Name: Simples e Testes Olfativo para Ratos assistido por computador (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-15T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 40 s
Description: Aprenda a realizar testes olfativos simples em camundongos com análise assistida por computador. Este método avalia discriminação, preferência e sensibilidade a odores usando ImageJ. Ideal para estudos de neurociência comportamental.

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Este trabalho é financiado pela Fundação Nacional Suíça (31_138429) e pela Fundação Synapsis para o apoio à pesquisa sobre a doença de Alzheimer.

Todos os procedimentos com animais estão em conformidade com a directiva comunitária 2010/63 / UE relativa à protecção dos animais utilizados para fins científicos e são aprovados pelo Comitê Animal Care locais (cantão de Fribourg, Suíça). 1. Preparação de animais <ol><li> Os animais experimentais <ol><li> Realizar experimentos sobre tipo selvagem macho adulto e camundongos transgênicos (C57BL / 6 background) de 3-5 meses de idade. Os três grupos de ratos correspondem a controlos de tipo selvagem da mesma ninhada (grupo A, Jagged1 Flox / Flox 19) e duas linhas de ratinhos KO condicionais (grupo B, e C Jagged1ncKO, Jagged1gcKO). </li><li> Os ratos domésticos em condições de laboratório padrão em uma sala ventilada, com um ciclo de 12 hr controlado claro / escuro e fornecer comida e água ad libitum. </li></ol></li></ol> 2. Setup Experimental <ol><li> Arena Experimental <ol><li> Para a arena experimental, use uma gaiola de rato esterilizado limpo (36 cm de comprimento x 20,5 centímetros de largura x 13,5 centímetros de altura) (Figura 1A). </li><li> Atribuir a cada rato para uma gaiola contado com camas frescas, 3 centímetros de altura. Se gaiolas são reutilizados, como no teste de sensibilidade odor, tomar as seguintes medidas para evitar a contaminação cruzada entre odores e camundongos. <ol><li> Marque lado da água. </li><li> Limpar as paredes mais estreitas das gaiolas com dois papéis de seda pulverizados com etanol a 70%, um para cada lado. </li><li> Empilhe gaiolas de acordo com o genótipo dos ratos e armazenar temporariamente sob uma capa laminar. </li></ol></li></ol></li><li> Câmera <ol><li> Montar uma câmara num tripé personalizada com o objectivo em 58 cm a partir do fundo da gaiola (Figura 1A). Fixar a posição do tripé e a gaiola e delimitar com marcas para permitir que a câmara seja centrado sobre a parte superior da gaiola. </li><li> Gravar vídeos em 320 pixels x 240 pixels, 15,08 quadros por segundo como arquivos MOV. </li></ol></li><li> Odores <ol><li> Ressuspender o scents, quando indicado, no solvente em que são solúveis. </li><li> Para o teste de preferência manteiga de amendoim uso. Ressuspender a manteiga de amendoim em óleo de amendoim (10% w / v). </li><li> Para evitar o uso de testes puro 2-metilbutírico (2-Mo) de ácido (98%). </li><li> Para o teste de sensibilidade, use urina feminina da mesma colônia mouse e fundo (C57BL / 6). <ol><li> Por conveniência recolher a urina de 1-2 dias antes do teste olfactivo. Contenha e segure o mouse sob o capô com a barriga acima da grade da gaiola. De acordo com a grelha de gaiola colocar uma placa de petri de plástico para recolher as gotas de urina. </li><li> Recolhe-se o de urina a partir de cada uma das fêmeas em um tubo de 1,5 ml e misturar todas as amostras de urina para normalizar para a variabilidade entre os animais. Armazenar a -20 ° C até à sua utilização. </li><li> No dia da experiência, descongelar a urina e executar quatro diluições em água destilada duas vezes com um factor de diluição de 10 (1:10, 1: 100, 