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DOI: 10.3791/55653-v
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This article presents a software solution for semi-automated tracking of protein concentration along dynamic cellular protrusions. The software enables parallel analysis of protrusion dynamics and protein localization, enhancing our understanding of cell biology.
Apresentamos uma solução de software para o rastreamento semi-automatizado da concentração relativa de proteína ao longo do comprimento de protrusões celulares dinâmicas.
O objetivo geral deste software de análise de imagens é a análise paralela da dinâmica de protrusão e da concentração relativa de proteínas ao longo de todo o comprimento filopodial. Este método pode realmente nos ajudar a entender questões-chave em biologia celular, especialmente as proteínas individuais envolvidas na extensão e retração de filopódios. A principal vantagem da técnica é que o algoritmo de rastreamento de forma adaptativa fornecido permite a avaliação quantitativa da dinâmica de protrusão e localização de proteínas espacialmente resolvida.
Para começar, cultive neurônios, células HeLa ou COS, em meio suplementado, conforme detalhado no protocolo de texto. Uma vez que 40% de confluência é alcançado, transvect as células com as construções de escolha, usando um reagente de transvecção de acordo com as instruções do fabricante. Mantenha as células transvectadas em uma incubadora a 37 graus Celsius e 5% de CO2 por 15 a 18 horas.
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