Nerve sparende Mittelharnröhrenobstruktion (NEMO) in Female Kleine Nagetiere

Das übergeordnete Ziel dieser Technik ist es, chirurgisch eine partielle Obstruktion des Blasenauslasses bei kleinen weiblichen Nagetieren zu erzeugen, die eine Innervation des Blasenauslasses mit einer geringen Morbidität, praktisch keiner Mortalität und geringer Variabilität im Grad der Obstruktion verschont. Diese Methode kann dazu beitragen, wichtige Fragen zum obstruktivitätsinduzierten Blasenumbau zu beantworten, wie z. B. welche Genexpressionsmuster und epigenetischen Veränderungen sind mit einer Obstruktion der Auslassung verbunden? Die Hauptvorteile dieser Technik bestehen darin, dass sie zuverlässig ist und dass sie die Notwendigkeit einer Dissektion um den Blasenhals vermeidet, wodurch die Innervation des Blasenauslasses vermieden wird.

Die Implikation dieser Technik erstreckt sich auch auf die Therapie des Blasenverschlusses, da die Phase nach der Entlastungs- und Erholungsphase reproduzierbar beurteilt werden kann. Die Genesung einer Blasenobstruktion ist beim Menschen nicht vorhersehbar. Mit dieser Technik kann die Obstruktion entfernt werden, was eine Beurteilung der Zell- und Gewebereaktionen ermöglicht, die mit der Genesung von der Obstruktion verbunden sind.

Wir haben diese Methode weiterentwickelt, als wir feststellten, dass eine traditionelle, eher proximale Obstruktion nach Scheindissektionen ohne tatsächliche chirurgische Obstruktion mit einer signifikanten unerwünschten Blasendysfunktion und Dysmorphie verbunden war. Beginnen Sie damit, eine 200 Gramm schwere weibliche Ratte auf ein Heizkissen zu legen und die Gliedmaßen und den Schwanz mit Klebeband zu sichern. Dann desinfizieren und sterile Handtücher legen, ohne den Unterbauch zu bedecken.

Verwenden Sie dann einen 20-Gauge-Angiokatheter, um die Blase zu katheterisieren, und befestigen Sie den Katheter mit Klebeband. Anschließend wird unter einem Präpariermikroskop mit einem Skalpell ein acht Millimeter großer Längsschnitt der Haut von der tastbaren Schamsynthese in Richtung des Harnröhrengangs vorgenommen. Heben Sie die Haut auf beiden Seiten des Schnitts ab, um den späteren Verschluss zu erleichtern, und verwenden Sie eine feine Schere, um die Längspreizung stumpf zu zerlegen, um die verkümmerte Harnröhre zu identifizieren.

Platzieren Sie feine selbsthaltende Hauthaken, um die Freilegung der Harnröhre zu erhöhen, und verwenden Sie eine analoge stumpfe Dissektion, um das ventral verlaufende neurovaskuläre Bündel anzuheben. Entwickeln Sie mit einer gebogenen Schere und einer sanften Längsspreizung die Ebene zwischen Harnröhre und Scheide, dorsal zur Harnröhre. Führen Sie nun stumpf eine 4-0-Seidennaht hinter die Harnröhre und bereiten Sie den Doppelwurf des Chirurgenknotens vor.

Entfernen Sie dann den Angiokatheter und platzieren Sie einen 0,9 Millimeter großen Metallstab parallel zur Harnröhre. Ziehen Sie den Knoten um die Harnröhre und den Metallstab fest, so dass der Stab noch leicht herausgleiten kann, und sichern Sie den Knoten mit drei weiteren sanften Würfen. Entfernen Sie nach dem letzten Wurf den Stab und schneiden Sie die Nahtanden auf eine Länge von etwa drei bis vier Millimetern ab, indem Sie einen abwechslungsreichen Einzelstich aus resorbierbarem, geflochtenem 4-0-Nahtmaterial verwenden, um sich den paraurethralen Drüsen anzunähern.

Verschließen Sie dann die Haut mit einem abwechslungsreichen horizontalen Matratzenstich mit demselben resorbierbaren Nahtmaterial und injizieren Sie die entsprechende Analgesie. Bei nervenschonender Obstruktion der mittleren Harnröhre oder NeMO bei Mäusen legen Sie eine 18 Gramm schwere weibliche C-57 black-6-Maus in Rückenlage auf ein Heizkissen und sichern Sie die Gliedmaßen mit Klebeband. Desinfizieren Sie dann und legen Sie sterile Handtücher auf, ohne den Unterbauch zu bedecken.

