Gravações de potenciais evocadas visuais em ratos usando um não-invasivo seco multi-canal do couro cabeludo Sensor de EEG

O objetivo geral deste procedimento é medir os potenciais evocados visuais no couro cabeludo de um camundongo usando um sensor de EEG seco, não invasivo e multicanal. Este método pode ajudar a responder a perguntas rápidas no campo de pesquisa translacional pré-clínica para romper a lacuna de sinal na pesquisa de EEG não invasiva entre animais humanos e de laboratório. A principal vantagem desta técnica é a sua não invasividade, o que aumenta a compreensão do EEG animal.

Além disso, fornece ambientes experimentais seguros e convenientes. Comece preparando 16 pinos para um eletrodo não invasivo. Corte dois pedaços de substratos de fibra de vidro com o tamanho de 15 milímetros por 17 milímetros.

Em seguida, faça 16 furos de 1,2 milímetros de diâmetro usando uma máquina de gravação de precisão. Em seguida, faça 16 furos nos substratos planos de acordo com a coordenação da sonda, uniformemente em um intervalo de dois milímetros. Empilhe dois substratos e aplique uma gota de cola adesiva de ação rápida entre as camadas do substrato para criar uma camada dupla de três milímetros de espessura, suportando 16 eletrodos estáveis e paralelos durante a aquisição do sinal.

Em seguida, monte manualmente os 16 eletrodos no substrato, um por um. Solde e vincule a parte final da tampa de solda de cada eletrodo ao conector à prova de toque. Por fim, cubra e esconda as junções expostas com tubos termorretráteis para isolamento elétrico.

No camundongo anestesiado, comece aplicando pomada para os olhos com um cotonete para manter a córnea úmida. Remova os pelos ao redor da cabeça e dos ombros com uma máquina de cortar cabelo. Em seguida, espalhe o creme depilatório disponível comercialmente e mantenha-o nessa área por três a quatro minutos.

Por fim, retire o depilatório aplicado com uma espátula e, em seguida, limpe o restante com lenços umedecidos, aplicando água várias vezes. Comece montando a cabeça do mouse na estrutura estereotáxica, colocando as barras auriculares nos canais auditivos do mouse e apertando-as no lugar. Monte o sensor no suporte de eletrodo feito sob medida.

Em seguida, fixe o suporte do sensor na estrutura estereotáxica. Localize a eletroencefalografia flexível, ou sensor de EEG, levando em consideração o eletrodo de referência e a posição do bregma. Em seguida, abaixe cuidadosamente o sensor na direção vertical, de modo que os êmbolos de eletrodo dispostos entrem em contato com o couro cabeludo do mouse uniformemente na margem curva.

Verifique se as impedâncias estão dentro da faixa adequada, de 100 kiloohms a dois megaohms. Reposicione o eletrodo quando qualquer valor de impedância estiver fora da faixa. Em seguida, posicione o fotoestimulador a 20 centímetros de distância dos olhos do mouse.

Defina os parâmetros dos dispositivos experimentais de modo que a frequência de amostragem seja de 500 hertz, a filtragem de entalhe seja de 60 hertz, o intervalo entre estímulos em 10 segundos, a duração do flash em 10 milissegundos e o número de estímulos de flash em 100 tentativas por sujeito. Finalmente, antes de iniciar as gravações de EEG, adapte o mouse por 10 minutos na gaiola escura para adaptação visual escura. As respostas médias do potencial evocado visual indicam flutuação mínima do sinal após a estimulação, com menos de 300 milissegundos de duração.

O sinal se estabiliza constantemente ao longo do tempo durante o período pós-estimulação. Além disso, 14 canais podem ser categorizados em vários grupos com base nas respostas do VEP, revelando morfologias e padrões semelhantes. Uma vez dominada, essa técnica pode ser concluída em uma hora se for executada corretamente.

Ao tentar este procedimento, é importante lembrar de verificar o estado da anestesia do animal. A combinação deste procedimento com outros métodos, como estimulação cerebral ou gravações eletrofisiológicas superficiais, pode ser realizada para responder a perguntas adicionais, como otimização de parâmetros de estimulação cerebral ou localização da fonte. Após seu desenvolvimento, essa técnica abriu caminho para pesquisadores no campo das áreas de pesquisa translacional conectarem a pesquisa científica básica aos estudos do cérebro humano com pesquisas comparáveis, confiáveis e eficientes, sem qualquer preparação cirúrgica invasiva.

Depois de assistir a este vídeo, você deve ter uma boa compreensão de como medir os potenciais evocados visuais no couro cabeludo de um camundongo usando um novo eletrodo que tem o benefício de flexibilidade, status de tipo seco, recursos multicanal, não invasividade e reutilização.