Name: Simples e Testes Olfativo para Ratos assistido por computador (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-06-15T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 40 s
Description: Aprenda a realizar testes olfativos simples em camundongos com análise assistida por computador. Este método avalia discriminação, preferência e sensibilidade a odores usando ImageJ. Ideal para estudos de neurociência comportamental.

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Este trabalho é financiado pela Fundação Nacional Suíça (31_138429) e pela Fundação Synapsis para o apoio à pesquisa sobre a doença de Alzheimer.

Todos os procedimentos com animais estão em conformidade com a directiva comunitária 2010/63 / UE relativa à protecção dos animais utilizados para fins científicos e são aprovados pelo Comitê Animal Care locais (cantão de Fribourg, Suíça). 1. Preparação de animais <ol><li> Os animais experimentais <ol><li> Realizar experimentos sobre tipo selvagem macho adulto e camundongos transgênicos (C57BL / 6 background) de 3-5 meses de idade. Os três grupos de ratos correspondem a controlos de tipo selvagem da mesma ninhada (grupo A, Jagged1 Flox / Flox 19) e duas linhas de ratinhos KO condicionais (grupo B, e C Jagged1ncKO, Jagged1gcKO). </li><li> Os ratos domésticos em condições de laboratório padrão em uma sala ventilada, com um ciclo de 12 hr controlado claro / escuro e fornecer comida e água ad libitum. </li></ol></li></ol> 2. Setup Experimental <ol><li> Arena Experimental <ol><li> Para a arena experimental, use uma gaiola de rato esterilizado limpo (36 cm de comprimento x 20,5 centímetros de largura x 13,5 centímetros de altura) (Figura 1A). </li><li> Atribuir a cada rato para uma gaiola contado com camas frescas, 3 centímetros de altura. Se gaiolas são reutilizados, como no teste de sensibilidade odor, tomar as seguintes medidas para evitar a contaminação cruzada entre odores e camundongos. <ol><li> Marque lado da água. </li><li> Limpar as paredes mais estreitas das gaiolas com dois papéis de seda pulverizados com etanol a 70%, um para cada lado. </li><li> Empilhe gaiolas de acordo com o genótipo dos ratos e armazenar temporariamente sob uma capa laminar. </li></ol></li></ol></li><li> Câmera <ol><li> Montar uma câmara num tripé personalizada com o objectivo em 58 cm a partir do fundo da gaiola (Figura 1A). Fixar a posição do tripé e a gaiola e delimitar com marcas para permitir que a câmara seja centrado sobre a parte superior da gaiola. </li><li> Gravar vídeos em 320 pixels x 240 pixels, 15,08 quadros por segundo como arquivos MOV. </li></ol></li><li> Odores <ol><li> Ressuspender o scents, quando indicado, no solvente em que são solúveis. </li><li> Para o teste de preferência manteiga de amendoim uso. Ressuspender a manteiga de amendoim em óleo de amendoim (10% w / v). </li><li> Para evitar o uso de testes puro 2-metilbutírico (2-Mo) de ácido (98%). </li><li> Para o teste de sensibilidade, use urina feminina da mesma colônia mouse e fundo (C57BL / 6). <ol><li> Por conveniência recolher a urina de 1-2 dias antes do teste olfactivo. Contenha e segure o mouse sob o capô com a barriga acima da grade da gaiola. De acordo com a grelha de gaiola colocar uma placa de petri de plástico para recolher as gotas de urina. </li><li> Recolhe-se o de urina a partir de cada uma das fêmeas em um tubo de 1,5 ml e misturar todas as amostras de urina para normalizar para a variabilidade entre os animais. Armazenar a -20 ° C até à sua utilização. </li><li> No dia da experiência, descongelar a urina e executar quatro diluições em água destilada duas vezes com um factor de diluição de 10 (1:10, 1: 