Визуализация и количественная оценка белковых агрегатов в мозге генетически модифицированных дрозофил

Начнем с генетически модифицированного мозга дрозофилы. Эти мозги экспрессируют красный флуоресцентный мутантный белок в нейроне, который может распространяться на окружающую глиальную клетку, экспрессируя желтый флуоресцентный нормальный белок, вызывая их агрегацию.

Добавьте фиксирующий раствор, сохраняющий клеточную целостность.

Снимите фиксатор и промойте буфером.

Добавьте реагент против выцветания и инкубируйте, чтобы предотвратить затухание флуоресцентных сигналов.

Перенесите мозги на предметное стекло и удалите лишнюю жидкость.

Позвольте мозгу прилипнуть к слайду.

Используя небольшие кусочки покровного стекла в качестве распорок, положите на них покровный лист. Добавьте реагент против выцветания и запечатайте его.

Под конфокальным микроскопом можно получать изображения с использованием различных длин волн возбуждения для красной и желтой флуоресценции.

Используя программное обеспечение для анализа изображений, количественно определите агрегаты белков.

Колокализация красной и желтой флуоресценции указывает на распространение мутантных белков.

После того, как все мозги будут препарированы, перенесите трубку для сбора в нататор при комнатной температуре и покачивайте их около 5