Характеристика генетически модифицированных мезенхимальных стволовых клеток для применения в нейротерапии

Начнем с трансгенных мезенхимальных стволовых клеток мышей — мультипотентных клеток, полученных из костного мозга.

Клетки спроектированы таким образом, чтобы экспрессировать GFP и терапевтические нейротрофические факторы, которые поддерживают рост и выживание нейронов.

Промойте клетки буфером и зафиксируйте их, чтобы сохранить клеточную целостность.

Снова промойте буфером, затем добавьте раствор для проникновения в клеточные и ядерные мембраны и блокирования неспецифических сайтов связывания.

Введение первичных антител, нацеленных на белок-маркер пролиферации клеток, экспрессируемый исключительно в ядре делящихся клеток.

Промойте буфером, чтобы удалить несвязанные антитела.

Добавьте флуорофор-конъюгированные вторичные антитела, нацеленные на первичные антитела, и ДНК-связывающий краситель для противостояния ядрам.

Промойте буфером, чтобы удалить несвязанные реагенты.

Загрузите пластину в систему скрининга с высоким содержанием содержимого и сделайте снимки для обнаружения флуоресцентных сигналов.

Экспрессия маркера пролиферации клеток указывает на активное деление клеток, что свидетельствует о пригодности трансгенных клеток для применения в нейротерапии.

Для проведения анализа пролиферации