Визуализация окислительного стресса, вызванного патогенами, у C. elegans с использованием GFP-метированного SKN-1

Начните с двух пластин, содержащих червей C. elegans , которые экспрессируют зелёный флуоресцентный белок SKN-1 — транскрипционный фактор, локализованный в кишечной цитоплазме. Эти черви также содержат кишечные гранулы липофусцина с аутофлуоресценцией.

Одна пластина засеяна непатогенными бактериями в контрольной группе, другая — патогенными бактериями в качестве тестовой группы.

В тестовой группе перекись водорода, производимая патогеном, вызывает окислительный стресс, вызывая транслокацию SKN-1 в ядра кишечника.

В контрольной группе большая часть SKN-1 остаётся диффузно распределенной в цитоплазме.

Промыйте каждую пластину буфером и переложите червей в трубки.

Центрифуга, чтобы отделить червей и удалить буфер.

Добавьте среду с азидом натрия для анестезии.

Разместите червей на агарозных подушечках, разместите укрытия и наблюдайте под флуоресцентным микроскопом. Используйте автофлуоресценцию для визуализации ядерных границ.

Сильный ядерный сигнал SKN-1 в тесте относительно диффузного цитоплазматического сигнала в контролях указывает на перелокализацию ядра и подтверждает патогенный окислительный стресс.

С помощью пипетки добавьте примерно 100 личинок L4 на каждую пластину с семенами THY стре