Name: Long-Term Cateterismo do tronco linfa intestinal e Recolha de linfa no Neonatais Pigs (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-03-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 25 s
Description: Aprenda a técnica cirúrgica de cateterismo do tronco linfático intestinal em leitões neonatos usando abordagem ventral mediana. Este método permite coletar linfa para estudar metabolismo lipídico e função imunológica.

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O trabalho foi apoiado em parte pelo financiamento da Agência de Pecuária e Carne de Alberta e pela concessão de Descoberta do Conselho de Ciências Naturais e Pesquisa para S. D. Proctor.

Todos os procedimentos em animais experimentais descritas, tanto no vídeo e manuscrito foram aprovados pelo Comitê Cuidado e Uso Institucional Animal e seguiu as orientações estabelecidas pelo Conselho Canadense de Animal Care. 1. anestesia cirúrgica e preparo cirúrgico do Pigs Neonatais <ol><li> Em uma antecâmara separada, premedicate 25 kg porcos perto da base do pescoço, com um cocktail de drogas sedativo-anestésico intramuscular contendo: azaperona (0,3 mg / kg), cloridrato de cetamina (10 mg / kg), a dexmedetomidina (15 ug / kg). Nota: Adicionar buprenorfina (0,005-0,02 mg / kg) no coquetel de drogas pré-anestésica para maior controle da dor intra-operatória. </li><li> Anestesiar os porcos com gás para inalação de isoflurano inalado (4-5% de isoflurano em 500 ml-1000 ml / min O 2) usando uma máscara facial. Visualizar as cordas vocais usando um espaço da laringe veterinário (lâmina reta 17-25 cm de comprimento), e aplicar tópica 10% spay lidocaína ao vocalcabos. Permitir que o spray de lidocaína a contactar as cordas vocais 30-60 seg antes da intubação para reduzir a possibilidade de espasmo das cordas vocais e obstrução das vias aéreas. </li><li> Entubar os porcos por meio de um tubo endotraqueal (5,0-7,0 mm de diâmetro interno (ID)) entre as cordas vocais e manter a anestesia com isoflurano gás (0,5-2,0% de isoflurano em 1.000-2.000 ml / min de O2) usando um fechada circuito de reinalação sistema anestésico durante toda a cirurgia. Avaliar o nível de anestesia pelo tom mandíbula, e ambas as respostas reflexas dos pedais e da pálpebra. gás anestésico expirado é eliminado e ventilado fora do centro cirúrgico. </li><li> Limpar a superfície exterior da orelha com uma solução de limpeza cirúrgica 2,0% de clorexidina seguido por uma lavagem com álcool isopropílico a 70%. Com um cateter intravenoso 20 L, catheterize uma veia da orelha para fornecer fluidos intravenosos (solução de lactato de Ringer; 5-10 ml / kg / hr) durante a cirurgia. Garantir um oxímetro de pulso à superfície da mucosa da língua, com medfita iCal para monitorar a frequência cardíaca ea saturação de oxigenação do sangue periférico (SpO2). </li><li> Coloque o porco anestesiado em uma posição reclinada dorsal e raspar o abdômen ventral a partir de meados do tórax caudalmente ao aspecto ventral do púbis. Limpar esta área com os dois alternando 2,0% clorexidina cirúrgico esfrega e lavagens de água estéril. </li><li> Transferir o porco anestesiados ao centro cirúrgico e aplicar a paramentação final de 70% lavagem de álcool isopropílico, deixe-a secar, e depois armar o animal. </li><li> Insira uma sonda de temperatura rectal cerca de 2-4 cm no recto para monitorizar a temperatura do corpo. Coloque os suínos de uma almofada de aquecimento de recirculação de água para manter a temperatura corporal normal (38-40 ° C) durante o procedimento cirúrgico. </li><li> Armar o porco com quatro toalhas cortinas colocadas em um padrão quadrante sobreposta em torno do abdômen. Coloque a primeira cortina em todo processo xifóide do esterno, a segunda cortina junto aspecto lateral do abdômen cerca de 5 cm lateral à linha média abdominal. Coloque a terceira cortina entre a crista do íleo da pelve e a quarta cortina, como a segunda cortina (embora no lado oposto), é colocada ao longo da face lateral do abdómen cerca de 5 cm lateralmente à linha média abdominal. </li><li> Coloque uma grande cortina de mesa, com uma fenda de abertura permitindo o acesso ao local da cirurgia, sobre as cortinas toalha subjacentes e cubra o porco e toda mesa cirúrgica. A cortina final é um Steri-cortina descartável colocado sobre a grande cortina mesa. </li></ol> 2. Cirurgia Abdominal e cateterismo do Tronco linfático intestinal <ol><li> Faça uma incisão na pele 20 cm, com uma lâmina de bisturi para expor os músculos abdominais subjacentes. Inciso as camadas musculares abdominais com electrocauterização mono-polar (20 configuração Watts) para expor o peritoneu parietal. Abra um segmento linear 20 cm de peritônio parietal com uma tesoura Metzenbaum para acessar as vísceras abdominais e vasos linfáticos. </li><li&gt; Coloque um retractor na face craniana da incisão cirúrgica para manter a cavidade abdominal aberta para a duração da cirurgia. </li><li> Humedecer todos os tecidos com água morna (37 ° C) de soro fisiológico estéril por todo o procedimento cirúrgico. Levante cuidadosamente um grande segmento do intestino incluindo o de cólon, ceco, íleo e jejuno da cavidade abdominal e exteriorizar-lo para o flanco esquerdo do porco para acessar a parte superior do abdome, fígado e vasos linfáticos. Fixe o intestino exteriorizado na posição com cortinas toalhas adicionais para formar um estilingue para apoiar delicadamente o intestino. </li><li> Localize o vaso