Componentes essenciais de ensaios de transcrição in vitro de Borreliella (Borrelia) burgdorferi

O sistema de ensaio de transcrição in vitro para Borreliella burgdorferi fornece uma ferramenta bioquímica para investigadores estudarem mecanismos e fatores regulatórios gênicos que governam a atividade enzimática da RNA polimerase. O sistema nos permite testar como fatores de transcrição, cofatores, concentrações de sal e pH afetam a função da RNA polimerase da Borreliella burgdorferi, o que contribui para nossa compreensão geral dos mecanismos de regulação gênica. Esta técnica poderosa também pode nos permitir rastrear drogas que inibem seletivamente a RNA polimerase, abrindo as portas para o desenvolvimento de novas drogas para tratar a borreliose de Lyme.

Para começar, colete o pellet celular de dois a quatro litros de Borreliella burgdorferi RpoC-His10X cultivado em meio BSKII em ambiente microaerofílico a uma densidade de duas a quatro vezes 10 constantes por mililitros. Pastilha as células a 10.000 vezes G por 30 minutos a quatro graus Celsius em frascos centrífugos de 500 mililitros e descarte o sobrenadante. Em seguida, ressuspenda as células em 30 mililitros de tampão HN gelado, repita a etapa de centrifugação e decante o sobrenadante.