Мышь стенки мочевого пузыря инъекций
12 июля 2011 г.
Мышь стенки мочевого пузыря инъекции полезный подход к orthotopically исследования стволовых клеток мочевого пузыря и рака биологии. Это деликатный метод микрохирургические могут быть освоены с тщательной технике и практике.
Общая цель данной процедуры заключается во введении клеток в определенные области стенки мочевого пузыря. Сначала выполняется разрез брюшной стенки для обнажения мочевого пузыря. Следующим этапом процедуры является интрамуральное введение скоса иглы.
Заключительным этапом процедуры является нажатие на plunger шприца для введения интересующих клеток в стенку мочевого пузыря. Успешная имплантация клеток характеризуется образованием четко локализованной пузырьковой области (bleb), которая не протекает и сохраняет стабильный размер. Основным преимуществом данного метода перед существующими способами, такими как трансуретральное введение клеток мышам, является возможность точно определить место имплантации клеток в мочевом пузыре.
Визуальная демонстрация введения в мышцу имеет решающее значение, так как освоить технику инъекции довольно сложно. Для успешного выполнения процедуры крайне важно знать правильный угол и точку введения иглы в мочевой пузырь. Выберите возраст, пол и линию мышей в соответствии с требованиями вашего эксперимента.
Для проведения процедуры используют мышей в возрасте от 8 до 12 недель. Сначала поверхность операционного стола очищают с помощью мыла и воды. Затем поверхность стола протирают салфетками sideswipes или антисептическими салфетками. Хирургические инструменты перед операцией следует стерилизовать в автоклаве.
Непосредственно перед использованием протрите инструменты 70% этанолом, а между отдельными операциями повторно стерилизуйте их в стерилизаторе с горячими шариками. Очистите шприц Hamilton объемом 100 µL с иглой 30G путем многократного всасывания абсолютного спирта, после чего промойте стерильным фосфатно-солевым буферным раствором. Поместите анестезированное животное в положение на спине на грелку, чтобы помочь поддерживать нормальную температуру тела.
Поддерживайте достаточный уровень анестезии, поместив нос животного в насадку с парами изофлурана. Затем удалите шерсть с кожи брюшной стенки с помощью машинки для стрижки. Используйте одноразовую стерильную хирургическую салфетку, чтобы закрыть область ануса и предотвратить фекальное загрязнение во время операции.
Накройте нижнюю часть живота второй хирургической салфеткой и сформируйте операционное окно. Стерилизуйте операционное поле, несколько раз обработав его раствором Betadine и спиртом, используя диссекционный микроскоп для увеличения. Выполните разрез в нижней части срединной линии живота с помощью ножниц.
Оказывайте легкое давление на брюшную полость, чтобы обнажить мочевой пузырь. Поскольку мочевой пузырь обычно заполнен частично или полностью, давление на живот позволит сместить другие органы и обеспечит выход мочевого пузыря через разрез. Если мочевой пузырь переполнен, приложите легкое давление вниз в области купола, чтобы частично декомпрессировать его.
Наберите в стерильный шприц Hamilton 50 µL раствора образца. Введите кончик иглы срезом вверх в стенку мочевого пузыря и введите раствор образца. При успешном введении образуется четко локализованная капля (bleb), из которой не вытекает жидкость и которая сохраняет стабильный размер.
После инъекции закройте разрез ранными зажимами. Дайте животному восстановиться на грелке. Данная процедура занимает от 10 до 15 минут при правильном выполнении.
Успех можно подтвердить с помощью гистологического анализа мочевого пузыря в определенные временные интервалы после инъекции.
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео
Обзор
В данной статье описывается микрохирургический метод введения клеток в стенку мочевого пузыря мыши, что облегчает изучение стволовых клеток мочевого пузыря и биологии рака. Этот метод обеспечивает точную локализацию имплантации клеток, что является значительным преимуществом по сравнению с традиционными методами.
Основные компоненты исследования
Область науки
- Нейробиология
- Клеточная биология
- Исследования рака
Теоретическая часть
- Понимание биологии мочевого пузыря имеет решающее значение для продвижения исследований рака.
- Современные методы имплантации клеток имеют ограничения в точности.
- Данная методика направлена на улучшение локализации инъецируемых клеток.
- Микрохирургические навыки необходимы для успешного применения метода.
Цель исследования
- Для введения клеток в определенные области стенки мочевого пузыря.
- Для расширения исследований стволовых клеток мочевого пузыря и биологии рака.
- Для обеспечения надежного метода имплантации клеток.
Используемые методы
- Разрез брюшной полости для обнажения мочевого пузыря.
