Простой метод Автоматизированная твердофазной экстракции водных образцов для анализа иммунологических малых загрязнителях

Общая цель этого метода пробоподготовки заключается в предварительном концентрировании небольших органических загрязнителей из проб воды удобным для пользователя, экономичным и автоматизированным способом. Этот метод может заменить стандартные процессы SPE при изучении загрязнения проб воды с помощью иммунодетектирующих методов, таких как иммунологические анализы или биосенсоры. Основные преимущества этого метода заключаются в том, что процедура SPE автоматизирована, а занимаемая площадь и стоимость инструментов невелики по сравнению с традиционными подходами.

Кроме того, показатели процесса обогащения соответствуют требованиям анализа иммунологических анализов как с точки зрения низкого содержания растворителя, так и эффективности предварительного концентрирования. Сначала отфильтруйте 100-миллиметровую пробу воды с помощью фильтра с нулевым размером два микрометра. Поместите отфильтрованный образец в стеклянную бутылку с резьбой GL 45

Приготовьте 300 микролитров элюента, разбавив метанол в деионизированной воде, до 50-процентного объема в плотной пробирке. Затем приготовьте суспензию частиц сорбента октадецилкремнезема в дозе 20 миллиграммов на миллилитр, добавив 1 600 микролитров метанола с последующим добавлением 400 микролитров деионизированной воды к 40 миллиграммам сорбента с обращенной фазой в стеклянную мерку. Плотно закройте крышку, и перемешайте вихревым миксером.

Поместите нейлоновую мембрану с размером пор 11 микрометров на двойной слой антипылевой ткани. Вырежьте две небольшие детали в мембране пробойником диаметром три миллиметра. Затем возьмитесь за маленькую мембрану с помощью фильтрующих щипцов с плоским концом и поместите ее с одной стороны колонки.

После этого прикрутите коннектор с плоским дном к трубке и затяните. Затем нарисуйте на корпусе столбика стрелку, указывающую в сторону конца, где была размещена мембрана. В этот момент закрепите столбик на держателе стрелкой, направленной вниз.

Прикрепите пустой одноразовый шприц объемом 10 миллилитров к концу трубки колонки с помощью нижних разъемов замка. Взбалтывают суспензию сорбента вихревым смесителем, и быстро пипетируют по 100 микролитров в центр колонки. Во время инъекции осторожно отсасывайте пипетированный раствор через мембрану, используя шприц другой рукой.

Подготовка колонны SPE очень важна. Вы должны убедиться, что правильно отсасываете раствор через мембрану с помощью шприца во время введения суспензии частиц в колонку. В противном случае частицы не будут упаковываться плотно.

Повторите предыдущий процесс еще два раза, перемешивая суспензию заготовки между всеми этапами пипетирования, чтобы обеспечить однородную суспензию частиц в растворе. После того, как вся суспензия будет загружена и высушена путем аспирации с помощью шприца, удерживайте шприц на месте и поместите вторую нейлоновую мембрану сверху, используя щипцы другой рукой. Затем закрутите второй разъем с трубкой и утилизируйте шприц.

На этом этапе затяните колонку на устройстве SPE с помощью нижних разъемов блокировки. Подсоедините флакон с образцом к прибору, прикрутив к нему прилагаемый предохранительный колпачок GL 45. Загрузите 200 микролитров элюента в резервуар с элюентом.

Затем загрузите 800 микролитров деионизированной воды в резервуар для разбавления. Убедитесь, что регулятор давления находится в закрытом положении, повернув его в обратном направлении по часовой стрелке до тех пор, пока дальнейшее движение не станет возможным. После включения прототипа введите значения 580 для pset и 30 для delta pset.

Чтобы отрегулировать регулятор давления, запустите насос. Затем вручную поворачивайте регулятор давления до тех пор, пока значение, считываемое для прега, не станет меньше, но близко к 320 миллибар. После остановки насоса запустите процедуру SPE, нажав кнопку «Пуск» в углу автоматического режима.

Как только процедура SPE будет завершена, закройте небольшой образец и храните при температуре от четырех до пяти градусов Цельсия в темноте, пока не будет проведен анализ методом иммуноферментного анализа. Для очистки системы приготовьте 10 миллилитровый раствор 70-процентного метанола по объему в стеклянной бутылке с резьбой GL 45. Отсоедините колонку SPE от сети и соедините трубку разъемами.

В автоматическом режиме выберите файл Очистка и запустите его с теми же настройками давления, которые ранее использовались для pset, delta pset и preg. Воспроизводимость упаковки сорбента оценивали путем сушки и взвешивания пипетированного сорбента в стеклянных колотах. Воспроизводимость времени введения была проверена на образцах объемом 100 миллилитров.

Концентрации исходных и предварительно концентрированных спайковых образцов определяли с помощью коммерческого набора ИФА с 17 бета-эстрадиолом. Из калибровочных кривых видно, что соотношение метанола в обогащенном образце не влияет на чувствительность иммунологического анализа. Извлечение 128, плюс-минус 22 процента, и 107 плюс-минус шесть процентов было рассчитано для деионизированной воды и искусственной морской воды соответственно.

После освоения подготовка колонки SPE может быть выполнена менее чем за пять минут, если она выполнена правильно. Вся процедура SPE может быть завершена менее чем за один час. После своего развития этот метод проложил путь исследователям в области наук об окружающей среде к изучению разработки иммунодетектирующих методов для мониторинга малых органических загрязнителей.

После просмотра этого видео у вас должно сложиться хорошее представление о том, как готовить пробы воды с помощью нашего экономичного автоматизированного прибора для анализа загрязняющих веществ с помощью иммунологических анализов. Не забывайте, что работа с органическими загрязнителями и растворителями может быть опасной, поэтому при выполнении этого процесса всегда следует соблюдать меры предосторожности, такие как ношение соответствующих перчаток и защитных очков.