Name: Método rápido de microesferas magnéticas para purificação eficiente de neutrófilos de baixa densidade (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-11-11T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 14 s
Description: Aprenda um método rápido de microesferas magnéticas para purificar neutrófilos de baixa densidade do sangue periférico humano. Esta técnica eficiente utiliza gradiente de densidade e separação magnética para obter células puras e viáveis para estudos imunológicos.

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<table><tbody><tr><td>&nbsp; Anticorpo policlonal anti-citrulina do coelho</td><td>AbCam</td><td>ab100932</td><td>Diluição 1/50</td></tr><tr><td>Placa de cultura de tecidos de 96 poços</td><td>Colega; Corning, Inc.</td><td>3596</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo IgG1 do camundongo Alexa Fluor 488 antihumano CD11b</td><td>BioLegend</td><td>301317</td><td>0,25 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>Anticorpo IgM de camundongo Alexa Fluor 647 anti-humano CD66b</td><td>BioLegend</td><td>305109</td><td>0,05 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>Anticorpo anti-camundongo IgG (H+L), Alexa Fluor 488</td><td>Invitrogen - Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11001</td><td>Diluição 1/50</td></tr><tr><td>Anticorpo monoclonal IgG1 de camundongo anti-neutrófilo elastase</td><td>Santa Cruz Biotecnologia</td><td>SC-55549</td><td>10 & micro; g/mL</td></tr><tr><td>Anticorpo anti-Rabbit IgG (H+L) de burro, Alexa Fluor 555</td><td>Invitrogen - Thermo Fisher Scientific</td><td>A-31572</td><td>Diluição 1/50</td></tr><tr><td>Anticorpo IgG1 de camundongos anti-humano CD62L APC</td><td>BioLegend</td><td>304809</td><td>0,03 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>Anticorpo IgG1 de camundongos CD14 anti-humano APC/Cyanine7</td><td>BioLegend</td><td>367107</td><td>0,25 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>Attune NxT flow citômetro&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific, Inc.</td><td>(lasers azul/vermelho)</td><td></td></tr><tr><td>Albumina sérica bovina (BSA) Fração V</td><td>MP Biomédicos</td><td>810025</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo IgG1 do camundongo Brilliant Violet 510 anti-humano CD33</td><td>BioLegend</td><td>366609</td><td>0,30 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Calbiochem/EMD Millipore</td><td>268298</td><td></td></tr><tr><td>Dextran T500</td><td>Farmacosmos Ar-condicionado</td><td>5.51005E+11</td><td></td></tr><tr><td>Dihidrorodamina-123</td><td>Anaspec, Inc.</td><td>AS-85711</td><td></td></tr><tr><td>Classificador de células FACS</td><td>Becton Dickinson&nbsp;</td><td>Modelo FACSAria</td><td></td></tr><tr><td>Soro fetal bovino (FBS)</td><td>Gibco</td><td>16000-044</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll-Paque</td><td>Merck KG</td><td>GE 17-1440-03</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo IgG1 do camundongo anti-humano CD98 do FITC</td><td>BioLegend</td><td>315603</td><td>0,30 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>FlowJo Software</td><td>Becton Dickinson</td><td>Versão 10, 2019</td><td></td></tr><tr><td>Microscópio invertido de fluorescência</td><td>Olympus</td><td>Modelo IX-70</td><td></td></tr><tr><td>Heparina</td><td>Inhepar - PiSA Farmaceutica</td><td>3660149</td><td>5000 UI/mL</td></tr><tr><td>Hepes</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H7006</td><td></td></tr><tr><td>Microesferas de Quimerismo CD66b da MACSprep</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-111-552</td><td></td></tr><tr><td>Ímã</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-102</td><td></td></tr><tr><td>Coluna de separação magnética</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>Microcentrífuga</td><td>Eppendorf</td><td>Modelo 5415C</td><td></td></tr><tr><td>Leitor de microplacas</td><td>BioTek Instruments</td><td>Sinergia de Modelos HT</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldeído</td><td>Sigma Aldrich</td><td>158127</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo IgG1 de camundongo PE anti-humano CD10</td><td>BioLegend</td><td>312203</td><td>0,05 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>Anticorpo IgG2a de camundongo anti-PE</td><td>BD Pharmingen</td><td>550868</td><td>Diluição 1/40</td></tr><tr><td>Anticorpo IgG1 do camundongo anti-humano PE/Cianano5</td><td>BioLegend</td><td>323013</td><td>0,25 & mu; g/mL</td></tr><tr><td>Phorbol 12-miristato 13-acetato (PMA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P8139</td><td></td></tr><tr><td>poli-L-Lisina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P2658</td><td></td></tr><tr><td>Centrífuga refrigerada</td><td>Eppendorf</td><td>Modelo 5702R</td><td></td></tr><tr><td>Meio de cultura de tecidos RPMI-1640</td><td>Gibco</td><td>23400-021</td><td></td></tr><tr><td>SYTOX Green</td><td>Molecular Probes, Inc.</td><td>S-7020</td><td></td></tr><tr><td>Pré-adolescente-20 & nbsp;</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P2287</td><td></td></tr><tr><td>Vectashield</td><td>Laboratórios Vector</td><td>H-1000</td><td></td></tr></tbody></table>

método rápido de microesferas magnéticas para purificação eficiente de neutrófilos de baixa densidade

Rapid Magnetic-microbead Method for Efficient Purification of Low-density Neutrophils

Os neutrófilos de baixa densidade (LDN) em indivíduos saudáveis representam cerca de 5% da PBMC (Figura 2A). O protocolo descrito aqui normalmente fornece LDN puro (&gt; 90%). As células também são recuperadas de forma eficiente (rendimento em torno de 98%) com alta viabilidade (&gt; 95%; Figura 2B). Para comparação, os LDN também foram purificados por classificação de células ativadas por fluorescência, conforme descrito anterio...