1: 1000, 1: 10.000). </li></ol></li></ol></li></ol>3. Teste Olfativo Nota: Neste protocolo odores foram deliberadamente escolhidas que são percebidos como atractivos fortes (manteiga de amendoim e de urina feminina) ou forte repelente (ácido 2-MB) 15. É importante realizar a preferência e testes de sensibilidade aos odores agradáveis ​​antes do teste de esquiva para eliminar a possibilidade de qualquer interferência com o comportamento olfactiva. No entanto, por uma questão de simplicidade, neste artigo, a preferência ea evasão teste será ambos descritos sob o teste de percepção. Cada sessão comportamental começa com uma fase de habituação. <ol><li> Habituação Fase <ol><li> Colocar o animal na gaiola atribuído limpo e deixá-lo explorar durante 5 minutos (Figura 1B). Uma vez que o ambiente da gaiola experimental é familiar para a gaiola de origem, este curto período de tempo é suficiente para permitir a habituação. </li><li> Se o teste de sensibilidade é concluído em um dia, realizar habituação apenas uma vez antes do application maior do odor diluído. Se o teste de sensibilidade é levada a cabo em dias diferentes, em cada dia é necessária uma fase de habituação de uma nova gaiola limpa. </li></ol></li><li> Teste de Percepção <ol><li> Depois de habituação, activar a câmara imediatamente e de pipeta 60 ul de aroma agradável (manteiga de amendoim) e 60 ul do aroma neutro (água da torneira) sobre as paredes opostas da gaiola em cerca de 10 cm a partir da parte inferior (Figura 1C). </li><li> Deixe o rato explorar os odores durante 2 minutos (Figura 1D). Depois disso, desligue a câmera. </li><li> Neste ponto, prosseguir com o próximo do rato a partir da fase de habituação. Realizar o teste de esquiva exactamente da mesma maneira através da aplicação de 60 ul de odor repelente (ácido 2-MB) e 60 ul de água. </li></ol></li><li> Teste de sensibilidade <ol><li> Avaliar o limiar de captação de ratos macho a concentrações crescentes de urina feminina na seguinte ordem: 1: 10.000; 1: 1000; 1: 100; 1:10 e urina puro. </li><li> Depois de habituação, cada rato para expor a diluição mais elevada pipetados pelo experimentador como anteriormente descrito em 3.2.1. </li><li> Grave o comportamento exploratório de urina contra água, dentro de um prazo de 2 minutos em uma câmara de vídeo. Depois de todas as coortes ratos são testados para a mais alta diluição (1: 10.000), para expor uma concentração mais elevada de urina, como indicado acima. </li></ol></li></ol> 4. Post-hoc de Análise de Dados Nota: Todos os testes comportamentais descritas são processadas post hoc seguindo as instruções de análise de dados. <ol><li> Abrir arquivos MOV em ImageJ para sistemas Windows <ol><li> Instale Quick Time for Java usando as configurações personalizadas de http://www.apple.com/quicktime/download. </li><li> Instale o plugin do Quick Time do site da ImageJ (http://rsb.info.nih.gov/ij/plugins/qt-capture.html). </li><li> Importar o QTJava.zip (C: Program Files QuickTime QTSystem) nas extens bibliotecaion de ImageJ (.ImageJ jre lib ext). </li><li> Copie também o QTJava.zip na pasta plugins e renomeá-lo como QTJava.jar. </li><li> Instale as seis scripts anexados na pasta Macros (ImageJ plugins Macros). </li><li> Abrir ImageJ e compilar e executar o plugin do Quick Time, a partir daí perto ImageJ. </li><li> Reabrir ImageJ e abra o arquivo MOV usando Arquivo&gt; Importar&gt; usando Quick Time. </li></ol></li><li> Ajuste de Vídeo <ol><li> Uma vez que o ficheiro de vídeo é aberto no ImageJ, cortar o vídeo a fim de obter uma constante de 2 minutos a partir do tempo de exploração do experimentador pipetados os odorantes na gaiola (T0). Identificar o quadro correspondente ao T0 e remover os quadros anteriores usando incrementos de 1 (ImageJ Imagem Stacks ToolsSlice removedor). Use o mesmo comando para excluir todos os quadros superiores a 2 min exploração. </li><li> Certifique-se de que a gaiola é centrado e se necessário, use a Imagem&gt; Transform&gt; comando Girar para alinhá-lo. </li></ol></li><li> Video Processamento Nota: O processamento de vídeo é totalmente assistida por computador e utiliza comandos macros que acompanham este papel. <ol><li> A fim de diminuir a superfície para a gaiola de um 127 pixels x 218 pixels tamanho executar o Passo 1 macro do Plugin&gt; Macros&gt; Executar comando. Mover o rectângulo fixado sobre a gaiola (Figura 2, Passo 1). </li><li> Cortar a área da gaiola sobre a região de interesse (ROI), utilizando o Passo 2 macro (Figura 2, Passo 2). </li><li> Use a macro Passo 3 para extrair a imagem do rato do fundo, atribuindo um sinal de limiar, despeckling e filtrando a variação do sinal. Os valores de saída da parcela do eixo Z indicam os valores de cinzentos médios, correspondendo à intensidade da sombra rato mover-se dentro da ROI da &quot;câmara de água&quot; durante 2 min a exploração. Copie os resultados em uma planilha nomeada de acordo com o ROI em um arquivo de planilha (Figura 2, Passo 3). </li><li> Use a macro Passo 4 paraextrair os valores de cinza médios do rato na ROI &quot;câmara de odor&quot;. Copie os resultados em uma planilha nomeada de acordo com o ROI no mesmo arquivo de planilha como em 4.3.3 (Figura 2, Passo 4). </li><li> Para restringir ainda mais a análise do movimento do mouse no ROI &quot;perímetro água&quot; usar o Passo 5 macro. Copie o resultado na planilha nomeada de acordo com o ROI no mesmo arquivo de planilha como em 4.3.3 (Figura 2, Passo 5). </li><li> Para restringir a análise do movimento do mouse no ROI &quot;perímetro odor&quot; usar a macro Passo 6. Copie o resultado na planilha nomeada de acordo com o arquivo de ROI planilha como em 4.3.3 (Figura 2, Passo 6). </li><li> Processar todos os vídeos e verificar a consistência do número de quadros por animais. Aqui, gravar todos os animais para 1.810 quadros correspondentes a uma sessão de exploração 2 min. </li><li> Para cada animal e para cada ROI tipo quadros com va cinzento médiolues maior do que 0. Divide o número de quadros pelos valores correspondentes a 1 segundo e obter os segundos gastos em cada ROI. </li></ol></li></ol> 5. Análise Estatística <ol><li> Para cada ensaio, verificar homogeneidade da variância dentro de grupos / genótipos pelo teste de Bartlett utilizando a fórmula disponível no http://www.real-statistics.com/one-way-analysis-of-variance-anova/homogeneity-variances/. </li><li> No teste de atração e de evasão, proceder a comparações entre os tempos passados ​​com água contra odor dentro de um grupo usando um teste t de Student não-direcional assumindo variâncias iguais ou desiguais, dependendo dos resultados de teste de Bartlett. Compare os tempos passados ​​com os odores subtraídos pelo tempo gasto com água entre os genótipos por ANOVA one-way com teste post-hoc de Bonferroni. </li><li> No teste de sensibilidade analisar as comparações entre o tempo gasto com o odor subtraído do tempo gasto com water entre os grupos em diluições específicas de urina por ANOVA one-way com teste post-hoc de Bonferroni. Comparar a sensibilidade entre grupos às crescentes concentrações de odor por 2-Way ANOVA com repetições com teste post-hoc de Bonferroni. </li><li> Interação entre genótipos e tratamentos no teste de atração e evasão são investigados por 2-way ANOVA com o teste post-hoc de Bonferroni. </li></ol>