100, 1: 1000, 1: 10.000). </li></ol></li></ol></li></ol>3. Teste Olfativo Nota: Neste protocolo odores foram deliberadamente escolhidas que são percebidos como atractivos fortes (manteiga de amendoim e de urina feminina) ou forte repelente (ácido 2-MB) 15. É importante realizar a preferência e testes de sensibilidade aos odores agradáveis ​​antes do teste de esquiva para eliminar a possibilidade de qualquer interferência com o comportamento olfactiva. No entanto, por uma questão de simplicidade, neste artigo, a preferência ea evasão teste será ambos descritos sob o teste de percepção. Cada sessão comportamental começa com uma fase de habituação. <ol><li> Habituação Fase <ol><li> Colocar o animal na gaiola atribuído limpo e deixá-lo explorar durante 5 minutos (Figura 1B). Uma vez que o ambiente da gaiola experimental é familiar para a gaiola de origem, este curto período de tempo é suficiente para permitir a habituação. </li><li> Se o teste de sensibilidade é concluído em um dia, realizar habituação apenas uma vez antes do application maior do odor diluído. Se o teste de sensibilidade é levada a cabo em dias diferentes, em cada dia é necessária uma fase de habituação de uma nova gaiola limpa. </li></ol></li><li> Teste de Percepção <ol><li> Depois de habituação, activar a câmara imediatamente e de pipeta 60 ul de aroma agradável (manteiga de amendoim) e 60 ul do aroma neutro (água da torneira) sobre as paredes opostas da gaiola em cerca de 10 cm a partir da parte inferior (Figura 1C). </li><li> Deixe o rato explorar os odores durante 2 minutos (Figura 1D). Depois disso, desligue a câmera. </li><li> Neste ponto, prosseguir com o próximo do rato a partir da fase de habituação. Realizar o teste de esquiva exactamente da mesma maneira através da aplicação de 60 ul de odor repelente (ácido 2-MB) e 60 ul de água. </li></ol></li><li> Teste de sensibilidade <ol><li> Avaliar o limiar de captação de ratos macho a concentrações crescentes de urina feminina na seguinte ordem: 1: 10.000; 1: 1000; 1: 100; 1:10 e urina puro. </li><li> Depois de habituação, cada rato para expor a diluição mais elevada pipetados pelo experimentador como anteriormente descrito em 3.2.1. </li><li> Grave o comportamento exploratório de urina contra água, dentro de um prazo de 2 minutos em uma câmara de vídeo. Depois de todas as coortes ratos são testados para a mais alta diluição (1: 10.000), para expor uma concentração mais elevada de urina, como indicado acima. </li></ol></li></ol> 4. Post-hoc de Análise de Dados Nota: Todos os testes comportamentais descritas são processadas post hoc seguindo as instruções de análise de dados. <ol><li> Abrir arquivos MOV em ImageJ para sistemas Windows <ol><li> Instale Quick Time for Java usando as configurações personalizadas de http://www.apple.com/quicktime/download. </li><li> Instale o plugin do Quick Time do site da ImageJ (http://rsb.info.nih.gov/ij/plugins/qt-capture.html). </li><li> Importar o QTJava.zip (C: Program Files QuickTime QTSystem) nas extens bibliotecaion de ImageJ (.ImageJ jre lib ext). </li><li> Copie também o QTJava.zip na pasta plugins e renomeá-lo como QTJava.jar. </li><li> Instale as seis scripts anexados na pasta Macros (ImageJ plugins Macros). </li><li> Abrir ImageJ e compilar e executar o plugin do Quick Time, a partir daí perto ImageJ. </li><li> Reabrir ImageJ e abra o arquivo MOV usando Arquivo&gt; Importar&gt; usando Quick Time. </li></ol></li><li> Ajuste de Vídeo <ol><li> Uma vez que o ficheiro de vídeo é aberto no ImageJ, cortar o vídeo a fim de obter uma constante de 2 minutos a partir do tempo de exploração do experimentador pipetados os odorantes na gaiola (T0). Identificar o quadro correspondente ao T0 e remover os quadros anteriores usando incrementos de 1 (ImageJ Imagem Stacks ToolsSlice removedor). Use o mesmo comando para excluir todos os quadros superiores a 2 min exploração. </li><li> Certifique-se de que a gaiola é centrado e se necessário, use a Imagem&gt; Transform&gt; comando Girar para alinhá-lo. </li></ol></li><li> Video Processamento Nota: O processamento de vídeo é totalmente assistida por computador e utiliza comandos macros que acompanham este papel. <ol><li> A fim de diminuir a superfície para a gaiola de um 127 pixels x 218 pixels tamanho executar o Passo 1 macro do Plugin&gt; Macros&gt; Executar comando. Mover o rectângulo fixado sobre a gaiola (Figura 2, Passo 1). </li><li> Cortar a área da gaiola sobre a região de interesse (ROI), utilizando o Passo 2 macro (Figura 2, Passo 2). </li><li> Use a macro Passo 3 para extrair a imagem do rato do fundo, atribuindo um sinal de limiar, despeckling e filtrando a variação do sinal. Os valores de saída da parcela do eixo Z indicam os valores de cinzentos médios, correspondendo à intensidade da sombra rato mover-se dentro da ROI da &quot;câmara de água&quot; durante 2 min a exploração. Copie os resultados em uma planilha nomeada de acordo com o ROI em um arquivo de planilha (Figura 2, Passo 3). </li><li> Use a macro Passo 4 paraextrair os valores de cinza médios do rato na ROI &quot;câmara de odor&quot;. Copie os resultados em uma planilha nomeada de acordo com o ROI no mesmo arquivo de planilha como em 4.3.3 (Figura 2, Passo 4). </li><li> Para restringir ainda mais a análise do movimento do mouse no ROI &quot;perímetro água&quot; usar o Passo 5 macro. Copie o resultado na planilha nomeada de acordo com o ROI no mesmo arquivo de planilha como em 4.3.3 (Figura 2, Passo 5). </li><li> Para restringir a análise do movimento do mouse no ROI &quot;perímetro odor&quot; usar a macro Passo 6. Copie o resultado na planilha nomeada de acordo com o arquivo de ROI planilha como em 4.3.3 (Figura 2, Passo 6). </li><li> Processar todos os vídeos e verificar a consistência do número de quadros por animais. Aqui, gravar todos os animais para 1.810 quadros correspondentes a uma sessão de exploração 2 min. </li><li> Para cada animal e para cada ROI tipo quadros com va cinzento médiolues maior do que 0. Divide o número de quadros pelos valores correspondentes a 1 segundo e obter os segundos gastos em cada ROI. </li></ol></li></ol> 5. Análise Estatística <ol><li> Para cada ensaio, verificar homogeneidade da variância dentro de grupos / genótipos pelo teste de Bartlett utilizando a fórmula disponível no http://www.real-statistics.com/one-way-analysis-of-variance-anova/homogeneity-variances/. </li><li> No teste de atração e de evasão, proceder a comparações entre os tempos passados ​​com água contra odor dentro de um grupo usando um teste t de Student não-direcional assumindo variâncias iguais ou desiguais, dependendo dos resultados de teste de Bartlett. Compare os tempos passados ​​com os odores subtraídos pelo tempo gasto com água entre os genótipos por ANOVA one-way com teste post-hoc de Bonferroni. </li><li> No teste de sensibilidade analisar as comparações entre o tempo gasto com o odor subtraído do tempo gasto com water entre os grupos em diluições específicas de urina por ANOVA one-way com teste post-hoc de Bonferroni. Comparar a sensibilidade entre grupos às crescentes concentrações de odor por 2-Way ANOVA com repetições com teste post-hoc de Bonferroni. </li><li> Interação entre genótipos e tratamentos no teste de atração e evasão são investigados por 2-way ANOVA com o teste post-hoc de Bonferroni. </li></ol>

