O modelo de coelho da aterosclerose acelerada: uma perspectiva metodológica da artéria ilíaca balão lesão

O objetivo geral deste procedimento é induzir a formação de placas ateroscleróticas em coelhos, interrompendo cirurgicamente o endotélio de suas artérias ilíacas esquerdas e alimentando-os com uma dieta aterogênica. Por lesão isolada em coelhos é frequentemente realizada na aorta para estudar a composição da placa. No entanto, a artéria ilíaca é muito semelhante à artéria coronária humana, tornando-se um local atraente para a modelagem de placas ateroscleróticas.

O conteúdo muscular, lesões uniformes, atividade do fator do tecido ocular e dimensões consistentes dos vasos da artéria ilíaca do coelho são todos comparáveis à artéria coronária humana. Em última análise, isso permite a avaliação de dispositivos fabricados comercialmente para desfechos morfométricos e angiográficos. Demonstrando o procedimento estará Aurelien Frobert, um colaborador do meu laboratório.

Certifique-se de esterilizar todas as ferramentas cirúrgicas usando, por exemplo, um esterilizador de esferas de vidro. Em seguida, prepare e verifique os dois conjuntos de cateteres de balão. Em cada um, coloque uma seringa Luer lock de um mililitro cheia de solução salina normal e, em seguida, verifique se há emblíques presos usando o mecanismo de insuflação do balão.

Em seguida, defina a almofada térmica na plataforma cirúrgica para 37 graus Celsius. Em seguida, pese o coelho. Em seguida, aplique uma injeção de buprenorfina e anestesiar o coelho com isofluorano a 5% a cinco litros por minuto por 10 a 15 minutos.

Agora, coloque o coelho anestesiado na almofada de aquecimento em uma plataforma cirúrgica. Conecte sensores para monitorar a temperatura e a respiração do coelho e coletar eletrocardiogramas. Em seguida, coloque uma máscara facial para fornecer 4% de isofluorano a 2,5 litros por minuto.

Em seguida, confirme um nível adequado de anestesia testando a perda de reflexos de vômito e mesquinha. Um tônus muscular universalmente relaxado também é indicador de anestesia profunda. Em seguida, aplique pomada abtônica em ambos os olhos.

Em seguida, remova os pelos da área ventral logo abaixo das articulações do joelho usando uma máquina de cortar pêlos de animais. Em seguida, remova os pelos soltos e limpe a pele exposta com três esfoliações alternadas de etanol a 70% e betadine e cubra o animal deixando apenas o membro inferior exposto. Para iniciar a cirurgia, localize a artéria safena e faça uma incisão de 1,5 centímetro.

Em seguida, usando uma pequena pinça curva, exponha cuidadosamente uma pequena porção da artéria safena. Tenha cuidado para evitar danificar a veia femoral ou o nervo femoral. Limpar bem a artéria é muito importante durante esta exposição.

Em seguida, coloque duas alças de ligadura soltas sob a artéria safena e amarre uma alça de ligadura perto da extremidade distal da artéria. Em seguida, coloque um grampo microvascular ao longo da artéria acima da ligadura e feche o grampo para interromper o fluxo sanguíneo. Aplique imediatamente uma gota de papaverina para dilatar a artéria e prevenir espasmos de fase.

Em seguida, usando a ligadura, levante a artéria safena e faça uma pequena incisão de arteriotomia usando uma agulha de calibre 24. Em seguida, levante as abas de incisão e insira lentamente um picareta de veia ou uma agulha guia no lúmen da artéria. Agora, insira cuidadosamente um cateter de embolectomia arterial na artéria safena.

Seja gentil para evitar rupturas. Em seguida, remova o picareta da veia e solte a pinça microvascular na artéria. Para criar a lesão, primeiro avance o cateter balão para a terceira marca.

