNA primários é ligado às cinco extremidades principais do micro RNA. A etapa final é converter as moléculas híbridas em CDNA e, em seguida, amplificar o CDNA por reação em cadeia da polimerase. Em última análise, a clonagem de microRNA e o sequenciamento de alto rendimento são usados para mostrar o perfil amplo do transcriptoma de microRNAs de maneira quantitativa na resolução de nucleotídeos individuais.