Оценка Мышиные функции артерий сопротивления с помощью давления Миография

Общей целью данного эксперимента является определение сосудистой реактивности резистентной артерии мышей in vitro в реальном времени в условиях, приближенных к физиологическим. Это достигается за счет монтажа небольшого сегмента сосуда на две микроканюли и поддержания в нем физиологического люминального давления. Затем сосуд сужают с помощью агониста альфа-1 рецептора фенилэфрина для изучения способности любого препарата расширять сосуд.

Воздействие на суженный сосуд ацетилхолином оценивает его способность расширяться в режиме реального времени с помощью эндотелий-зависимого механизма. Результаты показывают процентное изменение диаметра просвета в ответ на ацетилхолин и подтверждают, что дефицит SGC альфа 1 приводит к нарушению эндотелий-зависимой вазодилатации. Основное преимущество этого метода по сравнению с существующими методами, такими как проволочная мамография, заключается в том, что мамография давлением позволяет охарактеризовать мелкие микрососуды, которые более важны для поддержания гомеостаза артериального давления, чем более крупные проводящие сосуды.

Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области сердечно-сосудистых заболеваний, таких как гипертония, где макрорезистентные сосуды играют решающую роль. Начните с усыпления мыши пентобарбиталом. Теперь откройте брюшную полость и начните рассекать брыжеечную ткань.

Теперь определите брыжеечную артерию третьего порядка и изолируйте ее от соединительной и жировой ткани. Дифференциация артерий и вен на уровне микрососудов проблематична, когда в сосудах нет крови. Так что делать это у неповрежденного животного предпочтительнее.

Затем отрежьте отрезок брыжеечной артерии третьего порядка длиной два-три миллиметра и поместите его в посуду, содержащую кучи. Буфер PSS. Артериальный сегмент не должен содержать никаких ветвлений.

Подготовьте миокамеру, аккуратно заполнив канюли через входные и выпускные клапаны кучей раствора PSS Из шприца объемом 10 миллилитров имейте в виду, что чрезмерное давление может повредить хрупкий датчик, подключенный к канюлям. Плотно заполнив канюли, закройте оба клапана. Теперь перенесите изолированный артериальный сегмент в камеру и установите один конец сосуда на правую канюлю.

Аккуратно перевязав его тонкой нитью капронового нити, с помощью шприца промойте и заполните сосуд горчатым раствором через входной клапан. Теперь установите другой конец сосуда на левую канюлю и закрепите канюлю на сосуде с помощью нейлонового шва. Заполните камеру до 10 миллилитров раствора с горкой.

Проверьте наличие утечки, осторожно протолкнув кучный раствор через впускной клапан с помощью шприца. Теперь поместите камеру под видеокамеру. Запустите подачу кислорода и нагрейте камеру до 37 градусов Цельсия при этом впускной клапан закрыт, подключенный к одной трубке из первого кучного резервуара раствора.

Пропустите через пробирку любой пузырь и раствор до тех пор, пока в пробирке не останется пузырьков. Затем откройте клапан. Подсоедините к левому клапану камеры с трубкой два.

Исходя из регулятора давления, убедитесь, что во всей системе нет пузырьков или утечек. Перейдите в меню давления на панели интерфейса myo или в программном обеспечении и включите насос, одновременно отключая поток. Откройте программу и нажмите кнопку «Собрать».

Теперь возможен мониторинг и анализ просвета сосуда, диаметра сосуда и толщины стенок. Чтобы постепенно повышать межпросветное давление, выберите давление P one и введите последовательность восходящего давления. Значения от пяти до 60 миллиметров ртутных сосудов, иногда закручиваются или закручиваются по мере увеличения давления, поэтому регулируйте натяжение или деформацию соответственно с помощью вертикального или продольного микропозиционера.

Как только давление достигнет 60 миллиметров, а температура ванны достигнет 37 градусов по Цельсию, уравновесьте сосуд в течение как минимум 45 минут и до одного часа в период уравновешивания. Смените раствор ванны один раз с предварительно прогретыми кучами. Теперь, когда артериальный отдел сбалансирован, нанесите 10 миллилитров деполяризующего раствора хлорида калия при температуре 37 градусов Цельсия.

Гладкая мускулатура полностью деполяризуется и достигнет максимальной суженности. После получения стойкой перетяжки промойте ванну раствором горчатого раствора три раза с интервалом в 10 минут. Теперь проверьте жизнеспособность сосуда и целостность эндотелия.

Во-первых, предварительно сужите сосуд, добавив фенилэфрин, чтобы снизить отрицательные пять молей на литр. Когда получена стабильная констрикция, проводят кумулятивную кривую реакции на вазодилатацию путем последовательного добавления возрастающих доз ацетилхолина от 10 до отрицательных, от девяти до 10 до отрицательных пяти молей на литр после последней дозы ацетилхолина. Промойте препарат горками три раза с интервалом в 10 минут.

Теперь определите диаметр пассивного просвета, применив ПСС без кальция, содержащий два миллимоля EGTA на литр по зарегистрированным трассам. Измерьте диаметр просвета для каждой реакции дозы, по которому будут рассчитываться все параметры. Выразите реакцию релаксации ацетилхолина в виде сравнения между лечением агонистом и буфером без кальция с точки зрения того, насколько каждый из них изменил диаметр просвета из-за сужения, вызванного фенилэфрином.

С помощью миографии государственного давления изучали сосудистую релаксацию в ответ на ацетилхолин в брыжеечных артериях, выделенных у мышей с нокаутом дикого типа и SGC альфа один на фоне S six и black six и предварительно суженных фенилэфрином. Дефицит SGC альфа-1 был связан со снижением способности ацетилхолина вызывать сосудистую релаксацию независимо от генетического фона исследуемых мышей. Тем не менее, эндотелий-зависимая релаксация SGC Alpha one null мышей была более заметно нарушена на фоне S-6, чем на фоне черной шестерки.

В совокупности эти результаты свидетельствуют о том, что сниженная чувствительность сосудистой сети к эндотелиально-зависимой релаксации может способствовать развитию специфической гипертензии у мышей с нокаутом SGC Alpha. После освоения этой техники ее можно выполнить за один или два часа, если она выполняется правильно. В дополнение к этой процедуре, другие методы, такие как конфокальная микроскопия, могут быть выполнены одновременно на кровеносных сосудах жизни. Это, например, позволит измерить внутриклеточные концентрации железа, что может помочь определить основные сигнальные механизмы.