Точный и высокопроизводительный анализ роста бактерий с помощью считывателя микропластин

Начните с бактерий, сохранённых в глицероловом запасе, ранее выращенном до ранней экспоненциальной фазы для обеспечения равномерного физиологического состояния и воспроизводимого роста.

Добавьте среду роста и вихрь для равномерного восстановления бактерий.

Последовательно разбавлять суспензию с помощью свежих сред для получения диапазона исходной плотности клеток.

Загрузите образцы во внутренние скважины многоколодной пластины, оставляя крайние ямы заполненными пустыми материалами, чтобы минимизировать вариабельность, связанную с испарением.

Поставьте пластину в считыватель микропластин, настроенный для постоянного встряхивания и оптимальной температуры для роста бактерий.

По мере размножения бактерий оптическая плотность или передозировка культуры увеличивается.

Измеряйте перегрузку с фиксированными интервалами.

Вычтите начальные значения OD, полученные из пустых ям, чтобы скорректировать фоновое поглощение.

Затем вычислите скорость роста по последовательным значениям OD, измеряемых в определённые временные интервалы, что позволяет высокопроизводительную и точную количественную оценку динамики роста бактерий.

Для фиксации роста в реальном времени добавьте примерно 25 миллилитров M63 в стерилизованный реагентный резервуар. Затем добавьте 900 микролитров M63 в микротрубки в подготовку к серийному разбавлению. Затем добавьте 900 микролитров M63 в размораженный глицероловый бульон и вихрь.

Перенесите 100 микролитров 10-кратного разбавления в другую микротрубку, содержащую 900 микролитров M63 и вихрь. Повторяйте этот шаг, пока не достигнете нужного количества разбавлений. Теперь заполните колодцы на краю стерилизованной микропластины с плоским дном на 96 лунок 200 микролитрами M63, используя восьмиканальную пипетку.

Загрузите 200 микролитров каждого разбавлённого образца в микропластинчатые скважины согласно эталонной таблице. Чтобы избежать распределения слоёв из-за нагрева и эффективности посева, никогда не используйте скважины по краю микропластины для образцов, а загружайте один и тот же образец в несколько скважин в разных местах микропластины. Поставьте микропластину на 96 лунок на считыватель пластин.

Откройте «Читать сейчас» в диспетчере задач и выбирайте программу. Нажмите «Хорошо», чтобы начать измерение. Наконец, сохраните запись в виде нового экспериментального файла для анализа данных.