linfático, estabelece aproximadamente 4 cm crânio-medial da veia renal direita, 6 cm ventral caudal-medial- dos capatazes cava e sob o aspecto visceral do lobo direito do fígado perto do pâncreas 22,36,37. Identificar o vaso linfático como uma estrutura transparente justaposto ao segmento ventral direito da veia porta 36,37. </li><li> Separe o Vess linfáticael dos fascia em torno suavemente provocando afastado o tecido anexado com aplicadores Q-tip. Uma vez que os aspectos laterais do recipiente são separados a partir do tecido circundante, criar uma abertura &quot;túnel&quot; debaixo do navio com excelentes sem corte com ponta fórceps. </li><li> Passe três 2-0 suturas de seda por baixo do vaso linfático com uma pinça fina. Ligadura da sutura mais caudal primeira para ocluir, dilatar e encher o recipiente com linfa. Propositadamente deixar as extremidades deste fio de sutura relativamente longo (4 cm), para fixar o cateter para o vaso linfático. Colocar duas outras suturas separadas de 1,0 cm um do outro e são de aproximadamente 1,0-1,5 cm cranianos à sutura caudal garantido. Deixar estas duas suturas com um &quot;laço solto ligadura único&quot; para permitir a fixação mais rápido do cateter para dentro do vaso. Nota: O segmento do vaso linfático localizado entre o fio de sutura ligaï¿½o da sutura e mais caudal do meio (de as duas suturas cranianas) é o local para a cateterização. Em relação sumaterial de ture, poliglactina 2-0 sutura pode substituir o fio de seda 2-0, se necessário. </li><li> Corte um pequeno buraco dentro do vaso com íris tesouras e dilatar o vaso com uma pinça sem corte finas. Inserção de aproximadamente 1,0-1,5 cm de tubo de cateter especializado (4,06 Diâmetro exterior (OD) X 2,31 milímetros ID) com uma extremidade chanfrada para dentro do vaso e amarrar as duas suturas cranianas para fixar o cateter no lugar. Use as extremidades longas de sutura da sutura de caudal para fixar o cateter para o recipiente. </li><li> Lave o intestino exteriorizado com grandes quantidades de solução salina quente e devolvê-lo suavemente para a cavidade abdominal garantindo posicionamento anatômico correto do intestino. </li><li> Exteriorizar o cateter no flanco meados esquerda (5-10 cm ventral da fossa paralombar). Adicione uma incisão na pele com um bisturi e passar um trocarte a partir da cavidade abdominal para a superfície da pele para criar uma abertura para a exteriorização do cateter. Use um grande fórceps de Kelly para exteriorizar o cateter da cav abdominaldade através da abertura trocar. </li><li> Fechar o peritônio parietal com um padrão de sutura simples contínua de poliglactina 2-0 sutura com uma agulha rodada (cônico). Feche as camadas musculares abdominais com um padrão de sutura simples interrompido com uma sutura de poliglactina 2-0 em uma agulha rodada. </li><li> Feche a pele em um padrão subcuticular com poliglactina 2-0 sutura em uma agulha de corte. Fixe o cateter exteriorizada na pele com um padrão de sutura em bolsa e uma sutura 2-0 nylon em uma agulha de corte. </li><li> Coloque um revestimento especializado no porco enquanto ainda anestesiados para facilitar sua colocação e reduzir o estresse do porco durante a recuperação. </li></ol> Recuperação 3. pós-cirúrgica e Cobrança A linfa <ol><li> Cerca de 10 minutos antes da interrupção da anestesia inalatória, administrar bupenorphine (0,1 mg / kg) por via intramuscular para fornecer imediato analgesia pós-cirurgia. Continuar bupenorphine (0,1 mg / kg) a cada 12 h durante 24-48 h, para manteranalgesia pós-cirurgia. </li><li> Monitorar os porcos para complicações pós-cirúrgicas a cada 8-12 horas, por um período de 7 dias. </li><li> Recolha a linfa em 500 ml de frascos de lavagem de polipropileno, revestido com ácido etilenodiamina tetraacético (EDTA), e suplementado com antibióticos; penicilina (6000 UI), estreptomicina (6 mg) e anfotericina B (3 mg) a cada 12 h durante um período de 7 dias. </li></ol> 4. Quantificação de Lipoproteína apoB48, triglicerídeos, colesterol e proteína total arrecadado de linfa <ol><li> Centrifugar a amostra de linfa a 1.800 xg durante 5 min a 4 ° C. Recolhe-se o sobrenadante e usá-lo para a quantificação de triglicéridos, colesterol e proteína total. </li><li> Divide-se o sobrenadante em três amostras: uma amostra não diluída, uma amostra diluída 1:20 água destilada e uma amostra final foi diluído 1: 100 com água destilada. </li><li> Utilizar o sobrenadante não diluído para medir os níveis de colesterol, com um kit disponível comercialmente. </li><li> Use a 1:20 e 1:100 amostras diluídas para medir triglicérido e os níveis totais de proteína com um kit comercialmente disponível e o ensaio de proteína total de ácido bicinconínico respectivamente. </li></ol> 5. Quantificação de Lipoproteína apoB48, coletados a partir de linfa 38 <ol><li> Determinar a concentração de lipoproteína de apoB48 com um método imunológico Ocidental adaptado Blotting 38. linfa total de separada, com 3-8% de dodecil sulfato de sódio a electroforese em gel de poliacrilamida Tris-etilo-(SDS-PAGE). </li><li> Transferir as proteínas separadas para uma membrana de fluoreto de polivinilideno (0,45 um) e incube-as com um anticorpo policlonal de cabra para a ApoB (1: 4000), então ligá-lo com um anticorpo secundário anti-cabra. </li><li> Quantificar a lipoproteína apoB48 com quimiluminescência usando uma comparação densitométrica linear com padrão de proteína apoB48 purificado roedor. </li></ol>

