Separation of Immune Cell Subpopulations in Peripheral Blood Samples from Children with Infectious Mononucleosis

Linlin Zhang; Mengjia Liu; Meng Zhang; Junhong Ai; Jiao Tian; Ran Wang; Zhengde Xie

doi:10.3791/64212

Separação de subpopulações de células imunes em amostras de sangue periférico de crianças com mon...

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Immunology and Infection

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Separation of Immune Cell Subpopulations in Peripheral Blood Samples from Children with Infectious Mononucleosis

Separação de subpopulações de células imunes em amostras de sangue periférico de crianças com mononucleose infecciosa

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September 7, 2022

DOI: 10.3791/64212-v

Linlin Zhang^1,2, Mengjia Liu^1,2, Meng Zhang^1,2, Junhong Ai^1,2, Jiao Tian^1,2, Ran Wang^1,2, Zhengde Xie^1,2

¹Beijing Key Laboratory of Pediatric Respiratory Infectious Diseases, Key Laboratory of Major Diseases in Children, Ministry of Education, National Clinical Research Center for Respiratory Diseases, Laboratory of Infection and Virology, Beijing Pediatric Research Institute, Beijing Children's Hospital,Capital Medical University, National Center for Children's Health, ²Research Unit of Critical Infection in Children, 2019RU016,Chinese Academy of Medical Sciences

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Descrevemos um método que combina contas imunomagnéticas e classificação de células ativadas por fluorescência para isolar e analisar subpopulações de células imunes definidas de células mononucleares do sangue periférico (monócitos, células T ^{CD4 +} , células T ^{CD8 +} , células B e células natural killer). Usando este método, as células magnéticas e fluorescentemente marcadas podem ser purificadas e analisadas.

Este método permitirá a caracterização de diferentes células imunes nos mesmos estados de doença de indivíduos com MI, o que ampliará nossa compreensão do mecanismo de infecção por EBV. Demonstrando o procedimento estará Linlin Zhang, um médico do nosso laboratório. Para começar, pegue os PBMCs isolados anteriormente em um tubo de microcentrífuga de 1,5 mililitro e gire-o a 300 G por 10 minutos à temperatura ambiente.

Descarte o sobrenadante e ressuspenda as células com 80 microlitros do tampão preparado. Em seguida, adicione 20 microlitros de microesferas CD 14 à suspensão celular, bem misturadas por pipetagem, e incube o tubo por 15 minutos no gelo. Em seguida, lave os PBMCs usando um mililitro de tampão e centrífuga a 300 G por 10 minutos à temperatura ambiente.

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