Desenvolvendo uma caixa comportamental para avaliar a inibição pré-pulso e a atividade neural em modelos animais psiquiátricos
July 22nd, 2025
Este protocolo apresenta uma caixa comportamental baseada em microcontrolador para avaliar a inibição pré-pulso (PPI) coletando dados de aceleração de um sensor abaixo da caixa. Esses dados avaliam déficits sensoriais em ratos socialmente isolados, com um método adicional para sincronizar dados com a atividade neuronal para avançar em estudos de neurofisiologia sobre distúrbios comportamentais.
Este protocolo descreve um método simples para avaliar modelos animais de esquizofrenia projetado para pesquisadores comportamentais sem experiência em programação ou eletrônica. Criamos uma caixa comportamental econômica para avaliar a inibição do pré-pulso em ratos afetados por problemas de neurodesenvolvimento decorrentes do sofrimento no início da vida. Avanços recentes em modelos animais psiquiátricos usando o teste de inibição de pré-pulso se concentram na compreensão dos déficits sensoriais observados em distúrbios como a esquizofrenia.
Isso inclui modificações genéticas, neuroimagem e intervenções farmacológicas para investigar interrupções na inibição pré-pulso, melhorando os diagnósticos e terapias. Esperamos que nosso protocolo popularize o estudo da inibição pré-pulso em modelos animais de esquizofrenia, e os laboratórios que estudam aspectos moleculares, comportamentais e fisiológicos da doença possam usá-lo para contribuir para a compreensão desse complexo transtorno psiquiátrico. Para começar, faça uma caixa transparente de acrílico para acomodar um rato de comportamento livre equipado com um headstage com fio.
Use almofadas de borracha autoadesivas para isolar a caixa de acrílico de vibrações e prenda o acelerômetro abaixo sem contato com outras peças. Usando um ferro de solda, solde um cabo de fita diretamente nos quatro orifícios da placa do acelerômetro. VCC, GND, SCL e SDA.
Limpe o centro do acrílico e a placa plana do acelerômetro. Em seguida, conecte a extremidade oposta do cabo de fita ao microcontrolador conectando VCC a 3.3 volts, GND a GND, SCL a SCL e SDA a SDA. Em seguida, construa uma câmara à prova de som com uma porta frontal usando bordas de 80 centímetros de fibra de média densidade de 15 milímetros de espessura.
Posicione um alto-falante 20 centímetros acima da caixa de acrílico, garantindo que o headstage e o cabo tenham uma amplitude total de movimento. Conecte a saída de áudio do computador à placa do microcontrolador. Usando um cabo de barramento serial universal, conecte a placa do microcontrolador ao computador.
Em seguida, abra o software do ambiente de desenvolvimento integrado para a placa do microcontrolador no computador. Depois de selecionar a placa do microcontrolador correspondente, a porta COM e a taxa de transmissão, abra o esboço do arquivo, compile e carregue o código na placa do microcontrolador. Clique na porta serial do monitor para verificar os dados recebidos.
Em seguida, feche o software do ambiente de desenvolvimento. Agora, posicione um medidor de nível de som digital dentro da caixa de acrílico onde o animal será colocado. Reproduza os estímulos acústicos e ajuste o alcance de detecção no medidor de nível de som para calibrar os níveis de estímulo enviados pelo computador.
Em seguida, abra o software de código aberto preferido para adquirir e salvar dados da porta serial. Defina as configurações do software, incluindo a porta COM, a placa do microcontrolador e a taxa de transmissão. Clique em Conectar para ler os dados brutos ou a exibição do gráfico.
Em seguida, clique em Salvar para começar a registrar os dados dos experimentos. Depois de implantar o feixe de eletrodos no cérebro do rato, conecte cuidadosamente o estágio principal ao implante do conector no crânio do rato. Em seguida, ligue o sistema de aquisição de dados neuronais e confirme se ele recebe dados dos estímulos acústicos por meio do microcontrolador ou de um gerador TTL conectado ao detector de áudio ou microfone.