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</ol>

Os autores não têm nada a divulgar.

Coleta de linfa intestinal é um excelente método para investigar mecanismos envolvidos na lipídico 8-12 e 13-15 de drogas metabolismo, a metástase do câncer 16,17, o tráfico de celular e função imunológica 18-26, em vários modelos animais experimentais. Com efeito, a capacidade de colher grandes quantidades de um ou outro periférico (aferente) e central (eferente e grandes vasos do tronco) linfa durante um período prolongado tem sido particularmente importante para compreender...

O sistema linfático é uma área pouco estudada da fisiologia. Modelos pré-clínicos de cateterismo linfático ocorrer em diferentes espécies animais e 1-8 são utilizados pelas indústrias farmacêuticas e instituições de investigação para investigar mecanismos envolvidos em lípidos 8-12 e 13-15 metabolismo da droga, metástase de câncer 16 com tratamento experimental 17, 18 e a função imunológica -26. Este estudo explora o uso de cateterismo intestinal tronco linfático em um modelo de porco doméstico para medir componentes do metabolismo de lipoproteínas. metabolismo das lipoproteínas está envolvido na produção e secreção de quilomicrons, bem como as alterações nos lípidos associados e proteína total. Essas considerações são importantes, pois há grandes diferenças no metabolismo lipídico entre modelos de roedores comumente usados ​​e os seres humanos e, como tal, empregando modelos de suínos para coletar linfa intestinal poderia fornecer informação mais comparável para o estudo de lipídios memetabolização em pessoas 27-31. Várias técnicas cirúrgicas são usados ​​para coletar a linfa intestinal em espécies de animais de grande porte: uma abordagem ombro cranial (ou seja, o cateterismo ducto torácico) 5, uma abordagem lateral superior flanco 32-34, e uma linha média ventral ou abordagem paramediana 22,35. Este vídeo descreve em detalhes o procedimento cirúrgico em suínos utilizando uma abordagem cirúrgica ventral para o cateterismo do tronco linfático intestinal. Cuidadosas autorizações técnicas cirúrgicas este método de cateterismo linfática para recolher grandes quantidades de linfa e dos seus componentes ao longo de períodos de tempo prolongados. Esta técnica abre uma miríade de aplicações para muitas disciplinas que examinam várias funções fisiológicas. Aplicações podem incluir, mas não estão limitados a, todo lipoproteína corpo e o metabolismo lipídico, imunovigilância, génese de tumores e metástases, função intestinal, e a development e progressão da doença inflamatória intestinal.