Isso deve colocar cerca de dois a cinco centímetros acima da bifurcação ilíaca. Em seguida, encha o balão com 0,1 mililitros de solução salina normal. Agora, prenda o cateter e puxe-o para trás seis centímetros enquanto o gira para danificar o tecido.

Uma vez retirado, esvazie o balão. E para garantir a dilatação completa do endotélio, repita o processo mais duas vezes. Em seguida, remova o cateter e amarre imediatamente a alça de ligadura logo acima do local da arteriotomia para estancar o sangramento.

Em seguida, aplique um anti-séptico adequado ao redor da perfuração da ferida e limpe os coágulos sanguíneos. Por fim, feche a incisão na pele e desinfete o local da cirurgia com solução de iodopovidona. Em seguida, repita todo o procedimento cirúrgico na artéria ilíaca contralateral usando o segundo cateter.

Após a cirurgia, primeiro limpe a pomada abtônica das laterais do coelho. Em seguida, administre sulfadoxina e trimetoprima. Em seguida, transfira o coelho com a almofada de direção para uma gaiola de recuperação limpa e um adesivo de monitoramento e clipes.

Assim que o animal recuperar a decúbito externo e estiver deambulando, devolva-o à sua gaiola de origem. Para o controle da dor, forneça buprenorfina. Agora, comece a alimentar o animal com uma dieta aterogênica pelo tempo que for necessário.

Para colher o linho fino precoce, duas ou quatro semanas após a cirurgia, primeiro anestesiar o coelho e depois sacrificar o coelho com uma incisão intercardinal. Em seguida, abra o abdômen e exponha o retroperitônio. Em seguida, trace a aorta em direção à bifurcação ilíaca e amarre-a acima da bifurcação.

Em seguida, remova cuidadosamente os tecidos circundantes e isole ambas as artérias ilíacas. Agora disseque as duas artérias e mergulhe-as em PBS gelado. Nela, remova os coágulos usando uma pinça e divida cada artéria em 46 segmentos.

Em seguida, incorpore imediatamente os segmentos em um molde contendo composto OCT e congele os tecidos em nitrogênio líquido. Armazene os tecidos a menos 80 graus Celsius e depois core seções de cinco mícrons de espessura usando a metodologia padrão. A lesão por balão das artérias ilíacas foi realizada com sucesso sem complicações em menos de uma hora.

O coelho se recuperou em uma hora e / ou parecia saudável sem perda de peso significativa. Não foram encontradas complicações pós-operatórias. E após quatro semanas de dieta aterogênica, todos os coelhos tiveram hipercolesterolemia.

A combinação de uma lesão por balão e a dieta de colesterol resultou em mudanças estruturais na parede do vaso, levando ao desenvolvimento de plax aterosclorótica em duas semanas. As artérias ilíacas não lesadas e lesionadas por balão foram isoladas do mesmo animal e comparadas. O linho foi caracterizado por infiltração lipídica, bem como migração e proliferação de som de músculo liso.

O linho continua a crescer nos vasos lesionados, enquanto o tamanho do lúmen continua a diminuir. As mudanças resultantes foram muito pronunciadas em quatro semanas. Após duas e quatro semanas, a quantificação morfométrica revelou um aumento da espessura da íntima média, um aumento da área da placa, uma diminuição da área do lúmen e, finalmente, um aumento no acúmulo de lipídios.

A coloração com anticorpo de actina de músculo liso alfa reage com a actina muscular, identificando assim as células musculares lisas vasculares. Enquanto a coloração com mais 11 anticorpos monocontelais revela o citoplasma dos macrófagos. Juntas, as manchas revelam até que ponto as células musculares lisas e os macrófagos proliferam na placa aterosclerótica nos vasos lesionados.

Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão da segurança automotiva e realizar facilmente uma lesão violenta nas artérias ilíacas do coelho. Esta lesão com dieta aterogênica resulta no desenvolvimento de placas das artérias ilíacas de forma homogênea no tempo.