Обнаружение аномальных прионных белков в тканях мозга с помощью иммуногистохимии

Возьмем слайд с неподвижным участком мозга млекопитающих, демонстрирующим неправильно свернутые агрегаты прионных белков.

Обработайте срез муравьиной кислотой, чтобы снизить инфекционность прионных агрегатов.

Обработайте кислотным буфером внутри гидратированной барокамеры. Высокая температура и кислый pH разрывают индуцированные фиксацией белковые сшивки, демаскируя антигенные эпитопы.

Погрузите в перекись водорода для инактивации эндогенной пероксидазы, предотвращая нежелательное фоновое окрашивание.

Поместите предметное стекло в накладку и добавьте буфер для поддержания увлажнения тканей.

Введите блокирующий раствор, предотвращающий связывание неспецифических антител.

Добавьте первичное антитело, специфичное для агрегатов прионов.

Удалите несвязанные молекулы антител. Введите биотинилированное вторичное антитело, которое связывается с первичным антителом.

Удалите несвязанные молекулы антител. Добавьте фермент биотинилированную пероксидазу в комплексе с авидином, который связывается с биотином на вторичном антителе.

Добавьте хромогенный субстрат, который пероксидаза окисляет в окрашенный продукт.

С помощью микроскопа понаблюдайте за окрашенными агрегатами.

Осторожно погрузите учас