Моделирование колонизации сальника клетками рака яичников: метод ex vivo для установления колонизации млечными пятнами флуоресцентно меченых раковых клеток яичников в мышиных эксплантах сальника

Сальник, богатая жировой тканью в брюшной полости, состоит из жировых депо, которые обеспечивают подходящую микросреду для колонизации метастатических раковых клеток и образования вторичных опухолей. Чтобы изучить эту колонизацию ex vivo, начните с размещения проницаемой мембранной клеточной культуры внутри культуральной пластины.

Нанесите тканевый клей на внутреннюю область мембраны вставки. Поместите мышиный сальниковый эксплант на клей, чтобы обездвижить ткань. Аккуратно посейте суспензию меченых флуоресцентно меченных раковых клеток яичников поверх сальника.

Затем заполните стенки лунки подходящей средой для восполнения роста клеток и инкубируйте в течение желаемого времени. Ткань сальника содержит специализированные структуры, называемые молочными пятнами, которые представляют собой скопления иммунных клеток, упакованных вокруг сети кровеносных сосудов. Эти иммунные клетки выделяют определенные химические факторы, которые привлекают раковые клетки и способствуют их имплантации. Колонизированные раковые клетки пролиферируют, имитируя метастатические состояния.

Наконец, выбросьте израсходованный носитель. Наблюдайте за посевом с помощью флуоресцентного микроскопа для оценки колоний флуоресцентных раковых клеток в ткани сальника.

Выращивайте и препарируйте флуоресцентно помеченные клетки и ресуспендируйте в концентрации 2 миллиона клеток на миллилитр. Нанесите примерно 6 микролитров тканевого клея на мембрану питательного вкладыша и дайте ему высохнуть на воздухе. Затем дважды промойте мембрану стерильной водой, чтобы удалить излишки клея, прежде чем сушить мембраны на воздухе под ламинарным колпаком.

Аккуратно иссеките сальник и приложите его к мембране с клейким покрытием с помощью стерильных щипцов. Дав ткани прилипнуть к мембране в течение одной минуты, добавьте 500 микролитров клеточной суспензии поверх каждого сальника в каждую культуральную вставку.

Затем заполните область вокруг трансвеллерной камеры 2,5 миллилитрами среды DME/F-12. Инкубируйте сальник с клеточной суспензией в течение шести часов при температуре 37 градусов Цельсия в среде с 5% CO2. Осторожно выньте и промойте сальник примерно 10 миллилитрами PBS. Наконец, визуализируйте очаги флуоресцентных раковых клеток с помощью соответствующей системы флуоресцентной визуализации.

• Omentum – An adipose-rich tissue within the peritoneal cavity.
• Omental Tissue – Tissue providing a microenvironment for cancer cells.
• Ovarian Cancer – Cancer that seeds and proliferates on the omentum.
• Milky Spots – Structures that attract and support cancer cell implantation.
• Omental Metastasis – Secondary tumor colonization within the omental tissue.

• Omentum is a fat-rich depot providing a home for cancer cells (e.g., omental tissue).
• The omental tissue contains specialized structures known as milky spots (e.g., theory).
• Milky spots secrete chemicals, attracting and supporting cancer cells (e.g., processes).
• The seeded cancer cells proliferate, simulating metastatic conditions (e.g., experiment).

• What is the role of omentum and milky spots in ovarian cancer metastasis?
• What causes proliferation of cancer cells within the omental tissue?
• How do milky spots support cancer cell implantation?

• This research can contribute to new treatment strategies for ovarian cancer (e.g., technology).
• The findings can impact healthcare by improving understanding of metastasis (e.g., healthcare).
• The research could lead to improved quality of life for patients with ovarian cancer (e.g., sustainability).
• The research paves the way for advancement in the treatment of metastatic cancers (e.g., innovations).