Desenvolvimento de um Modelo-capeamento pulpar direto para a Avaliação dos pulpar cicatrização de feridas e Formação reparadora dentina em Ratos

O objetivo geral deste protocolo é apresentar o procedimento de capeamento pulpar direto em camundongos. Este método pode ajudá-lo a responder a perguntas-chave na biologia da polpa, como a polpa cicatriza ou como a dentina reparadora se forma, quando você coloca materiais de capeamento pulpar presos na polpa exposta. A principal vantagem dessa técnica é que o procedimento real de capeamento pulpar direto realizado em humanos também pode ser feito em camundongos, exatamente da mesma maneira.

As implicações dessa técnica se estendem à melhoria das propriedades do material para salvar dentes que, de outra forma, estariam condenados a serem tratamentos mais invasivos, como a terapia de canal. Depois de anestesiar adequadamente o mouse para o procedimento, posicione o suporte bucal em sua boca e prenda a outra extremidade à mesa de forma que a cabeça fique voltada para cima. Usando boa iluminação e estereoscópio, observe o primeiro molar maxilar.

Em seguida, usando a broca de um quarto de volta em uma peça de mão de alta velocidade a 200.000 rpm, remova a região central do esmalte do dente até que a polpa fique visível através da dentina transparente. Tenha cuidado para não penetrar na polpa. Em seguida, usando um não.

15 lima K endodôntica, perfurar a dentina e expor a polpa. Não empurre nenhum detrito para dentro da polpa; Isso pode ser evitado girando o arquivo K trimestralmente e, em seguida, retirando o arquivo K. Agora, prepare o MTA e, usando o explorador, entregue o MTA e, em seguida, embale-o na região exposta usando a parte de trás da ponta do papel e batendo suavemente.

Em seguida, usando uma seringa carregada com ácido fosfórico a 35%, cubra o dente com o condicionador, evitando os tecidos gengivais, e deixe o condicionamento agir por 15 segundos. Após 15 segundos, chupe o ácido do dente e use um aplicador de algodão umedecido em água para limpar qualquer ácido restante. Chupe e limpe até que todo o encantamento seja removido.

Em seguida, aplique os adesivos dentários usando a parte de trás da ponta do papel. Torne a camada adesiva fina soprando-a com ar comprimido por alguns segundos. Em seguida, catalise o adesivo por 30 segundos com a luz apropriada.

Agora, coloque pequenas quantidades de compósito no dente usando a ponta do explorador para fluir o compósito para as ranhuras dos dentes. Uma vez aplicado, catalise o compósito por 30 segundos. Depois de sacrificar o camundongo e remover toda a maxila, coloque a mandíbula em 4% de paraformaldeído em PBS a pH 7,4.

Mantenha o tecido a 4 graus Celsius durante a noite e, na manhã seguinte, transfira-o para etanol a 70% para armazenamento até que possa ser processado. Para fazer uma microtomografia computadorizada da maxila, primeiro prenda-a em gaze embebida em etanol a 70% e, em seguida, embale-a em um tubo de cultura de células de 15 mililitros. Em seguida, monte o tubo no estágio de micro tomografia computadorizada.

Em seguida, defina a fonte de raios X para fornecer uma corrente de 145 microamperes com 55 quilovolts de pico por 200 milissegundos. Usando um filtro de alumínio de 0,5 milímetro, adquira imagens com resolução de 20 mícrons. Após a conclusão dos exames, comece a descalcificar a maxila com 5% de EDTA e 4% de sacarose em PBS, a um pH de 7,4.

Deixe essa reação ir por duas semanas a 4 graus Celsius. Depois de embutir a maxila, faça fatias de cinco mícrons de espessura. As áreas de capeamento pulpar geralmente coincidem com a raiz palatina distal, que pode ser usada como ponto de referência.

Determine a área precisa de interesse examinando a histologia ao microscópio óptico e comparando os resultados com as microtomografias computadorizadas. Para coloração H&E, remova a parafina e reidrate as lâminas com dois banhos de xileno por alguns minutos cada. Em seguida, passe-os por uma série de etanol diluído em série.

Cada banho deve ser aplicado por apenas um minuto. Siga a reidratação com um enxágue. Em seguida, aplique a solução de hemotoxilina por dois minutos e meio.

Remova o corante com um enxágue e, em seguida, coloque as lâminas em etanol a 95% por um minuto. Em seguida, pinte as lâminas com solução de eosina por um minuto e depois enxágue-as. Inverta as etapas de hidratação para desidratar os tecidos manchados, começando com etanol.

Em seguida, trate-os com xileno. Os slides podem então ser montados e fotografados. Usando os procedimentos descritos, o capeamento pulpar foi realizado em camundongos de 8 semanas de idade.

Seis semanas depois, suas maxilas foram colhidas e examinadas. Curiosamente, a coloração H & E revelou a formação de dentina em toda a câmara pulpar e nos canais radiculares. Comparativamente, o molar não tampado não mostrou a mesma formação de dentina.

No molar tampado, havia características de formação dentinária e óssea, pois ambos os túbulos dentinários e osteócitos foram encontrados na dentina reparadora, sugerindo que a polpa lesada pode ser mineralizada tanto por odontoblastos residentes quanto por osteoblastos imigrados. O uso da coloração imuno-histoquímica DMP1 confirmou ainda mais o aumento das atividades das células que formam a dentina reparadora. Assim como as práticas clínicas odontológicas reais, ter um assistente é extremamente útil.

Por exemplo, com um assistente, essa técnica pode ser feita em apenas dez minutos, uma vez dominada. É importante ressaltar que, ao expor a polpa, lembre-se de usar endofile, não a broca. E quando você estiver entregando o MTA, tenha cuidado.

Não se esqueça de que trabalhar com fixadores como o paraformaldeído pode ser extremamente perigoso. Precauções como o uso de equipamento de proteção individual devem ser sempre tomadas.