<ol><li>Doty, R. L., Kamath, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+influences+of+age+on+olfaction%3A+a+review%5BTitle%5D)+AND+%22Cognitive+Science%22%5BJournal%5D)">The influences of age on olfaction: a review.</a> Cognitive Science. 5, 20(2014).</li>
<li>Mesholam, R. I., Moberg, P. J., Mahr, R. N., Doty, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfaction+in+neurodegenerative+disease%3A+a+meta-analysis+of+olfactory+functioning+in+Alzheimer%E2%80%99s+and+Parkinson%E2%80%99s+diseases%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Neurology%22%5BJournal%5D)">Olfaction in neurodegenerative disease: a meta-analysis of olfactory functioning in Alzheimer’s and Parkinson’s diseases.</a> Archives of Neurology. 55 (1), 84-90 (1998).</li>
<li>Moberg, P. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+Dysfunction+in+Schizophrenia%3A+A+Qualitative+and+Quantitative+Review%5BTitle%5D)+AND+%22Neuropsychopharmacology%22%5BJournal%5D)">Olfactory Dysfunction in Schizophrenia: A Qualitative and Quantitative Review.</a> Neuropsychopharmacology. 21 (3), 325-340 (1999).</li>
<li>Kovács, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+olfactory+dysfunction+in+aging+and+neurodegenerative+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Ageing+Research+Reviews%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of olfactory dysfunction in aging and neurodegenerative disorders.</a> Ageing Research Reviews. 3 (2), 215-232 (2004).</li>
<li>Barrios, F. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfaction+and+neurodegeneration+in+HD%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Olfaction and neurodegeneration in HD.</a> Neuroreport. 18 (1), 73-76 (2007).</li>
<li>Doty, R. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfaction+in+Parkinson%E2%80%99s+disease+and+related+disorders%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiology+of+Disease%22%5BJournal%5D)">Olfaction in Parkinson’s disease and related disorders.</a> Neurobiology of Disease. 46 (3), 527-552 (2012).</li>
<li>Doty, R. L., Shaman, P., Dann, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+University+of+Pennsylvania+Smell+Identification+Test%3A+a+standardized+microencapsulated+test+of+olfactory+function%5BTitle%5D)+AND+%22Physiology+%26+Behavior%22%5BJournal%5D)">Development of the University of Pennsylvania Smell Identification Test: a standardized microencapsulated test of olfactory function.</a> Physiology & Behavior. 32 (3), 489-502 (1984).</li>
<li>Devanand, D. p, et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+Deficits+in+Patients+With+Mild+Cognitive+Impairment+Predict+Alzheimer%E2%80%99s+Disease+at+Follow-Up%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Olfactory Deficits in Patients With Mild Cognitive Impairment Predict Alzheimer’s Disease at Follow-Up.</a> American Journal of Psychiatry. 157 (9), 1399-1405 (2000).</li>
<li>Conti, M. Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Odor+Identification+Deficit+Predicts+Clinical+Conversion+from+Mild+Cognitive+Impairment+to+Dementia+Due+to+Alzheimer%E2%80%99s+Disease%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Clinical+Neuropsychology%22%5BJournal%5D)">Odor Identification Deficit Predicts Clinical Conversion from Mild Cognitive Impairment to Dementia Due to Alzheimer’s Disease.</a> Archives of Clinical Neuropsychology. 28 (5), 391-399 (2013).</li>
<li>Keller, A., Vosshall, L. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Better+Smelling+Through+Genetics%3A+Mammalian+Odor+Perception%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+neurobiology%22%5BJournal%5D)">Better Smelling Through Genetics: Mammalian Odor Perception.</a> Current opinion in neurobiology. 18 (4), 364-369 (2008).</li>
<li>Brai, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Notch1+activity+in+the+olfactory+bulb+is+odour-dependent+and+contributes+to+olfactory+behaviour%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Notch1 activity in the olfactory bulb is odour-dependent and contributes to olfactory behaviour.</a> European Journal of Neuroscience. 40 (10), 3436-3449 (2014).</li>
<li>Larson, J., Hoffman, J. S., Guidotti, A., Costa, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+discrimination+learning+deficit+in+heterozygous+reeler+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Research%22%5BJournal%5D)">Olfactory discrimination learning deficit in heterozygous reeler mice.</a> Brain Research. 971 (1), 40-46 (2003).</li>
<li>Alonso, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+Discrimination+Learning+Increases+the+Survival+of+Adult-Born+Neurons+in+the+Olfactory+Bulb%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Olfactory Discrimination Learning Increases the Survival of Adult-Born Neurons in the Olfactory Bulb.</a> The Journal of Neuroscience. 26 (41), 10508-10513 (2006).</li>
<li>Wesson, D. W., Keller, M., Douhard, Q., Baum, M. J., Bakker, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhanced+urinary+odor+discrimination+in+female+aromatase+knockout+%28ArKO%29+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Hormones+and+behavior%22%5BJournal%5D)">Enhanced urinary odor discrimination in female aromatase knockout (ArKO) mice.</a> Hormones and behavior. 49 (5), 580-586 (2006).</li>
<li>Kobayakawa, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Innate+versus+learned+odour+processing+in+the+mouse+olfactory+bulb%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Innate versus learned odour processing in the mouse olfactory bulb.</a> Nature. 450 (7169), 503-508 (2007).</li>
<li>Witt, R. M., Galligan, M. R., Despinoy, J., Segal, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+Behavioral+Testing+in+the+Adult+Mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments+JoVE%22%5BJournal%5D)">Olfactory Behavioral Testing in the Adult Mouse.</a> Journal of Visualized Experiments JoVE. (23), (2009).</li>
<li>Lee, A. W., Emsley, J. G., Brown, R. E., Hagg, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Marked+differences+in+olfactory+sensitivity+and+apparent+speed+of+forebrain+neuroblast+migration+in+three+inbred+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Marked differences in olfactory sensitivity and apparent speed of forebrain neuroblast migration in three inbred strains of mice.</a> Neuroscience. 118 (1), 263-270 (2003).</li>
<li>Page, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Computerized+assessment+of+social+approach+behavior+in+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Behavioral+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Computerized assessment of social approach behavior in mouse.</a> Frontiers in Behavioral Neuroscience. 3, 48(2009).</li>
<li>Nyfeler, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Jagged1+signals+in+the+postnatal+subventricular+zone+are+required+for+neural+stem+cell+self-renewal%5BTitle%5D)+AND+%22Embo+J%22%5BJournal%5D)">Jagged1 signals in the postnatal subventricular zone are required for neural stem cell self-renewal.</a> Embo J. 24 (19), Available from:
	