<table><tbody><tr><td>Lâmina de laringoscópio Miller</td><td>Welch Allyn</td><td>68044</td><td>182 mm de comprimento</td></tr><tr><td>Consultor Surgivet: Monitor de sinais vitais</td><td>Surgivet</td><td>V9203</td><td></td></tr><tr><td>Sonda de temperatura retal</td><td>Surgivet</td><td>V3417</td><td></td></tr><tr><td>Gerador de eletrocirurgia monopolar</td><td>Valley Lab</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Tesoura Metzenbaum</td><td>Fine Science</td><td>14518-18</td><td></td></tr><tr><td>Retrator Tuffier</td><td>Stevens</td><td>162-11-676</td><td></td></tr><tr><td>Pinça Mosquito</td><td>Stevens</td><td>162-7-10</td><td></td></tr><tr><td>Kelly pinça curvada (14cm)</td><td>Stevens</td><td>162-7-38</td><td></td></tr><tr><td>Pinça de tecido Allis</td><td>Stevens</td><td>162-7-38</td><td></td></tr><tr><td>Pinça curativo-olho (10,2cm)</td><td>Stevens</td><td>162-18-780</td><td></td></tr><tr><td>Fórceps curativo-Adison (12,1cm)</td><td>Stevens</td><td>162-17-2510</td><td></td></tr><tr><td>Chaves de Agulha</td><td>Stevens</td><td>162-V98-42</td><td></td></tr><tr><td>Tesoura de íris</td><td>Fine science</td><td>14058-11</td><td></td></tr><tr><td>Bomba de circulação de água</td><td>Jorvet</td><td>J-783X</td><td></td></tr><tr><td>Maxitherm-Vinyl blanket</td><td>Jorvet</td><td>J-784C</td><td></td></tr><tr><td>Q tip aplicadores</td><td>Fisher Scientific</td><td>22-037-960</td><td></td></tr><tr><td>Cateterismo&nbsp; tubulação (4,06 OD X 2,31 ID)</td><td>Braintree Scientific Inc.</td><td>MRE-160</td><td>Tubo de implantação de micro-renatano</td></tr><tr><td>2-0 sutura de seda</td><td>Ethicon</td><td>LA556</td><td></td></tr><tr><td>2-0 sutura de poliglactina</td><td>Ethicon</td><td>J443H</td><td>2-0 vicryl</td></tr><tr><td>Jaqueta de animal grande</td><td>Lomir Biomedical Inc.</td><td>SSJ2YC</td><td></td></tr><tr><td>Frascos de lavagem de polipropileno</td><td>Fisher Scientific</td><td>03-409-22C</td><td>500 ml</td></tr><tr><td>Penicilina-estreptomicina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>D4333</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma Aldrich</td><td>60-00-4</td><td></td></tr><tr><td>Anfotericina B</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A2411</td><td></td></tr><tr><td>Azaperone</td><td>Elanco Saúde</td><td></td> Animal <td>Stresnil</td></tr><tr><td>Cloridrato de Dexmedetomidina</td><td>Zoetis</td><td>6295</td><td>Dexdomitor</td></tr><tr><td>Isoflurano</td><td>Abbott Animal&nbsp; Saúde</td><td>05260-5</td> Cloridrato de <td>cetamina IsoFlo</td></tr><tr><td></td><td>Zoetis</td><td>2626</td><td>Cloridrato</td></tr> de <tr><td>bupenorfina</td> Ketaset <td>Champion Alstoe Saúde</td><td></td> Animal <td>DIN:02347510</td></tr><tr><td>6 mm Tubo endotraqueal</td><td>Jorvet</td><td>J-165d</td><td></td></tr><tr><td>10% Spray de lidocaína</td><td>AstraZeneca</td><td></td><td>DIN:02003767</td></tr><tr><td>4% Clorexidina esfoliação cirúrgica</td><td>Partnar Animal Health</td><td>PCH-011</td><td>Diluído: solução a 2,0%</td></tr> Campo <tr><td>cirúrgico 3M 3M</td><td>Health Care</td><td>1040</td><td></td></tr><tr><td>SDS page gel</td><td>Invitrogen</td><td>EA0375BOX</td><td>3-8% tris acetato</td></tr><tr><td>Membrana de fluoreto de polivinilideno</td><td>Millipore</td><td>IPVH00010</td><td>0,45 &mu; m tamanho de poro</td></tr><tr><td>ApoB anticorpo&nbsp;</td><td>EMD Millipore</td><td>AB742</td><td>diluição 1:4000</td></tr><tr><td>Burro anti-cabra IgG-HRP</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>Sc-2304</td><td></td></tr><tr><td>ECL Prime Western Blotting</td><td>Reagent GE Healthcare LifeSciences</td><td>RPN2232&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Kit de Triglicerídeos</td><td>Wako Pure Chemicals</td><td>998-40391/994-40491</td><td></td></tr><tr><td>Kit de Colesterol Total</td><td>Wako Pure Chemicals</td><td>439-17501</td><td></td></tr><tr><td>Proteína Total</td><td>&nbsp; Perfurar</td><td>23225</td><td>Ensaio de ácido bicinconínico</td></tr></tbody></table>

