June 7th, 2015
Супрамолекулярные hydrogelators, основанные на уреидосоединение-пиримидинонов позволяют полностью контролировать макроскопических свойств геля и поведения переключения золь-гель, используя рН. Здесь мы приводим протокол для разработки и инъекционных такой надмолекулярную hydrogelator через систему доставки катетера для локальной доставки непосредственно в соответствующих областях в сердце свиньи.
Общая цель этой процедуры состоит в том, чтобы свести к минимуму инвазивное введение надмолекулярного гидрогеля с лекарственным препаратом в сердце инфарктированной свиньи с помощью длинного гибкого катетера. Это достигается путем предварительного приготовления рецептуры из гидрогеля, а затем нужного препарата. Вторым шагом является исследование свойств гидрогеля и скорости высвобождения препарата в условиях in vitro.
Затем, через четыре недели после инфаркта миокарда, создается электромеханическая карта левого желудочка свиньи с использованием точек данных, взятых с поверхности эндокарда. Затем так называемый гибернирующий миокард нацелен на местные инъекции с гидрогелем, наполненным препаратом. Эта удобная формула и процедура применения могут привести к открытию новых методов лечения инфаркта миокарда и так далее.
Основным преимуществом этой методики перед существующими чрескожными подходами, такими как внутрикоронарный выпот, являются, во-первых, применение гидрогеля в катетере, а во-вторых, возможность планирования лечения, что позволяет направлять катетер в интересующую область. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в изучении и лечении инфаркта миокарда, такие как потенциальные преимущества введения механически поддерживающего материала и эффективность устойчивой местной доставки лекарств. Применение этого метода распространяется на нашу терапию и инфаркт миокарда, поскольку электромеханическое картирование позволяет идентифицировать область инфаркта, а последующее направленное сайт-специфическое введение гидрогеля обеспечивает местную доставку лекарств.
В целом, люди знали, что этот метод будет сложным, потому что он требует практических навыков с тонкими движениями катетера при контроле параметров стабильности. Визуальная демонстрация данного метода имеет решающее значение, так как оба препарата содержат IDE гели. Антиинъекции через катетер являются сложными процедурами, которые трудно выполнить без опыта
.Начните с растворения 100 мг гидрогеля, затем в 900 микролитрах PBS при pH 11,7. В случае, если гидрогели разработаны для инъекций животным, все этапы следует выполнять в перчатках. Затем размешайте гидрогель в PBS при температуре 70 градусов Цельсия в течение часа.
Как только раствор остынет, проверьте pH. Должно быть около девяти. Раствор хорош в течение нескольких дней.
Теперь внеситепипеткой в раствор интересующий препарат или молекулу и дайте ему помешать в течение 10 минут на случай, если гидрогель будет вводиться животному. Завершите подготовку путем стерилизации раствора ультрафиолетом в течение часа. В текстовом протоколе рассматривается, как гидрогель может быть проанализирован.
Во-первых, подготовьте пластиковый подвешенный вкладыш для клеточных культур для 24-луночного планшета, накрыв его дно отдушиной для предотвращения утечки. Затем переложите во вкладыш 100 микролитров приготовленного вязкого раствора, и сразу же добавьте 1,4 микролитра одной молярной соляной кислоты. pH упадет до нейтрального значения и через 30 минут гидрогель затвердеет.
Теперь снимите пара-пленку и поместите вкладыши в луночную пластину, а при 800 микролитрах PBS при pH 7,4 загрузите пустые лунки PBS и запечатайте пластину параформом для уменьшения испарения. Затем дайте пластинам инкубироваться с легким помешиванием при температуре 37 градусов Цельсия. Периодическое обновление PBS и анализ удаленных PBS на наличие высвобождающихся соединений путем повышения гидрогелевой эрозии и высвобождения препарата.
Демонстрировать процедуру будет доктор Тон из Уриха, где он работает интервенционным кардиологом. Через четыре недели после индукции инфаркта миокарда спланируйте процедуру электромеханического картирования и настройте систему в катетеризационной лаборатории. Сначала поместите внешний референсный пластырь на спину анестезируемой свиньи, затем обеспечьте сосудистый доступ через бедренную артерию в соответствии со стандартным протоколом.
Для построения электромеханической карты эндокардиальной поверхности ЛЖ используют источник энергии со сверхнизким магнитным полем и катетер с сенсорным наконечником. Затем с помощью силового инжектора можно получить биплоскую ангиограмму левого желудочка в правой передней косой проекции 25 градусов и левой передней косой проекции 40 градусов. Используйте эти представления для оценки размера lv.