 <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=16163386"">http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?cmd=Retrieve&db=PubMed&dopt=Citation&list_uids=16163386"</a> 3504-3515 (2005).</li>
<li>Tong, M. T., Peace, S. T., Cleland, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Properties+and+mechanisms+of+olfactory+learning+and+memory%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Behavioral+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Properties and mechanisms of olfactory learning and memory.</a> Frontiers in Behavioral Neuroscience. 8, (2014).</li>
<li>Steinlechner, S. Chapter 2.12 - Biological Rhythms of the Mouse. The Laboratory Mouse (Second Edition). , Available from:
 
 <a target="_blank" href="http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780123820082000179">http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/B9780123820082000179</a> 383-407 (2012).</li>
<li>Corthell, J., Stathopoulos, A., Watson, C., Bertram, R., Trombley, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+Bulb+Monoamine+Concentrations+Vary+with+Time+of+Day%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Olfactory Bulb Monoamine Concentrations Vary with Time of Day.</a> Neuroscience. 247, 234-241 (2013).</li>
<li>Lehmkuhl, A. M., Dirr, E. R., Fleming, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Olfactory+assays+for+mouse+models+of+neurodegenerative+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Olfactory assays for mouse models of neurodegenerative disease.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (90), e51804(2014).</li>
</ol>

Não há conflito de interesses.