Ligue o gravador de porta serial de código aberto configurado anteriormente. Agora, use o software de aquisição de eletrofisiologia para coletar dados eletrofisiológicos e do acelerômetro. Exponha o animal ao ruído de fundo branco por sete minutos, com apresentação aleatória de todos os tipos de pulsos, repetindo cada tipo de pulso 10 vezes.
No final da sessão de gravação, desligue o software de aquisição. Em seguida, desconecte cuidadosamente o conector do estágio principal do implante no crânio do animal. Para realizar análises eletrofisiológicas e comportamentais, importe os dados brutos contendo atividade cerebral, aceleração e estímulos acústicos para uma plataforma de processamento de sinais.
Extraia EPICS centrado em cada estímulo acústico. Em seguida, normalize as médias para permitir a comparação entre animais. Defina a resposta para um único pulso como a resposta máxima e normalize as respostas reflexas para outros pulsos em relação a esse valor.
Finalmente, defina a amplitude de sobressalto para o pulso 5 como 100% e represente as respostas a outros pulsos em função da amplitude do pulso 5. A análise do potencial de campo local não indicou modulação de potência significativa nos córtices pré-límbico e infralímbico pós-estimulação, enquanto áreas como a área tegmental ventral, amígdala, núcleo accumbens e hipocampo mostraram densidade de espectro de potência diminuída nas bandas delta, e alfa, com uma modulação beta notável. Os acelerômetros comerciais e DIY demonstraram amplitude consistente e dados baseados em tempo, com leituras de linha de base e amplitudes de resposta de sobressalto mostrando alinhamento próximo entre os dispositivos.
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Visão Geral
Este protocolo descreve uma caixa comportamental baseada em microcontrolador projetada para avaliar a inibição de pré-pulso (PPI) em ratos socialmente isolados, visando avaliar déficits de gating sensorial relacionados a transtornos psiquiátricos como esquizofrenia. Ao sincronizar dados do acelerômetro com a atividade neuronal, este estudo busca avançar a pesquisa em neurofisiologia focada na compreensão de transtornos comportamentais.
Componentes Principais do Estudo
Área da Ciência
- Neurociência Comportamental
- Modelos de Transtornos Psiquiátricos
- Neurofisiologia
Fundo
- Examina o teste de inibição de pré-pulso historicamente usado em pesquisas sobre esquizofrenia.
- Destaca a importância do gating sensorial e seus déficits em condições psiquiátricas.
- Foca em questões de neurodesenvolvimento decorrentes do estresse no início da vida.
- Tem como objetivo melhorar a compreensão das interações entre comportamento e neurofisiologia.
Propósito do Estudo
- Desenvolver um protocolo amigável que integre avaliação comportamental com coleta de dados neuronais.
- Incentivar o uso mais amplo do modelo de inibição de pré-pulso na pesquisa sobre esquizofrenia.
- Melhorar diagnósticos e abordagens terapêuticas para déficits de gating sensorial.
Métodos Utilizados
- Uma caixa comportamental baseada em microcontrolador é utilizada para coletar dados de sensores de aceleração em ratos com comportamento livre.
- O modelo se concentra em ratos socialmente isolados para estudar efeitos relevantes para a esquizofrenia.
- Envolve a construção de câmaras à prova de som e conexão de vários componentes eletrônicos.
- A aquisição de dados inclui medidas comportamentais e eletrofisiológicas durante a exposição ao estímulo.
Principais Resultados
- Disidentificou uma significativa modulação de potência em áreas cerebrais específicas pós-estimulação, demonstrando nossa capacidade de notar mudanças neurofisiológicas.
- Acelerômetros comerciais e DIY forneceram medições confiáveis de respostas de sobressalto.
- O alinhamento de leituras de linha de base e amplitudes de sobressalto entre dispositivos indicou alta consistência no manuseio dos dados.
Conclusões
- Este estudo facilita a compreensão do processamento sensorial em modelos animais relevantes para esquizofrenia e outros transtornos comportamentais.
- Ao oferecer uma abordagem experimental acessível, o protocolo pode ser adotado para exploração adicional das interações comportamentais e fisiológicas.
- As descobertas sublinham a importância de incorporar avaliações comportamentais e neuronais em pesquisas relacionadas à psiquiatria.
