Long-Term Cateterismo do tronco linfa intestinal e Recolha de linfa no Neonatais Pigs

Apresentamos um procedimento cirúrgico para cateterizar o tronco linfático intestinal em porcos neonatais para coletar grandes quantidades de componentes do metabolismo lipídico da linfa eferente.

O cateterismo linfático é uma técnica importante usada para investigar mecanismos envolvidos no metabolismo de lipídios e drogas, metástase de câncer e função imunológica, e a coleta de grandes quantidades de linfa de vários modelos animais permite que os pesquisadores estudem esses processos. O vídeo demonstra em detalhes o procedimento cirúrgico empregado para cateterizar o tronco linfático intestinal em porcos neonatais usando uma abordagem de linha média ventral. Todos os procedimentos foram aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidados e Uso de Animais da Universidade de Alberta.

Para acessar o vaso linfático, a cavidade abdominal foi aberta. O eletrocautério na configuração de corte foi usado para abrir a camada muscular. Um afastador foi colocado para manter a parede abdominal aberta durante o procedimento.

Os principais órgãos abdominais são identificados para auxiliar na localização do vaso linfático. Para melhorar o acesso aos vasos linfáticos, segmentos do intestino delgado e do cólon são exteriorizados para o lado esquerdo do corpo. O vaso linfático é marcado pela identificação do fígado e do segmento ventral direito da veia porta.

Em porcos neonatais, os vasos linfáticos são delicados e facilmente rompidos, portanto, é necessária uma dissecção meticulosa com cotonetes e instrumentos rombos. Aqui está o vaso linfático intestinal. Agora a sutura está sendo passada por baixo do vaso linfático com uma pinça romba.

Agora existem três suturas de seda 2-0 passadas por baixo do vaso linfático. A sutura mais caudal é usada para dilatar o vaso e prender o cateter ao vaso. As suturas cranianas são usadas para prender o cateter dentro do vaso.

Uma pequena incisão no vaso linfático permite que uma pinça romba dilate o vaso. O cateter é inserido no vaso. Isso deve ser feito com cuidado para garantir que o vaso linfático não se rompa.

O cateter precisa ser avançado além da sutura craniana para garantir que esteja bem encaixado. As três suturas de seda 2-0 prendem o cateter no vaso linfático. É importante ressaltar que as duas suturas cranianas são usadas primeiro para prender o cateter no vaso e a sutura mais caudal é então usada para amarrar o cateter, adicionando estabilidade.

É importante garantir que haja um bom fluxo linfático antes de fechar a cavidade abdominal. O cateter é exteriorizado no flanco médio esquerdo do porco. Pinças grandes são usadas para puxar o cateter da cavidade abdominal para a superfície externa do flanco do porco.

As camadas musculares são fechadas com sutura de vicryl 2-0 em uma agulha cônica em um padrão de sutura simples interrompido. A pele é fechada com sutura de vicryl 2-0 em uma agulha cortante em um padrão de sutura subcuticular em execução. Com a incisão de saída, o cateter passa pela pele e é fechado com sutura de náilon 2-0 em uma agulha cortante em um padrão de sutura em bolsa.

Esse fechamento ajuda a evitar infecções ascendentes que rastreiam para dentro ao longo do cateter. A jaqueta que contém os frascos de coleta de linfa é colocada no porco enquanto o porco ainda está sob anestesia. O cateter é inserido no frasco de coleta e um bom fluxo linfático é garantido antes de acordar o porco.

Os porcos se recuperam bem do procedimento e o excelente fluxo linfático é mantido durante todo o experimento. A tabela exibe os componentes da linfa coletados do vaso linfático. Esses componentes incluem apolipoproteína B48, triglicerídeos e colesterol.

A figura do Western Blot mostra a presença de Apolipoproteína B48 e pequenas quantidades de Apolipoproteína B100 derivada do plasma na amostra de linfa coletada. Embora o cateterismo linfático em porcos jovens possa ser tecnicamente desafiador, pois os vasos linfáticos são delicados e friáveis, este vídeo demonstra que o uso de uma técnica cirúrgica adequada e cuidadosa em porcos jovens pode fornecer aos pesquisadores um excelente modelo para a coleta de linfa intestinal.