<ol><li>Doty, R. L., Kamath, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influences+of+age+on+olfaction%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Cognitive+Science%22%5BJournal%5D)">The influences of age on olfaction: a review.</a> Cognitive Science. 5, 20(2014).</li>
<li>Mesholam, R. I., Moberg, P. J., Mahr, R. N., Doty, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfaction+in+neurodegenerative+disease%3A+a+meta-analysis+of+olfactory+functioning+in+Alzheimer%E2%80%99s+and+Parkinson%E2%80%99s+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Olfaction in neurodegenerative disease: a meta-analysis of olfactory functioning in Alzheimer’s and Parkinson’s diseases.</a> Archives of Neurology. 55 (1), 84-90 (1998).</li>
<li>Moberg, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+Dysfunction+in+Schizophrenia%3A+A+Qualitative+and+Quantitative+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Olfactory Dysfunction in Schizophrenia: A Qualitative and Quantitative Review.</a> Neuropsychopharmacology. 21 (3), 325-340 (1999).</li>
<li>Kovács, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+olfactory+dysfunction+in+aging+and+neurodegenerative+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Ageing+Research+Reviews%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of olfactory dysfunction in aging and neurodegenerative disorders.</a> Ageing Research Reviews. 3 (2), 215-232 (2004).</li>
<li>Barrios, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfaction+and+neurodegeneration+in+HD%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Olfaction and neurodegeneration in HD.</a> Neuroreport. 18 (1), 73-76 (2007).</li>
<li>Doty, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfaction+in+Parkinson%E2%80%99s+disease+and+related+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Disease%22%5BJournal%5D)">Olfaction in Parkinson’s disease and related disorders.</a> Neurobiology of Disease. 46 (3), 527-552 (2012).</li>
<li>Doty, R. L., Shaman, P., Dann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+University+of+Pennsylvania+Smell+Identification+Test%3A+a+standardized+microencapsulated+test+of+olfactory+function%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%26+Behavior%22%5BJournal%5D)">Development of the University of Pennsylvania Smell Identification Test: a standardized microencapsulated test of olfactory function.</a> Physiology & Behavior. 32 (3), 489-502 (1984).</li>
<li>Devanand, D. p, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+Deficits+in+Patients+With+Mild+Cognitive+Impairment+Predict+Alzheimer%E2%80%99s+Disease+at+Follow-Up%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Olfactory Deficits in Patients With Mild Cognitive Impairment Predict Alzheimer’s Disease at Follow-Up.</a> American Journal of Psychiatry. 157 (9), 1399-1405 (2000).</li>
<li>Conti, M. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odor+Identification+Deficit+Predicts+Clinical+Conversion+from+Mild+Cognitive+Impairment+to+Dementia+Due+to+Alzheimer%E2%80%99s+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Clinical+Neuropsychology%22%5BJournal%5D)">Odor Identification Deficit Predicts Clinical Conversion from Mild Cognitive Impairment to Dementia Due to Alzheimer’s Disease.</a> Archives of Clinical Neuropsychology. 28 (5), 391-399 (2013).</li>
<li>Keller, A., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Better+Smelling+Through+Genetics%3A+Mammalian+Odor+Perception%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+neurobiology%22%5BJournal%5D)">Better Smelling Through Genetics: Mammalian Odor Perception.</a> Current opinion in neurobiology. 18 (4), 364-369 (2008).</li>
<li>Brai, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Notch1+activity+in+the+olfactory+bulb+is+odour-dependent+and+contributes+to+olfactory+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Notch1 activity in the olfactory bulb is odour-dependent and contributes to olfactory behaviour.</a> European Journal of Neuroscience. 40 (10), 3436-3449 (2014).</li>
<li>Larson, J., Hoffman, J. S., Guidotti, A., Costa, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+discrimination+learning+deficit+in+heterozygous+reeler+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Olfactory discrimination learning deficit in heterozygous reeler mice.</a> Brain Research. 971 (1), 40-46 (2003).</li>
<li>Alonso, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+Discrimination+Learning+Increases+the+Survival+of+Adult-Born+Neurons+in+the+Olfactory+Bulb%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Olfactory Discrimination Learning Increases the Survival of Adult-Born Neurons in the Olfactory Bulb.</a> The Journal of Neuroscience. 26 (41), 10508-10513 (2006).</li>
<li>Wesson, D. W., Keller, M., Douhard, Q., Baum, M. J., Bakker, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+urinary+odor+discrimination+in+female+aromatase+knockout+%28ArKO%29+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hormones+and+behavior%22%5BJournal%5D)">Enhanced urinary odor discrimination in female aromatase knockout (ArKO) mice.</a> Hormones and behavior. 49 (5), 580-586 (2006).</li>
<li>Kobayakawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+versus+learned+odour+processing+in+the+mouse+olfactory+bulb%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Innate versus learned odour processing in the mouse olfactory bulb.</a> Nature. 450 (7169), 503-508 (2007).</li>
<li>Witt, R. M., Galligan, M. R., Despinoy, J., Segal, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+Behavioral+Testing+in+the+Adult+Mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments+JoVE%22%5BJournal%5D)">Olfactory Behavioral Testing in the Adult Mouse.</a> Journal of Visualized Experiments JoVE. (23), (2009).</li>
<li>Lee, A. W., Emsley, J. G., Brown, R. E., Hagg, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marked+differences+in+olfactory+sensitivity+and+apparent+speed+of+forebrain+neuroblast+migration+in+three+inbred+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Marked differences in olfactory sensitivity and apparent speed of forebrain neuroblast migration in three inbred strains of mice.</a> Neuroscience. 118 (1), 263-270 (2003).</li>
<li>Page, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computerized+assessment+of+social+approach+behavior+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Behavioral+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Computerized assessment of social approach behavior in mouse.</a> Frontiers in Behavioral Neuroscience. 3, 48(2009).</li>
<li>Nyfeler, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Jagged1+signals+in+the+postnatal+subventricular+zone+are+required+for+neural+stem+cell+self-renewal%5BTitle%5D)+AND+%22Embo+J%22%5BJournal%5D)">Jagged1 signals in the postnatal subventricular zone are required for neural stem cell self-renewal.</a> Embo J. 24 (19), Available from:
	