Katheterisieren Sie anschließend unter einem Präpariermikroskop die Blase mit einem 24-Gauge-Angiokatheter und befestigen Sie den Katheter mit Klebeband. Unter einem Präpariermikroskop wird mit einem Skalpell ein sechs Millimeter breiter Längsschnitt der Haut vorgenommen, von der tastbaren Schamsynthese in Richtung des Harnröhrengangs. Präparieren Sie dann stumpf mit einer feinen Schere, um die verkümmerte Harnröhre zu identifizieren.

Durch sanfte Längsspreizung, dorsal der Harnröhre, entwickeln Sie die Ebene zwischen Harnröhre und Scheide. Führen Sie dann stumpf eine 5-0 nicht resorbierbare geflochtene Naht hinter die Harnröhre und bereiten Sie den doppelten Wurf des Chirurgenknotens vor. Verbinden Sie nun eine Ein-Milliliter-Spritze mit dem Angiokatheter und injizieren Sie 0,1 Milliliter normale Kochsalzlösung in die Blase.

Wenn die gesamte Kochsalzlösung abgegeben wurde, verankern Sie mit dem Knoten vorsichtig eine 26-Gauge-Kanüle parallel zur Harnröhre, während Sie den Angiokath zurückziehen. Befestigen Sie den Knoten mit drei weiteren sanften Würfen, gefolgt von der Entfernung der Kanüle und üben Sie sanften Druck auf die Blase aus, um das Auftreten von Urin am Meatus zu testen. Schneide die Nahtanden auf etwa drei Millimeter ab.

Verwenden Sie dann eine 5-0 geflochtene resorbierbare Naht, um die Haut mit einem abwechslungsreichen horizontalen Matratzenstich zu schließen, und injizieren Sie die entsprechende Analgesie, bevor Sie die Maus in einen Erholungskäfig setzen. Das durchschnittliche Verhältnis von relativer Blase zu Körpermasse bei NeMO-scheinoperierten Ratten beträgt zwei Wochen nach dem Eingriff 0,33 %, während es bei den obstruktierten Ratten 0,6 % beträgt, was einer Zunahme der relativen Blasenmasse um 85 % bei diesen Tieren entspricht. NeMO-scheinoperierte Ratten weisen praktisch keinen Restharn auf, der zum Zeitpunkt der Organentnahme durch Blasenpunktion abgesaugt werden kann.

Obstruktive Tiere weisen durch Vertrag ein signifikant größeres mittleres Volumen an Restharn von 0,42 Millilitern auf. Insgesamt nimmt die Mortalität von Mäusen bei Schein- und NeMO-operierten Tieren mit abnehmender Größe der Platzhalterkanüle zu. Darüber hinaus erhöht die Verwendung einer 25-Gauge-Kanüle das Verhältnis von Blase zu Körpermasse bei Mäusen nicht effektiv, während die Verwendung einer 26-Gauge-Kanüle zu einer mehr als zweifachen Zunahme der relativen Blasenmasse führt.

Wenn ein 27-Gauge-Platzhalter angewendet wird, wird zwei Wochen nach dem Eingriff eine Zunahme der relativen Blasenmasse um mehr als 60 % beobachtet. Darüber hinaus hat eine teilweise Obstruktion des Blasenauslasses mit der 25- oder 26-Gauge-Kanüle entlang der Harnröhre keinen Einfluss auf das Restharnvolumen während des zweiwöchigen Versuchszeitraums. Obwohl Tiere mit einem 27-Gauge-Platzhalter eine dreifache mittlere Zunahme des Resturinvolumens im Vergleich zu ihren jeweiligen scheinoperierten Artgenossen aufweisen.

Nach etwas Übung können sowohl das NeMO- als auch das NeMO-Scheinverfahren in 10 bis 15 Minuten abgeschlossen werden. Bei der Durchführung von NeMO bei Mäusen ist es wichtig, daran zu denken, die Möglichkeit einer vollständigen Obstruktion auszuschließen, indem man vor dem Schließen des Tieres vorsichtig etwas Urin abdrückt. Im Anschluss an dieses Verfahren können andere Methoden, wie die Einbeziehung von proximalen Scheintieren, durchgeführt werden, um zusätzliche Fragen über den relativen Beitrag oder die Assoziation lokaler neurogener Auslassreize zu beantworten, die zu Blasendysfunktion, Dysmorphismus und Gendysregulation führen.

Es wird erwartet, dass diese Technik Forschern auf dem Gebiet der obstruktiven Blasenmyopathie den Weg ebnen wird, um zu untersuchen, wie anatomische und neurogene Blasenauslassstörungen zur Entstehung und Wiederherstellbarkeit von Abflussobstruktionen beitragen.