Os testes propostos neste protocolo permitem avaliar diferentes aspectos do comportamento olfativo inata em camundongos: a percepção de odores, uma discriminação entre os odores contra água e sensibilidade aos odores. Este protocolo pode ser aplicado a qualquer odor de acordo com a preferência e escala evitar mostrado previamente 15. Uma vez que o protocolo baseia-se na actividade exploratória é importante que os ratinhos não exibem qualquer deficiência motora ou ansiedade que podem afectar o seu movimento e ...

Olfaction é uma das funções sensoriais e mais desenvolvidos importantes em mamíferos. Qualquer prejuízo na atividade olfativa pode afetar a ingestão de alimentos, comportamento social e, no pior dos casos, até mesmo a sobrevivência. Nos seres humanos, a deterioração olfactiva é dependente 1 idade e é considerado um forte indicador de distúrbios neurológicos 2-6. O teste de identificação olfatória desenvolvido pela Universidade da Pensilvânia atualmente representa um dos testes mais utilizados, não-invasivos e quantificáveis, de diagnóstico, que pode avaliar primeiros déficits neurológicos 7 e prever com elevada probabilidade, a progressão da demência 8,9. A acessibilidade do sistema olfativo ea proeminência do olfato em roedores, provocou uma intensa linha de pesquisa abordando os mecanismos subjacentes funções olfativas 10. Nós já demonstrado que a perda de função do recept sinalizaçãoou Notch1 afeta evitar olfativo 11. Neste protocolo, usamos ratos que faltam o ligando sinalização, Jagged1, em neurônios ou células gliais para estudar o desempenho olfativo. Olfaction inata é definido por três parâmetros como percepção, discriminação entre odores e sensibilidade olfativa 4. Teste olfativo em roedores pode ser feito de uma variedade de formas e alguns estudos comportamentais fazer uso de olfatômetros, que fornecem o odor para o animal a uma concentração de vapores específicos e num período de tempo preciso 12-14. No entanto, esta instrumentação é caro e pode estar disponíveis apenas em instalações especializadas. No nosso trabalho, nós fornecemos um protocolo de teste olfactivo simples, rápido e reprodutível, que é levada a cabo usando aromas voláteis. Os testes descritos percepção medida para um atrativo ou um odor repelente e avaliar a discriminação entre o cheiro eo 11,15,16 água. Usando a mesma configuração, we também se pode medir a sensibilidade a um odor a diferentes concentrações 16,17. O processamento de vídeo assistida por computador post-hoc, inspirada no trabalho da página e colegas 18, fornece resultados imparciais, sem a necessidade de cegueira experimental e permitindo para uma única pessoa para levar a cabo todo o experimento. Este protocolo destina-se a fornecer um ponto de partida para estudar o comportamento olfativo em camundongos.

<table><tbody><tr><td>Gaiola de rato</td><td>Italplast (Itália)</td><td>1144B</td><td>36 cm de comprimento x 20,5 cm de largura x 13,5 cm de altura</td></tr><tr><td>Cama de madeira lascada</td><td>Abedd (Áustria)</td><td>LTE E-001</td><td>3 cm de altura</td></tr><tr><td>Manteiga de amendoim</td><td>Migros (Suíça)</td><td>NA</td><td>1:10</td></tr><tr><td>2-metilbutírico</td><td>Sigma Aldrich (Suíça)</td><td>W269514</td><td>Urina feminina pura</td></tr><tr><td>de fêmeas férteis da mesma linhagem de camundongo</td><td>NA</td><td>NA</td><td>Dilution series</td></tr><tr><td>Camera</td><td>Olympus (EUA)</td><td>Camedia C-8080</td><td>Arquivos MOV</td></tr><tr><td>Quicktime para Java (Windows)</td><td>Apple (EUA)</td><td>Plugin</td><td>de vídeo NA para visualização de arquivos MOV</td></tr><tr><td>ImageJ para Windows</td><td>NIH (EUA)</td><td>NA</td><td>Processamento/Análise de Vídeo</td></tr></tbody></table>