 <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=16163386"">http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=16163386"</a> 3504-3515 (2005).</li>
<li>Tong, M. T., Peace, S. T., Cleland, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Properties+and+mechanisms+of+olfactory+learning+and+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Behavioral+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Properties and mechanisms of olfactory learning and memory.</a> Frontiers in Behavioral Neuroscience. 8, (2014).</li>
<li>Steinlechner, S. Chapter 2.12 - Biological Rhythms of the Mouse. The Laboratory Mouse (Second Edition). , Available from:
 
 <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780123820082000179">http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780123820082000179</a> 383-407 (2012).</li>
<li>Corthell, J., Stathopoulos, A., Watson, C., Bertram, R., Trombley, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+Bulb+Monoamine+Concentrations+Vary+with+Time+of+Day%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Olfactory Bulb Monoamine Concentrations Vary with Time of Day.</a> Neuroscience. 247, 234-241 (2013).</li>
<li>Lehmkuhl, A. M., Dirr, E. R., Fleming, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+assays+for+mouse+models+of+neurodegenerative+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Olfactory assays for mouse models of neurodegenerative disease.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (90), e51804(2014).</li>
</ol>

Não há conflito de interesses.

Os testes propostos neste protocolo permitem avaliar diferentes aspectos do comportamento olfativo inata em camundongos: a percepção de odores, uma discriminação entre os odores contra água e sensibilidade aos odores. Este protocolo pode ser aplicado a qualquer odor de acordo com a preferência e escala evitar mostrado previamente 15. Uma vez que o protocolo baseia-se na actividade exploratória é importante que os ratinhos não exibem qualquer deficiência motora ou ansiedade que podem afectar o seu movimento e ...