- Интрамуральное введение иглы для инъекции клеток.
- Инъекция клеток с помощью шприца.
- Мониторинг формирования стабильной пузырьковой структуры (блеба) для подтверждения успешной имплантации.
Основные результаты
- Об успешной имплантации свидетельствует наличие локализованного стабильного пузырька (блеба).
- Данный метод позволяет осуществлять адресное размещение клеток в мочевом пузыре.
- Он демонстрирует преимущества перед методами трансуретральной инокуляции.
- Метод создает основу для дальнейших исследований биологии мочевого пузыря.
Заключение
- Микрохирургический метод эффективен для инъекции клеток в мочевой пузырь.
- Он открывает новые возможности для исследования стволовых клеток мочевого пузыря и рака.
- Для достижения успеха необходимы тщательная отработка техники и практика.
Часто задаваемые вопросы
Значимость для промышленности
Инъекция в стенку мочевого пузыря мыши позволяет осуществлять точное ортотопическое моделирование биологии мочевого пузыря, что способствует проведению механистических исследований в области стволовых клеток, гладких мышц и рака. Данный метод повышает прогностическую достоверность в системах, релевантных заболеваниям, обеспечивая возможность направленной доставки клеток и локального анализа тканей. Воспроизводимость и анатомическая специфичность делают этот метод критически важным инструментом для раннего поиска и разработки доклинических моделей в рамках исследований урологических заболеваний.
Стратегическое применение в биофармацевтических исследованиях и разработках
Ранние этапы поиска и валидация мишени
- Обеспечивает возможность прямого изучения путей и популяций клеток, специфичных для мочевого пузыря, in vivo.
- Способствует функциональной валидации мишеней, позволяя осуществлять контролируемую имплантацию и мониторинг клеток.
- Облегчает снижение механистических рисков за счет пространственно определенного экспериментального воздействия.
Скрининг и разработка анализа
- Позволяет подготавливать валидированные модели in vivo для последующего скрининга терапевтических кандидатов.
- Стандартизирует доставку клеток и анатомическое таргетирование, что повышает воспроизводимость исследований.
- Обеспечивает получение количественных данных, таких как формирование локализованной пузырьковой структуры (блеба) и гистологическое подтверждение.
Трансляционные и доклинические исследования
- Создает релевантные заболевания модели для поиска и валидации трансляционных биомаркеров.
- Обеспечивает преемственность между результатами этапа поиска и доклиническими исследованиями эффективности и безопасности.
- Поддерживает движение проекта вперед с учетом рисков, предоставляя достоверные данные in vivo о поведении клеток и реакции тканей.
Интеграция в конвейеры и рабочие процессы
Данный метод микрохирургического введения интегрируется в континуум от этапа поиска до доклинических исследований, позволяя проводить исследования in vivo на основе выдвинутых гипотез и поддерживая идентификацию перспективных соединений-лидеров при изучении заболеваний мочевого пузыря.
- Фундаментальная биология: способствует проверке гипотез и уточнению сигнальных путей в тканях мочевого пузыря.
- Скрининг: предоставляет воспроизводимую платформу для оценки потенциальных клеточных линий или воздействий.
- Аналитика: обеспечивает измеримые конечные точки, такие как стабильность пузырьков и гистологические результаты, для сравнительного анализа.
- Трансляционные исследования: соответствует задачам разработки биомаркеров и моделей заболеваний для доклинической валидации.
- Корпоративное повторное использование: предлагает стандартизированный, многократно используемый протокол для различных исследовательских программ, сфокусированных на изучении мочевого пузыря.
Операционное и корпоративное воздействие
- Научная ценность: повышает достоверность прогнозов и снижает неопределенность механизмов в исследованиях мочевого пузыря.
- Операционная ценность: способствует стандартизации, воспроизводимости и масштабируемости исследований.
- Стратегическая ценность: улучшает процесс принятия решений о продолжении или прекращении разработок (go/no-go) и эффективность использования капитала за счет обеспечения надежной валидации in vivo.
- Влияние на портфель: поддерживает приоритизацию с учетом рисков и развитие программ, нацеленных на лечение заболеваний мочевого пузыря.
Особенности реализации
- Требуется опыт в микрохирургии и глубокое знание анатомии для достижения стабильных результатов.
- Необходим доступ к стерильным хирургическим инструментам и инфраструктуре для проведения анестезии.
- Требуется стандартизация параметров инъекций и критериев отбора животных между исследовательскими группами.
- Метод может быть адаптирован для различных линий мышей и типов экспериментальных клеток в соответствии с целями исследования.
- Успех процедуры зависит от точности техники выполнения и подтверждения с помощью гистологического анализа.
