Моделирование колонизации сальника клетками рака яичников: метод ex vivo для установления колонизации млечными пятнами флуоресцентно меченых раковых клеток яичников в мышиных эксплантах сальника

Сальник, богатая жировой тканью в брюшной полости, состоит из жировых депо, которые обеспечивают подходящую микросреду для колонизации метастатических раковых клеток и образования вторичных опухолей. Чтобы изучить эту колонизацию ex vivo, начните с размещения проницаемой мембранной клеточной культуры внутри культуральной пластины.

Нанесите тканевый клей на внутреннюю область мембраны вставки. Поместите мышиный сальниковый эксплант на клей, чтобы обездвижить ткань. Аккуратно посейте суспензию меченых флуоресцентно меченных раковых клеток яичников поверх сальника.

Затем заполните стенки лунки подходящей средой для восполнения роста клеток и инкубируйте в течение желаемого времени. Ткань сальника содержит специализированные структуры, называемые молочными пятнами, которые представляют собой скопления иммунных клеток, упакованных вокруг сети кровеносных сосудов. Эти иммунные клетки выделяют определенные химические факторы, которые привлекают раковые клетки и способствуют их имплантации. Колонизированные раковые клетки пролиферируют, имитируя метастатические состояния.

Наконец, выбросьте израсходованный носитель. Наблюдайте за посевом с помощью флуоресцентного микроскопа для оценки колоний флуоресцентных раковых клеток в ткани сальника.

Выращивайте и препарируйте флуоресцентно помеченные клетки и ресуспендируйте в концентрации 2 миллиона клеток на миллилитр. Нанесите примерно 6 микролитров тканевого клея на мембрану питательного вкладыша и дайте ему высохнуть на воздухе. Затем дважды промойте мембрану стерильной водой, чтобы удалить излишки клея, прежде чем сушить мембраны на воздухе под ламинарным колпаком.

Аккуратно иссеките сальник и приложите его к мембране с клейким покрытием с помощью стерильных щипцов. Дав ткани прилипнуть к мембране в течение одной минуты, добавьте 500 микролитров клеточной суспензии поверх каждого сальника в каждую культуральную вставку.

Затем заполните область вокруг трансвеллерной камеры 2,5 миллилитрами среды DME/F-12. Инкубируйте сальник с клеточной суспензией в течение шести часов при температуре 37 градусов Цельсия в среде с 5% CO2. Осторожно выньте и промойте сальник примерно 10 миллилитрами PBS. Наконец, визуализируйте очаги флуоресцентных раковых клеток с помощью соответствующей системы флуоресцентной визуализации.