Criação de abdominais aderências em Ratos

O objetivo geral deste procedimento é produzir consistentemente aderências abdominais no camundongo, minimizando a mortalidade. Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo das aderências abdominais, como quais células, macromoléculas, vias de sinalização e citocinas estão envolvidas na formação da adesão. As principais vantagens desta técnica são que os camundongos produzem aderências 100% do tempo e a taxa de mortalidade é muito baixa quando o procedimento é realizado corretamente.

Geralmente, indivíduos novos neste procedimento terão dificuldade em aplicar a quantidade adequada de força ao usar a lixa e também ao aplicar a quantidade correta de amido. A demonstração visual dessa técnica é crítica porque muita força perfurará o ceco, mas pouca força pode não resultar na formação de aderências. No dia da cirurgia, use uma máquina de cortar cabelo para aparar o pelo abdominal do animal anestesiado.

Em seguida, transfira o animal para um dispositivo de aquecimento e prenda os membros com fita adesiva. Em seguida, desinfete o abdômen com betadine, seguido de etanol a 70%, tendo o cuidado de incluir os pelos nas bordas da área depilada. Coloque uma cortina estéril sobre o mouse.

Em seguida, segure a parte inferior da pele abdominal com uma pinça e faça um corte vertical raso. Continue a incisão até o processo xifóide. Em seguida, segure a musculatura abdominal na linha média e use uma tesoura afiada para fazer uma pequena incisão com cuidado, tomando cuidado para evitar os órgãos internos.

Quando os órgãos abdominais estiverem visíveis, insira a tesoura na incisão e corte cuidadosamente em ambas as direções para estender o corte do processo xifóide até acima da bexiga. Uma vez que os intestinos tenham sido expostos, localize o ceco e use uma pinça atraumática para exteriorizar suavemente o tecido. Oriente o ceco com a ponta voltada para a mão dominante e coloque o ceco sobre o dedo indicador não dominante.

Usando uma lixa de grão 100, lixe suavemente toda a superfície de ambos os lados do intestino externalizado por 30 a 60 segundos. Uma pequena quantidade de areia deve ser sentida à medida que a lixa se move ao longo da superfície cecal. Se um vaso sanguíneo cecal for cortado durante a abrasão, pressione suavemente a gaze no local do sangramento por até dois minutos.

Se o sangramento persistir após dois minutos, coloque uma sutura de monofilamento 870 ao redor do vaso. Quando a superfície cecal ficar menos brilhante e as petéquias aparecerem, use uma nova tira de lixa para lixar a superfície peritoneal do músculo da parede lateral abdominal direita até que toda a superfície da parede lateral pareça áspera. Em seguida, use um driver de agulha castroviejo para colocar dois a quatro dígitos de 840 pontos de seda na camada muscular da parede lateral abdominal direita, deixando caudas finas e milimétricas de comprimento.

Use uma seringa de 10 mililitros de solução salina aquecida para irrigar os intestinos e a cavidade abdominal várias vezes. Se a área embaixo do mouse ficar encharcada, mova o mouse para uma superfície seca para evitar hipotermia. Quando os intestinos estiverem bem irrigados, coloque gaze estéril sobre a incisão para absorver o excesso de solução salina.

Em seguida, posicione o ceco próximo às suturas na parede lateral abdominal direita. Use uma esponja de gaze para aplicar pressão em qualquer ponto de sangramento ativo. Em seguida, polvilhe uma pitada de amido de arroz na superfície da parede lateral abdominal direita e no ceco.

Para fechar o abdômen, use uma sutura trançada absorvível 60 para colocar um ponto contínuo na camada muscular na parte superior da incisão. Passe a sutura em direção à parte inferior da incisão, reunindo seções de três por três milímetros da musculatura a cada novo ponto. Na parte inferior da incisão, deixe um laço de sutura do ponto anterior para instrumentar amarrar a sutura e cortar a sutura, deixando caudas de cinco milímetros.

Use uma sutura de monofilamento de nylon 60 para fechar a pele da mesma maneira. Em seguida, administre um bolus salino subcutâneo de 20 mililitros por quilograma e seque bem todo o animal com gaze fresca. Por fim, enrole frouxamente um curativo adesivo ao redor da incisão, tomando cuidado para não restringir as pernas do animal ou a mecânica da respiração e monitore o camundongo até que ele esteja totalmente recuperado.

Sete dias após a cirurgia, o ceco e possivelmente o cólon ascendente, fígado e alças do intestino delgado devem estar aderentes à parede abdominal direita. A inclusão e secção do tecido abdominal excisado produz excelentes lâminas para análises histológicas e imuno-histoquímicas. Uma vez que este procedimento é dominado, ele pode ser realizado em menos de 30 minutos.

Após este procedimento, outros métodos, como PCR quantitativo e cultura de fibra de vidro, podem ser usados para responder a perguntas sobre a expressão gênica dentro do tecido de adesão.