Теперь давайте животному 75 единиц на килограмм гепарина. Затем введите французский картирующий катетер номер восемь под рентгеноскопическим контролем в левый желудочек через нисходящую аорту, дугу аорты и аортальный клапан. Катетер может иметь кривую D или F.
Затем ориентируйте кончик катетера на верхушку левого желудочка. Для получения первых данных продолжайте сбор данных о тракте оттока, боковых и задних точках для формирования 3D-силуэта, определяющего границы желудочка. Затем проведите картирующий катетер над эндокардом и последовательно.
Узнайте местоположение кончика, пока он соприкасается с эндокардом. В конечном итоге, соберите данные со всех сегментов эндокарда. Затем удалите картирующий катетер с помощью полученных данных.
Определите целевую область. Это место, где электрическая активность близка к норме, а механическое движение нарушено. Так называемый гибернирующий миокард для внутримиокардальной инъекции.
Планируйте использовать инъекционный катетер, состоящий из иглы 27 калибра и просвета ядра во французском катетере номер восемь для подачи определенного количества. Лотосируйте шприц примерно одним миллилитром раствора гидрогеля и поместите его в шприцевой насос так, чтобы стенка миокарда не была проколота иглой. Корректировка производится в соответствии с минимальной толщиной стенки желудочка, измеренной на недавней эхокардиограмме.
Отрегулируйте удлинитель иглы на ноль градусов и на 90 градусов. Затем заполните мертвое пространство в системе раствором гидрогеля. Затем поместите наконечник инъекционного катетера поперек аортального клапана в целевую область, чтобы выполнить первые критерии инъекции.
Это перпендикулярность катетера к стене ЛЖ. Во-вторых, он должен обладать превосходной стабильностью петли, рассчитанной системой EMM. В-третьих, целевая область должна иметь базовое напряжение не менее 6,9 милливольт.
Если эти критерии соблюдены, то продвигают иглу в миокард. Теперь рассмотрим четвертый критерий. Должно произойти преждевременное сокращение левого желудочка.
При соблюдении всех критериев вводите от 0,1 до 0,3 миллилитров гидрогеля с постоянной скоростью. Повторите инъекцию в 6-10 различных положениях, которые расположены как можно более диффузно, чтобы гидрогель функционировал как система доставки лекарств. Эрозия должна происходить постепенно, высвобождение небольшого препарата пирфенидона и флуоресцентного белка, и рубина два были изучены.
In vitro небольшое лекарство высвобождается в течение дня, в то время как более крупные молекулы, такие как М-рубин, выделяются в течение недели. Не было видимого взрывного высвобождения крупных молекул для определения местоположения целевой области для инъекции препарата. Для создания реконструкции левого желудочка было использовано 3D-картирование миокарда в режиме реального времени.
Он непрерывно отображается в виде потенциалов напряжения на градуированной цветовой шкале, после чего он настраивается до выбранного порога. Функция локального линейного укорочения или LLS количественно определяет региональное смещение стенки путем получения среднего изменения расстояния между участком образца и соседними точками в систоле и конце диастолы. Затем эти значения рассчитываются для каждого сегмента и отображаются на полярной карте.
Инфарктные участки характеризуются нарушенной механической чувствительностью или имеют значение LLS ниже 4%, а также характеризуются аномальными или низкими униполярными потенциалами, которые составляют менее шести милливольт. Важно правильно спланировать его и иметь команду опытных людей, следующих этой процедуре. Вариации лечения могут быть реализованы для ответа на дополнительные вопросы, такие как оптимальная формула гидрогеля, желаемая скорость высвобождения лекарства и эффективность различных видов лекарств.
После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее представление о том, как составить рецептуру супермолекулярного гидрогеля, а также как тщательно планировать и выполнять процедуры электромеханического картирования и инъекции в миокард. Не забывайте, что работа с лабораторными животными, такими как свиньи, требует одобрения экспериментального комитета и должна выполняться в соответствии с местными правилами благосостояния.
В данной статье представлен протокол для минимально инвазивного введения супрамолекулярного гидрогелевого материала, заряженного лекарством, в инфарктированное сердце свинки с помощью системы катетерной доставки. Метод позволяет контролировать локальную доставку и имеет потенциальные возможности для новых методов терапии при лечении инфаркта миокарда.