long-term cateterismo do tronco linfa intestinal e recolha de linfa no neonatais pigs

Long-Term Catheterization of the Intestinal Lymph Trunk and Collection of Lymph in Neonatal Pigs

O cateterismo do tronco linfático intestinal em porcos neonatais é uma técnica que permite a coleta a longo prazo de grandes quantidades de linfa eferente intestinal (central). É importante ressaltar que a coleta de linfa central do intestino permite que os pesquisadores estudem os mecanismos e os constituintes lipídicos associados ao metabolismo lipídico, inflamação intestinal e metástase do câncer, bem como células envolvidas na função imunológica e imunovigilância. Uma abordagem cirúrgica da linha média ventral permite excelente exposição cirúrgica ao abdome craniano e acesso relativamente fácil ao vaso do tronco linfático intestinal que fica próximo ao pâncreas e ao segmento ventral direito da veia porta abaixo do aspecto visceral do lobo direito do fígado. O vaso é meticulosamente dissecado e liberado da fáscia circundante e, em seguida, dilatado com suturas, permitindo a inserção e posterior fixação do cateter no vaso. O cateter é exteriorizado e aproximadamente 1 L/24 horas de linfa é coletado durante um período de 7 dias. Embora essa técnica permita a coleta de grandes quantidades de linfa central por um longo período de tempo, o sucesso depende de uma dissecção cirúrgica cuidadosa, manuseio de tecido e muita atenção à técnica cirúrgica adequada. Isso é particularmente importante em cirurgias em animais jovens, pois os vasos linfáticos podem se romper facilmente, potencialmente levando ao fracasso cirúrgico e experimental. O vídeo demonstra uma excelente técnica cirúrgica para a coleta de linfa intestinal.

<html> cateterismo linfática do tronco linfático intestinal de suínos neonatal permite a coleta de cerca de 1 L / 24 hr da linfa centro durante um período de 7 dias. A linfa recolhida neste experiências continha componentes do metabolismo de lípidos, proteínas ou seja total de linfa, apoB48 lipoproteína, triglicéridos, proteína total, e colesterol. Tabela 1 destaca valores representativos destes componentes lipídicos de amostras linfáticos agrupados de três porcos. Notavelmente, o fluxo d...

Apresentamos um procedimento cirúrgico para cateterizar o tronco linfático intestinal em porcos neonatais para coletar grandes quantidades de componentes do metabolismo lipídico da linfa eferente.

Long-Term Cateterismo do tronco linfa intestinal e Recolha de linfa no Neonatais Pigs

Catheterization of the intestinal lymph trunk in neonatal pigs is a technique allowing for the long-term collection of large quantities of intestinal ...