Olfaction é uma das funções sensoriais e mais desenvolvidos importantes em mamíferos. Qualquer prejuízo na atividade olfativa pode afetar a ingestão de alimentos, comportamento social e, no pior dos casos, até mesmo a sobrevivência. Nos seres humanos, a deterioração olfactiva é dependente 1 idade e é considerado um forte indicador de distúrbios neurológicos 2-6. O teste de identificação olfatória desenvolvido pela Universidade da Pensilvânia atualmente representa um dos testes mais utilizados, não-invasivos e quantificáveis, de diagnóstico, que pode avaliar primeiros déficits neurológicos 7 e prever com elevada probabilidade, a progressão da demência 8,9. A acessibilidade do sistema olfativo ea proeminência do olfato em roedores, provocou uma intensa linha de pesquisa abordando os mecanismos subjacentes funções olfativas 10. Nós já demonstrado que a perda de função do recept sinalizaçãoou Notch1 afeta evitar olfativo 11. Neste protocolo, usamos ratos que faltam o ligando sinalização, Jagged1, em neurônios ou células gliais para estudar o desempenho olfativo. Olfaction inata é definido por três parâmetros como percepção, discriminação entre odores e sensibilidade olfativa 4. Teste olfativo em roedores pode ser feito de uma variedade de formas e alguns estudos comportamentais fazer uso de olfatômetros, que fornecem o odor para o animal a uma concentração de vapores específicos e num período de tempo preciso 12-14. No entanto, esta instrumentação é caro e pode estar disponíveis apenas em instalações especializadas. No nosso trabalho, nós fornecemos um protocolo de teste olfactivo simples, rápido e reprodutível, que é levada a cabo usando aromas voláteis. Os testes descritos percepção medida para um atrativo ou um odor repelente e avaliar a discriminação entre o cheiro eo 11,15,16 água. Usando a mesma configuração, we também se pode medir a sensibilidade a um odor a diferentes concentrações 16,17. O processamento de vídeo assistida por computador post-hoc, inspirada no trabalho da página e colegas 18, fornece resultados imparciais, sem a necessidade de cegueira experimental e permitindo para uma única pessoa para levar a cabo todo o experimento. Este protocolo destina-se a fornecer um ponto de partida para estudar o comportamento olfativo em camundongos.

<table><tbody><tr><td>Gaiola de rato</td><td>Italplast (Itália)</td><td>1144B</td><td>36 cm de comprimento x 20,5 cm de largura x 13,5 cm de altura</td></tr><tr><td>Cama de madeira lascada</td><td>Abedd (Áustria)</td><td>LTE E-001</td><td>3 cm de altura</td></tr><tr><td>Manteiga de amendoim</td><td>Migros (Suíça)</td><td>NA</td><td>1:10</td></tr><tr><td>2-metilbutírico</td><td>Sigma Aldrich (Suíça)</td><td>W269514</td><td>Urina feminina pura</td></tr><tr><td>de fêmeas férteis da mesma linhagem de camundongo</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Dilution series</td></tr><tr><td>Camera</td><td>Olympus (EUA)</td><td>Camedia C-8080</td><td>Arquivos MOV</td></tr><tr><td>Quicktime para Java (Windows)</td><td>Apple (EUA)</td><td>Plugin</td><td>de vídeo NA para visualização de arquivos MOV</td></tr><tr><td>ImageJ para Windows</td><td>NIH (EUA)</td><td>NA</td><td>Processamento/Análise de Vídeo</td></tr></tbody></table>