simples e testes olfativo para ratos assistido por computador

Simple and Computer-assisted Olfactory Testing for Mice

Olfaction é altamente conservada entre espécies e é necessária para a reprodução e sobrevivência. Nos seres humanos, olfacto é também um dos sentidos que é afectado com o envelhecimento e é um forte indicador de doenças neurodegenerativas. Assim, o teste de olfacto é utilizado como um método de diagnóstico não invasivo para detectar os défices neurológicos no início. A fim de compreender os mecanismos subjacentes susceptibilidade rede olfativo, a investigação olfativa em roedores ganhou impulso na última década. Aqui, apresentamos um tempo método muito simples, eficiente e reproduzível teste olfativo de percepção de odor inata e sensibilidade em ratos sem a necessidade de qualquer restrição de alimentos ou água antes. Os testes são realizados em um ambiente familiar para os ratos, requerem apenas os aromas e uma sessão de 2 min de exposição odorante. A análise é realizada, post-hoc, usando comandos assistidas por computador em ImageJ e pode ser, portanto,, Realizado do início ao fim por um pesquisador. Este protocolo não requer nenhum hardware ou configuração especial e é indicado para qualquer laboratório interessado em testar percepção olfativa e sensibilidade.

O teste mede a percepção atração a manteiga de amendoim e evasão de ácido 2-MB. Três grupos de ratinhos são testados e o tempo gasto no &quot;perímetro odor&quot; são quantificadas em relação à água. No teste de preferência, o grupo controlo exibe uma significativa preferência para o odor em comparação com a água (8 t = 2,52, p &lt;0,05). Por outro lado, o grupo B não apresenta qualquer atracção significativa para a manteiga de amendoim e gasta mais tempo com água (6 t = 3,22, p &lt;0,05). Deste mo...

Apresentamos um teste olfativo simples e imparcial em camundongos. Com este protocolo, a discriminação olfativa, a preferência, a evitação e a sensibilidade a um novo odor em comparação com a água podem ser avaliadas em sessões comportamentais únicas. Este método é indicado para um único experimentador e a análise é baseada no processamento de vídeo assistido por computador.

Simples e Testes Olfativo para Ratos assistido por computador

Olfaction is highly conserved among species and is required for reproduction and survival.
In humans, olfaction is also one of the senses that is affected ...

O objetivo geral do experimento a seguir é testar a discriminação olfativa inata, a preferência ou evitação olfativa e a sensibilidade olfativa em camundongos. Isso é realizado expondo o camundongo a um atrativo ou agente atrativo novo e a um odor neutro, que é a água. Enquanto isso, uma câmera de vídeo registra a sessão comportamental.Em seguida, o vídeo é analisado no Image J utilizando as macros fornecidas para obter os parâmetros de tempo gasto com o odor e com a água. Os resultados mostram o comportamento de preferência ou aversão a odores em comparação com a água entre diferentes genótipos, com base na análise pós-hoc assistida por computador. A principal vantagem do teste olfativo em relação ao uso de uma arena e olfação dedicadas é que ele utiliza uma arena familiar, sendo, portanto, de conclusão rápida e montagem simples.Além disso, utiliza hardware de baixo custo, demonstrando o procedimento que será realizado por Emmanuel Abry, aluno de graduação no meu laboratório. Para este experimento, utilize camundongos machos de três a cinco meses de idade, C57 black, seis de tipo selvagem e camundongos transgênicos. Esta demonstração utiliza duas linhagens com genes knockout e con

simple-and-computer-assisted-olfactory-testing-for-mice

Research

JoVE Journal

Behavior

Comportamento

Fundamentais, ainda propriedades únicas do sistema olfativo dos roedores, levaram ao seu estudo crescente entre os biólogos. A avaliação relativamente simples de sua função é, então, também é necessário. Aqui nós descrevemos testes sensíveis para a caracterização da sensibilidade olfativa do mouse e preferência.

