Обработка лапок насекомых для флуоресцентной микроскопии: метод сохранения нервно-мышечных структур для визуализации

- Для начала погрузите обезболенных насекомых в 70% раствор этанола, чтобы уменьшить гидрофобность кутикулы. Затем промойте и пропитайте ткань фосфатно-солевым раствором, содержащим моющее средство, в течение не менее 30 минут, чтобы обеспечить проникновение в ткань во время фиксации.

Далее удалите голову и брюшную полость из грудной клетки. С помощью щипцов слегка надавите на контакт тазобедренно-грудной клетки и отсоедините ногу. Осторожно поместите ноги в ледяной 4% раствор параформальдегида на ночь, чтобы он проник в ткани. Параформальдегид фиксирует ткани путем сшивания белков.

Затем удалите фиксирующий раствор и несколько раз промойте ткань фосфатно-солевым моющим средством. Перед установкой поместите ножки в чистый или слегка разбавленный монтажный буфер как минимум на один день, чтобы обеспечить достаточно времени для проникновения буфера в ткани.

Наконец, установите ножки в каплю монтажной среды. Используйте распорку между предметным стеклом микроскопа и покровным стеклом, чтобы предотвратить повреждение образца, и закрепите крепление лаком для ногтей.

В следующем примере мы увидим рассечение, фиксацию и крепление ног Drosophila melanogaster.

- Начните с заполнения соответ