A cateterização linfática é uma técnica importante utilizada para investigar mecanismos envolvidos no metabolismo de lipídios e fármacos, metástase do câncer e função imunológica, e a coleta de grandes quantidades de linfa a partir de diversos modelos animais permite que pesquisadores estudem esses processos. O vídeo demonstra em detalhes o procedimento cirúrgico empregado para cateterizar o tronco linfático intestinal em porquinhos neonatos utilizando uma abordagem ventral de linha média. Todos os procedimentos foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidado e Uso de Animais da Universidade de Alberta.Para acessar o vaso linfático, a cavidade abdominal foi aberta. A eletrocauterização no modo de corte foi utilizada para abrir a camada muscular. Um retrator foi colocado para manter a parede abdominal aberta durante todo o procedimento.Órgãos abdominais-chave são identificados para auxiliar na localização do vaso linfático. Para melhor acesso, segmentos do vaso linfático do intestino delgado e do cólon são exteriorizados para o lado esquerdo do corpo. O vaso linfático é delimitado pela identificação do fígado e do segmento ventral direito da veia porta.Em leitões neonatos, os vasos linfáticos são delicados e se rompem facilmente, sendo necessária uma dissecação minuciosa com swabs e instrumentos rombos. Aqui está o vaso linfático intestinal. Agora a sutura está sendo passada sob o vaso linfático com pinça romba.Agora há três suturas de seda 2-0 passadas sob o vaso linfático. A sutura mais caudal é usada para dilatar o vaso e fixar o cateter ao vaso. As suturas cranianas são usadas para fixar o cateter dentro do vaso.Um pequeno corte no vaso linfático permite que uma pinça romba dilate o vaso. O cateter é inserido no vaso. Isso deve ser feito com cuidado para garantir que o vaso linfático não se rompa.O cateter precisa ser avançado além da sutura mais cranial para garantir que esteja bem posicionado. Os três pontos de seda 2-0 fixam o cateter ao vaso linfático. É importante que os dois pontos craniais sejam primeiramente utilizados para fixar o cateter ao vaso, e o ponto mais caudal seja então usado para ancorar o cateter, proporcionando estabilidade.É importante garantir um bom fluxo linfático antes de fechar a cavidade abdominal. O cateter é exteriorizado no flanco médio esquerdo do porco. Pinças grandes são utilizadas para puxar o cateter da cavidade abdominal até a superfície externa do flanco do porco.As camadas musculares são fechadas com sutura de vicryl 2-0 em agulha cônica, utilizando um padrão de sutura interrompida simples. A pele é fechada com sutura de vicryl 2-0 em agulha cortante, utilizando um padrão de sutura subcuticular contínuo. Na incisão de saída, o cateter atravessa a pele e é fechado com sutura de nylon 2-0 em agulha cortante, utilizando um padrão de sutura em bolsa de papel.Esse fechamento ajuda a prevenir infecções ascendentes que possam se propagar internamente ao longo do cateter. A jaqueta que segura os frascos de coleta de linfa é colocada no porco enquanto ele ainda está sob anestesia. O cateter é inserido no frasco de coleta e o bom fluxo linfático é verificado antes de despertar o porco.Os porcos se recuperam bem do procedimento e o fluxo linfático excelente é mantido durante todo o experimento. A tabela exibe os componentes da linfa coletada do vaso linfático. Esses componentes incluem Apolipoproteína B48, Triglicerídeos e Colesterol.A figura do Western Blot mostra a presença de ambas as apolipoproteínas B48 e pequenas quantidades de apolipoproteína B100 de origem plasmática na amostra de linfa coletada. Embora a cateterização linfática em porquinhos possa ser tecnicamente desafiadora, já que os vasos linfáticos são delicados e frágeis, este vídeo demonstra que o uso de uma técnica cirúrgica adequada e cuidadosa em porquinhos pode fornecer aos pesquisadores um excelente modelo para a coleta de linfa intestinal.

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Research

JoVE Journal

Medicine

Medicina

Descrevemos um novo método cirúrgico para cateterizar "alças intestinais" dentro do íleo de ovelhas. Uma vez que os animais têm recuperado de uma cirurgia e que tenha limpado antibióticos e analgésicos, múltiplos tratamentos podem ser depositados diretamente em loops através dos cateteres.

Cateterização de alças intestinais em Ruminantes

Este vídeo demonstra uma técnica para canular o ducto linfático mesentérico em ratos. Este método permite o acesso direto a todo o volume de componentes presentes no fluido linfático.