Teste Comportamental olfativo no rato adulto

O comprometimento da função olfativa é uma característica comum em muitos distúrbios neurodegenerativos, incluindo as doenças de Parkinson, Alzheimer e Huntington. No presente artigo, descrevemos um conjunto de testes para avaliar a discriminação e detecção de olfato em camundongos que podem ser usados para medir as habilidades olfativas em modelos de camundongos de doenças neurodegenerativas.

Ensaios olfativas para o Rato modelos de doenças neurodegenerativas

Este manuscrito descreve um protocolo para examinar o sistema olfativo de roedores. O teste de habituação/deshabituação olfativa permitirá que os investigadores determinem se um camundongo se habitua a um odor apresentado repetidamente e se o camundongo demonstra deshabituação quando apresentado a um novo odor.

Testes para Odor Discriminação e habituação em ratos

Anormalidades cognitivas que mudam de atenção são uma característica central de muitas doenças psiquiátricas. Aqui, apresentamos o desenvolvimento de um novo sistema automático para o estudo efetivo das habilidades de mudança de atenção, funções executivas e outras habilidades cognitivas em camundongos com alta validade translacional para estudos humanos.

Um operante intra / extra-dimensional Set-shift-Tarefa para ratos

Aqui, treinamos os ratos em uma tarefa de aprendizagem associativa para testar a discriminação do odor. Este protocolo permite também para estudos sobre aprendizagem-induzido mudanças estruturais no cérebro.

Uma objetiva e reproduzível teste de aprendizagem olfactiva e discriminação em ratos

Este artigo fornece uma descrição detalhada de um novo protocolo de viés de julgamento do mouse. Evidências da sensibilidade dessa tarefa olfativa de escavação ao estado afetivo também são demonstradas e sua utilidade em diversos campos de pesquisa é discutida.

Avaliação do viés de julgamento do rato através de uma tarefa de escavação olfativa

Este artigo fornece uma descrição detalhada do teste de alimentos enterrados e do experimento de discriminação de odor social para avaliar os efeitos da exposição a poluentes ambientais inalados na função olfativa em camundongos.

Estudando os efeitos de poluentes ambientais inalados na função olfativa em camundongos

Este protocolo descreve a construção de um olfatômetro para experimentos de comportamento olfativo go/no-go. Instruções passo a passo, juntamente com imagens, são fornecidas para garantir a construção bem-sucedida do olfatômetro. Informações para solucionar problemas encontrados durante o processo também estão incluídas.

Construindo um olfatômetro para estudos de comportamento olfativo de roedores

Aqui, apresentamos um protocolo de teste de preferência olfativa que permite a avaliação de vieses olfativos negativos em relação a estímulos de odor apetitivos e aversivos em modelos de depressão em camundongos.

Um teste de preferência olfativa para medir vieses hedônicos olfativos em modelos de depressão em camundongos

Este artigo apresenta um protocolo para um teste de condicionamento do medo contextual e cued usando um sistema de vídeo de análise para avaliar o medo de aprendizagem e memória em camundongos.

Contextual e Cued Medo Condicionado Teste Usando um sistema de análise de vídeo em Ratos

Aprenda a realizar testes olfativos simples em camundongos com análise assistida por computador. Este método avalia discriminação, preferência e sensibilidade a odores usando ImageJ. Ideal para estudos de neurociência comportamental.

Simples e Testes Olfativo para Ratos assistido por computador

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