Простой метод Автоматизированная твердофазной экстракции водных образцов для анализа иммунологических малых загрязнителях

Общая цель данного метода подготовки проб заключается в предварительном концентрировании малых органических загрязнителей из проб воды удобным, экономически эффективным и автоматизированным способом. Этот метод может заменить стандартные процессы ТФЭ (твердофазной экстракции) при изучении загрязнения проб воды с использованием методов иммунодетекции, таких как иммуноанализ в планшетах или биосенсоры. Основными преимуществами данной методики являются автоматизация процедуры ТФЭ, а также малые габариты и низкая стоимость оборудования по сравнению с традиционными подходами.

Кроме того, эффективность процесса обогащения соответствует требованиям анализа иммунохимических тестов как с точки зрения низкого содержания растворителя, так и с точки зрения эффективности предварительного концентрирования. Сначала профильтруйте 100 мл пробы воды через фильтр с размером пор 0,2 мкм. Поместите отфильтрованный образец в стеклянный флакон с резьбой GL 45.

Приготовьте 300 µL элюента, разбавив метанол деионизированной водой до 50% по объему в плотно закрывающейся пробирке. Затем приготовьте суспензию частиц сорбента на основе октадецилсилика с концентрацией 20 mg/mL, добавив 1 600 µL метанола, а затем 400 µL деионизированной воды к 40 mg обращенно-фазового сорбента в стеклянном флаконе. Плотно закройте крышку и перемешайте содержимое с помощью вортекс-миксера.

Поместите нейлоновую мембрану с размером пор 11 micrometers на двойной слой безворсовой салфетки. С помощью просечки диаметром 3 millimeter вырежьте в мембране два небольших кружка. Затем захватите один из маленьких кружков мембраны плоскогубным фильтрующим пинцетом и поместите его с одной стороны колонки.

После этого прикрутите соединитель с плоским дном к трубке и плотно затяните. Затем на корпусе колонки нарисуйте стрелку, указывающую в сторону конца, где была размещена мембрана. На этом этапе закрепите колонку в держателе так, чтобы стрелка была направлена вниз.

Присоедините пустой одноразовый шприц объемом 10 миллилитров к концу трубки колонки с помощью нижних фиксирующих соединителей. Перемешайте суспензию сорбента на вортексном миксере и быстро внесите 100 микролитров раствора в центр колонки с помощью пипетки. Во время инъекции осторожно оттягивайте раствор через мембрану, используя шприц другой рукой.

Подготовка колонки для ТФЭ (твердофазной экстракции) имеет очень важное значение. Необходимо обеспечить надлежащее аспирирование раствора через мембрану с помощью шприца во время введения суспензии частиц в колонку. В противном случае частицы не будут упакованы плотно.

Повторите предыдущую процедуру еще дважды, перемешивая исходную суспензию между всеми этапами пипетирования, чтобы обеспечить гомогенное распределение частиц в растворе. После того как вся суспензия будет нанесена и высушена путем аспирации шприцем, удерживая шприц в этом положении, наложите сверху вторую нейлоновую мембрану с помощью пинцета другой рукой. Затем закрутите второй коннектор с трубкой и утилизируйте шприц.

На этом этапе закрепите колонку на устройстве SPE с помощью нижних фиксирующих соединителей. Подсоедините к устройству флакон с образцом, завинтив на нем прилагаемую защитную крышку GL 45. Залейте 200 µL элюента в резервуар для элюента.

Затем залейте 800 µL деионизированной воды в резервуар для разведения. Убедитесь, что регулятор давления находится в закрытом положении, повернув его против часовой стрелки до упора. После включения прототипа введите значения 580 для pset и 30 для delta pset.

Чтобы отрегулировать регулятор давления, запустите насос. Затем вручную поворачивайте регулятор давления, пока значение preg не станет немного меньше 320 millibar, но будет близко к этому значению. После остановки насоса начните процедуру SPE, нажав «start» в углу автоматического режима.

После завершения процедуры ТФЭ плотно закройте флакон с образцом и храните его при температуре от четырех до пяти градусов Цельсия в темноте до проведения анализа методом ELISA. Для очистки системы приготовьте в стеклянном флаконе с резьбой GL 45 10 миллилитров 70-процентного по объему раствора метанола. Отсоедините колонку для ТФЭ и заглушите трубки с помощью соединителей.

В автоматическом режиме выберите файл очистки (Cleaning) и запустите его с теми же настройками давления, которые ранее использовались для pset, delta pset и preg. Воспроизводимость упаковки сорбента оценивали путем высушивания и взвешивания дозированного сорбента в стеклянных флаконах. Воспроизводимость времени ввода анализирули для образцов объемом 100 milliliter.

Концентрации исходных и предварительно сконцентрированных проб с добавками определяли с помощью коммерческого набора ИФА на 17-бета-эстрадиол. Из калибровочных кривых видно, что доля метанола в обогащенном образце не влияет на чувствительность иммуноанализа. Степень извлечения для деионизированной воды и искусственной морской воды составила 128 ± 22% и 107 ± 6% соответственно.

При должном навыке подготовка колонки для ТФЭ может занять менее пяти минут, если она выполняется правильно. Вся процедура ТФЭ может быть завершена менее чем за один час. После разработки этот метод открыл исследователям в области экологических наук путь к созданию методов иммунодетекции для мониторинга малых органических загрязнителей.

После просмотра этого видео вы должны получить четкое представление о том, как подготавливать пробы воды с помощью нашего экономичного автоматизированного прибора для анализа загрязняющих веществ методом иммуноанализа. Не забывайте, что работа с органическими загрязнителями и растворителями может быть опасной, поэтому при выполнении данной процедуры необходимо всегда соблюдать меры предосторожности, такие как использование соответствующих перчаток и защитных очков.