simples e testes olfativo para ratos assistido por computador

Simple and Computer-assisted Olfactory Testing for Mice

Olfaction é altamente conservada entre espécies e é necessária para a reprodução e sobrevivência. Nos seres humanos, olfacto é também um dos sentidos que é afectado com o envelhecimento e é um forte indicador de doenças neurodegenerativas. Assim, o teste de olfacto é utilizado como um método de diagnóstico não invasivo para detectar os défices neurológicos no início. A fim de compreender os mecanismos subjacentes susceptibilidade rede olfativo, a investigação olfativa em roedores ganhou impulso na última década. Aqui, apresentamos um tempo método muito simples, eficiente e reproduzível teste olfativo de percepção de odor inata e sensibilidade em ratos sem a necessidade de qualquer restrição de alimentos ou água antes. Os testes são realizados em um ambiente familiar para os ratos, requerem apenas os aromas e uma sessão de 2 min de exposição odorante. A análise é realizada, post-hoc, usando comandos assistidas por computador em ImageJ e pode ser, portanto,, Realizado do início ao fim por um pesquisador. Este protocolo não requer nenhum hardware ou configuração especial e é indicado para qualquer laboratório interessado em testar percepção olfativa e sensibilidade.

O teste mede a percepção atração a manteiga de amendoim e evasão de ácido 2-MB. Três grupos de ratinhos são testados e o tempo gasto no &quot;perímetro odor&quot; são quantificadas em relação à água. No teste de preferência, o grupo controlo exibe uma significativa preferência para o odor em comparação com a água (8 t = 2,52, p &lt;0,05). Por outro lado, o grupo B não apresenta qualquer atracção significativa para a manteiga de amendoim e gasta mais tempo com água (6 t = 3,22, p &lt;0,05). Deste mo...

Apresentamos um teste olfativo simples e imparcial em camundongos. Com este protocolo, a discriminação olfativa, a preferência, a evitação e a sensibilidade a um novo odor em comparação com a água podem ser avaliadas em sessões comportamentais únicas. Este método é indicado para um único experimentador e a análise é baseada no processamento de vídeo assistido por computador.

Simples e Testes Olfativo para Ratos assistido por computador

Olfaction is highly conserved among species and is required for reproduction and survival.
In humans, olfaction is also one of the senses that is affected ...

