Модель петли подвздошной кишки у мыши: хирургическая модель для изучения проницаемости кишечника у мышей

При патологических состояниях распад эпителиального и эндотелиального барьеров увеличивает проницаемость кишечника, в результате чего содержимое кишечника просачивается в окружающие сосуды и брюшную полость. Проницаемость кишечника может быть смоделирована с помощью модели подвздошной петли.

Для начала подготовьте мышь под наркозом в положении лежа на спине. Сделайте разрез по средней линии в области живота. Поместите стерильную ватную марлю, смоченную подходящим буфером, на операционную область, чтобы органы оставались увлажненными во время операции.

Обнажите подвздошную кишку — дистальную часть кишечника — и разложите ее по марле, чтобы обнажить брыжейку. Определите два участка лигирования в подвздошной кишке, которые расположены на соответствующем расстоянии друг от друга в брыжейке и лишены каких-либо критических кровеносных сосудов. Затем прокалывают брыжейку, чтобы добавить лигатуры на выявленных участках.

Затем рассеките подвздошную кишку, чтобы создать изолированную петлю подвздошной кишки с неповрежденным кровоснабжением и брыжеечной мембраной. После этого введите в контур подходящий буфер для промывки содержимого отходов.

Теперь перевяжите открытые концы подвздошной петли. С помощью шприца введите хемокин — хемотаксическую белковую суспензию — в петлю, заставляя ее надуваться. Вернуть органы в брюшную полость.

Зашить разрез. Дайте мыши восстановиться. В конце концов, молекулы хемокинов проходят через стенку подвздошной кишки в соседние кровеносные сосуды, вызывая воспаление и приток лейкоцитов.

После достижения хирургической плоскости анестезии начните с скрабирования шерсти средней линии живота спиртовыми тампонами, или марлевой губкой, смоченной на 70% этанолом. Не смачивайте широкий участок шерсти спиртом, чтобы не допустить переохлаждения. С помощью ножниц проведите лапаротомию по средней линии. Сделайте горизонтальный разрез посередине живота, и обнажите брюшину, стараясь не травмировать внутрибрюшные органы.

Положите предварительно разрезанную влажную ватную марлю на оголенную внутрибрюшную полость. Используйте влажные ватные тампоны для мобилизации и экстериоризации слепой кишки и осторожно положите ее на влажную ватную марлю. Затем мобилизуйте и аккуратно выведите подвздошную кишку наружу. Разверните не менее 6 сантиметров терминальной подвздошной кишки на влажную ватную марлю, не нарушая брыжеечные сосуды и кровоснабжение.

Постоянно поддерживайте открытые ткани во влажном состоянии с помощью теплого HBSS. Определите главную артерию, снабжающую подвздошную кишку, в брыжейке рядом с слепой кишкой. Затем найдите два участка лигирования в брыжейке, которые свободны от критических кровеносных сосудов. Крепко захватите терминальный отдел подвздошной кишки тупыми тканевыми щипцами и используйте щипцы с тонким кончиком для фенестрации брыжейки, избегая кровеносных сосудов.

Наложите шелковый шов на перфорацию и завяжите хирургический узел, чтобы создать первую лигацию. С помощью линейки отмерьте расстояние 4 сантиметра от первой лигатуры, а затем создайте вторую лигатуру. Аккуратно разрежьте рядом с каждой лигацией тонкими ножницами, чтобы изолировать 4-сантиметровую подвздошную петлю, сохраняя кровоснабжение и брыжеечную оболочку в целости и сохранности.

Аккуратно промойте содержимое сегмента петли подвздошной кишки теплым HBSS с помощью гибкой желтой питательной трубки, прикрепленной к 10-миллилитровому шприцу. Обязательно вымывайте содержимое просвета из брюшной полости, чтобы сохранить место операции в чистоте. Завяжите два срезанных конца промывшей подвздошной петли шелковым швом.

С помощью шприца объемом 1 миллилитр с иглой 30-го калибра медленно введите в просвет кишечника 250 микролитров реагента, такого как ФИТК-декстраны или хемокин. Подвздошная петля будет раздуваться, вызывая умеренное растяжение слизистой оболочки.

Закройте брюшную стенку с помощью иглодержателя, анатомических щипцов и нерассасывающихся шелковых швов 3.0 с помощью иглы обратной резки. После сушки животного для предотвращения переохлаждения поместите его в анестезиологическую камеру с регулируемой температурой на период инкубации.