Canulação do Ducto Linfático Mesentérico em Modelo de Rato para Colheita de Fluido Linfático

Aqui descrevemos uma técnica para canular o ducto linfático mesentérico em ratos que permite a quantificação do transporte de lipídios e drogas através do sistema linfático após a administração intestinal. A técnica pode ser adaptada para avaliar as concentrações de linfa mesentérica e/ou transporte de fluidos, células imunes, peptídeos, proteínas e moléculas lipofílicas.

A linfa mesentérica Duct canulada Rat Modelo: Aplicação para a Avaliação de Intestinal Linfática transporte da droga

Aqui, descrevemos um método preciso para coletar linfócitos toráclicos e observar a migração de linfócitos gut-tropic nos patches de Rato Peyer por 3 horas usando fotografia de lapso de tempo. Esta técnica pode esclarecer como a dinâmica dos linfócitos são afetadas em condições inflamatórias.

Observação microscópica da Dinâmica do Linfócito em Patches de Rat Peyer

O presente protocolo descreve um protocolo cirúrgico detalhado para o isolamento de linfa intestinal corrente em resposta a infusões intraduodenais de nutrientes em camundongos. Isso permite a determinação fisiológica da absorção de lipídios intestinais totais e da síntese e secreção de quilomícrons em resposta a vários nutrientes experimentais.

O Isolamento da Linfa Mesentérica Corrente em Camundongos para Quantificar a Cinética In Vivo de Absorção de Lipídios da Dieta e Secreção de Quilomícrons

Uma abordagem confiável e reprodutível para a inserção e manutenção de um cateter de Hickman tunelizado para acesso vascular de longa permanência em suínos é descrita. A colocação de um cateter venoso central permite uma conveniente amostragem diária de sangue total de animais acordados e administração intravenosa de medicamentos e fluidos.

Uso do cateter de Hickman para acesso vascular de longa permanência em modelo pré-clínico de suínos

Este protocolo descreve o desenvolvimento de um modelo de leitões neonatais de lesão pulmonar aguda que modela eventos patogênicos precoces que ocorrem no pulmão prematuro, incluindo quantidade de surfactante subadequada, hiperóxia, ventilação de alta pressão e inflamação, para facilitar a compreensão dos gatilhos moleculares da displasia broncopulmonar e melhorar a tradução terapêutica.

Desenvolvimento de um modelo de lesão pulmonar aguda em leitões neonatais recriando o ambiente inicial de pulmões de bebês prematuros

Este protocolo experimental demonstra um modelo profundo de rato canulado por ducto linfático cervical que permite avaliação direta e quantitativa da drenagem linfática da região da cabeça. O modelo facilita a análise detalhada de solutos derivados do sistema nervoso central (SNC), populações de células imunes e a distribuição e eliminação de terapêuticos voltados para o SNC.

Modelo de rato canulado com ducto linfático cervical para avaliação do transporte linfático da cabeça e do cérebro

Este protocolo experimental descreve um modelo de rato canulado por ducto linfático hepático que permite avaliação direta e quantitativa da drenagem linfática e vascular hepática. O modelo permite amostragem simultânea de sangue linfático hepático e sistêmico para investigar o transporte hepático, metabolismo e sinalização imunológica, apoiando estudos de farmacocinética de medicamentos e biologia específica do fígado.

Um modelo abrangente de RAT para avaliação de vias de transporte hepático por meio de amostragem simultânea linfática e vascular sanguínea

Fluorescência de imagem é uma modalidade promissora inovadoras para cirurgia guiada por imagem em oncologia cirúrgica. Neste vídeo podemos descrever o procedimento técnico para a detecção do linfonodo sentinela utilizando imagens de fluorescência como exibidos em oncologicy ginecológicos. Um sistema de câmera multiespectral de fluorescência, juntamente com o agente de indocianina verde fluorescente, é aplicado.

Imagens em tempo real multiespectrais de fluorescência para detecção intra-operatória do linfonodo sentinela em Oncologia Ginecológica

Aprenda a técnica cirúrgica de cateterismo do tronco linfático intestinal em leitões neonatos usando abordagem ventral mediana. Este método permite coletar linfa para estudar metabolismo lipídico e função imunológica.

Long-Term Cateterismo do tronco linfa intestinal e Recolha de linfa no Neonatais Pigs

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