Método rápido de microesferas magnéticas para purificação eficiente de neutrófilos de baixa densidade

Neutrophils, important leukocytes of innate immunity, have traditionally been considered a homogeneous cell population. Nevertheless, recent evidence has ...

rapid-magnetic-microbead-method-for-efficient-purification-low

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Neutrófilos estão entre as primeiras células a chegar ao local da resposta imune inflamatória, e suas funções e mecanismos têm sido estudadas extensivamente in vitro. Demonstramos um nível de densidade gradiente método de separação para isolar neutrófilos humanos do sangue total usando a mídia de separação disponíveis comercialmente.

Isolamento de neutrófilos Protocolo

O vídeo explica uma maneira de purificar as células B por direcionamento imunomagnético e separação da suspensão de células mononucleares do sangue periférico. O método envolve a marcação de tipos de células indesejadas com anticorpos ou ligantes específicos (ligados a partículas magnéticas) direcionados a proteínas específicas da superfície celular, a serem esgotadas da suspensão celular heterogênea por separação magnética.

Seleção Imunomagnética Negativa: Um Método para Purificar Células B de Células Mononucleares do Sangue Periférico

Neste vídeo, descrevemos o procedimento para isolar neutrófilos de baixa densidade, ou LDNs, do fluido de lavagem peritoneal de um paciente humano pós-operatório. Os LDNs assim obtidos podem ser usados em outros experimentos a jusante para entender seu papel no crescimento e progressão do tumor.

Isolamento de neutrófilos de baixa densidade peritoneal: uma técnica para obter neutrófilos de baixa densidade a partir de fluido de lavagem peritoneal usando classificação de células ativadas por magnetismo

Descreve-se um protocolo para o isolamento e purificação de neutrófilos de medula óssea do rato por centrifugação de gradiente de densidade e de neutrófilos para rotulagem com corantes CellTracker. Isso representa um método simples, rápido, reprodutível e econômica para a obtenção de um grande número de neutrófilos para estudos funcionais a jusante ou de transferência e controle de experimentos adotivos.

Isolamento, purificação e Rotulagem de neutrófilos da medula óssea do rato de Estudos funcionais e Experimentos de transferência adotiva

Os neutrófilos desempenham um papel importante não apenas na defesa do hospedeiro contra microrganismos invasores, mas também estão envolvidos na vigilância imunológica das células tumorais. Aqui, descrevemos técnicas relacionadas ao isolamento de neutrófilos com propriedades antitumorais e métodos para monitorar a função de neutrófilos antitumorais in vitro e in vivo.

Isolamento e Caracterização de neutrófilos com propriedades anti-tumorais

Os neutrófilos são o tipo mais abundante de glóbulos brancos. O isolamento de neutrófilos do sangue humano pelo método de separação por gradiente de densidade e a diferenciação de células promielocíticas humanas (HL60) ao longo da via granulocítica são descritos aqui; testar seu papel na sensibilidade das células do linfoma aos agentes antilinfoma.

Isolamento de neutrófilos e análise para determinar seu papel na linfoma sensibilidade das células a agentes terapêuticos

Mutações no rico gene de leucina repetição quinase 2 (LRRK2) causam doença hereditária de Parkinson. Desenvolvemos um método fácil e robusto para avaliar a fosforilação controlada por LRRK2 de Rab10 em neutrófilos de sangue periféricos humanos. Isso pode ajudar a identificar indivíduos com aumento da atividade da via de quinase LRRK2.

Isolamento de neutrófilos de sangue periférico humano para interrogar o Caminho Associado lRRK2 Kinase de Parkinson avaliando rab10 fosforilação

Este protocolo detalha um método para o isolamento de neutrófilos de sangue inteiro, casacos de buffy ou membranas de leucemia, alcançando bom rendimento, alta pureza e ativação celular mínima. Utilizamos purificação de gradiente, sedimentação de glóbulos vermelhos (RBC) e lise RBC para obter uma preparação de neutrófilo de alta qualidade/pureza.

Isolamento de neutrófilos humanos de whole blood e buffy coats

Esta pesquisa descreve duas técnicas para isolar abundantes armadilhas extracelulares de neutrófilos (NETs) da medula óssea de ratos. Um método combina um kit comercial de isolamento de neutrófilos com centrifugação por gradiente de densidade, enquanto o outro emprega apenas centrifugação por gradiente de densidade. Ambas as abordagens produzem NETs funcionais superando as dos neutrófilos do sangue periférico.

Abordagem única para isolar neutrófilos de medula óssea de rato com capacidade comparável

Este protocolo detalha um método compatível com automação de alto rendimento para isolar células mononucleares do sangue periférico humano para biobancos e outros fins.

Isolando células mononucleares do sangue periférico humano de Buffy Coats por meio de separação de esferas imunomagnéticas de alto rendimento

Aqui, fornecemos uma abordagem confiável para isolar neutrófilos de baixa e normal densidade de sangue total usando isolamento magnético (seleção negativa) e meio de gradiente de densidade descontínuo. Ele garante o isolamento intocado de células de alta pureza (≥93%), facilitando a análise precisa a jusante das subpopulações de neutrófilos, cruciais para entender seus papéis na saúde e na doença.

O Isolamento e Caracterização de Neutrófilos de Baixa e Densidade Normal do Sangue Total

Aprenda um método rápido de microesferas magnéticas para purificar neutrófilos de baixa densidade do sangue periférico humano. Esta técnica eficiente utiliza gradiente de densidade e separação magnética para obter células puras e viáveis para estudos imunológicos.

Método rápido de microesferas magnéticas para purificação eficiente de neutrófilos de baixa densidade

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