O objetivo geral do experimento a seguir é testar a discriminação olfativa inata, a preferência ou evitação olfativa e a sensibilidade olfativa em camundongos. Isso é realizado expondo o camundongo a um atrativo ou agente atrativo novo e a um odor neutro, que é a água. Enquanto isso, uma câmera de vídeo registra a sessão comportamental.Em seguida, o vídeo é analisado no Image J utilizando as macros fornecidas para obter os parâmetros de tempo gasto com o odor e com a água. Os resultados mostram o comportamento de preferência ou aversão a odores em comparação com a água entre diferentes genótipos, com base na análise pós-hoc assistida por computador. A principal vantagem do teste olfativo em relação ao uso de uma arena e olfação dedicadas é que ele utiliza uma arena familiar, sendo, portanto, de conclusão rápida e montagem simples.Além disso, utiliza hardware de baixo custo, demonstrando o procedimento que será realizado por Emmanuel Abry, aluno de graduação no meu laboratório. Para este experimento, utilize camundongos machos de três a cinco meses de idade, C57 black, seis de tipo selvagem e camundongos transgênicos. Esta demonstração utiliza duas linhagens com genes knockout e controles provenientes da mesma ninhada.Para as arenas experimentais, utilize gaiolas esterilizadas e limpas para camundongos com três centímetros de camação. Em seguida, prepare o equipamento da câmera. Posicione-a a 58 centímetros acima do piso da gaiola, em um suporte personalizado de tripé.Faça algumas marcas na bancada para indicar a posição em que a gaiola deve ficar. Para uma imagem central, configure a câmera para gravar um vídeo de 320 por 240 pixels a aproximadamente 15 quadros por segundo. Para preparar o indivíduo em teste, tenha concentrados de cada odor armazenados em solvente sempre que possível.Para o teste de preferência, prepare uma solução de 10% peso por volume de manteiga de amendoim em óleo de amendoim. Para o teste de evitação, tenha uma solução de 98% de ácido butírico metílico. Para o teste de sensibilidade, colete urina de fêmeas de um camundongo da mesma linhagem um a dois dias antes do teste.Restrinja uma fêmea com o ventre acima da grade da gaiola e colete gotas de sua urina em um recipiente de plástico. Colete amostras de várias fêmeas para normalização. Devido à variabilidade individual, reúna todas as amostras em um tubo de 1,5 mililitro e armazene a menos 20 graus Celsius.Para iniciar a habituação dos animais, coloque um deles em uma gaiola limpa e deixe-o explorar. Durante cinco minutos, o ambiente da gaiola de teste deve ser semelhante ao da gaiola de origem. Repita a fase de habituação uma vez em cada dia de teste; quando o período de habituação terminar, inicie a gravação e pipete 60 microlitros de um odor agradável.Neste caso, coloque manteiga de amendoim em uma parede e, na parede oposta, pipete a mesma quantidade de água. Com um odor neutro, aplique as gotas aproximadamente a 10 centímetros de altura em cada parede. Deixe agora o animal explorar por dois minutos, depois interrompa a gravação e devolva o camundongo à sua gaiola de origem.Repita o processo com cada camundongo a ser testado. Sempre utilizando novas gaiolas de teste. Três a cinco dias após realizar todos os testes de preferência, realize o teste de evitação usando uma nova gaiola de teste.Para cada camundongo, realize o teste de evitação. Como no teste de atração, substitua apenas o odor agradável pelo odor de evitação, que é o ácido dois metil butírico. Para o teste de sensibilidade, uma mesma gaiola pode ser reutilizada entre ensaios para o mesmo camundongo.Marque, então, o lado da água da gaiola e prepare-se para limpar as paredes curtas com papel embebido em etanol 70% entre os ensaios. No dia do experimento, prepare quatro concentrações da urina por meio de uma série de diluições dez vezes consecutivas. Utilizando água bidestilada, como no teste de aversão, habitue cada animal à sua gaiola de teste por cinco minutos.Em seguida, exponha cada camundongo à urina na diluição mais alta inicialmente, que é de um para 10.000. Durante a gravação, aplique a diluição de urina à gaiola de teste e aplique água à parede oposta. Como feito em outros testes, permita que o animal explore.Durante dois minutos. Posteriormente, transfira o animal para uma gaiola limpa para camundongos. Após todos os animais terem sido expostos à menor concentração, limpe todas as paredes da gaiola de teste e repita o teste em cada camundongo utilizando a urina com a próxima concentração mais elevada.Continue este processo até que a urina pura seja testada. Após coletar todos os dados de um experimento, abra os vídeos no ImageJ para ajustes e detalhes de processamento, cujas instruções são fornecidas no protocolo descrito no texto. Duas linhagens diferentes de knockout.Os grupos B e C foram comparados ao grupo controle feito com cama. Um teste T de Student não direcional com variância igual ou desigual compara o tempo gasto entre o odor e a água dentro dos genótipos. Compare o comportamento entre genótipos utilizando uma ANOVA unidirecional. Ambos os grupos experimentais, B e C, não mostraram preferência pelo odor atrativo. No teste de evitação, a resposta frente ao odor repulsivo do ácido dois metil butírico foi a esperada para os grupos A e B, mas o grupo C não exibiu comportamento de evitação a esse odor.No teste de sensibilidade, o limiar de atração foi obtido subtraindo-se o tempo gasto com urina do tempo gasto com água, preferindo-se a urina em relação à água numa diluição de um para 1000. Enquanto ambos os grupos experimentais, B e C, precisaram de uma concentração 100 vezes maior para demonstrar preferência. Uma vez dominada, esta técnica pode ser realizada em algumas horas, se for executada corretamente; após esse procedimento, outros métodos, como aprendizado olfativo e extinção, podem ser realizados para investigar a plasticidade olfativa e o aprendizado.

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Research

JoVE Journal

Behavior

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