Твердофазный микроэкстракционный отбор проб: метод извлечения проб из тканей трансплантатов на основе зондов

Длительное хранение трансплантата органа влияет на его метаболический профиль, который является показателем функции органа и отторжения органа на ранней стадии.

Чтобы выделить эти метаболиты, начните с использования тонкого твердофазного микроэкстракционного зонда или зонда SPME, покрытого биосовместимым сорбентом. Погрузите зонд в водно-спиртовой чистящий раствор, чтобы увлажнить покрытый сорбент и удалить связанные загрязнения.

Взбалтывайте щуп, чтобы удалить загрязнения. Далее поместите щуп в раствор для активации и снова перемешайте. Химические вещества в растворе активации изменяют поверхность зонда, повышая его адсорбционный потенциал. Промойте зонд водой и простерилизуйте его, чтобы удалить микробные загрязнения.

Теперь вставьте стерильный и активированный зонд в трансплантат органа таким образом, чтобы тканевый матрикс покрывал всю поверхность сорбента. Материал сорбента притягивает свободные полярные и неполярные метаболиты из трансплантата, обеспечивая адсорбцию на его поверхности. Втяните зонд и промойте его водой, чтобы удалить остатки ткани.

Затем поместите зонд в десорбционный раствор, который взаимодействует с адсорбированными метаболитами. Взбалтывайте зонд для отделения и растворения захваченных метаболитов в десорбционном растворе. Наконец, извлеките зонд и обработайте полученную смесь метаболитов для последующего анализа.

Начните с приготовления смеси для предварительного кондиционирования, состоящей из метанола 1-1 и воды. Нанесите пипеткой по 1 миллилитру раствора в каждый стеклянный флакон объемом 2 миллилитра и поместите по одному щупу в каждый флакон. Перемешивайте флаконы на вихревой мешалке при 1 200 об/мин в течение 1 часа. Затем промыть зонды водой класса LC-MS и простерилизовать их в соответствии со стандартным протоколом хирургической стерилизации или в отделении стерильной обработки.

Когда образец будет готов, откройте стерильную упаковку и вставьте два зонда непосредственно в кору головного мозга почек на 10 минут на каждый временной момент, убедившись, что вся длина покрытия покрыта тканевым матриксом. Обязательно отслеживайте время отбора проб для каждого зонда. Втяните зонд, вытащив его из ткани, и немедленно промойте покрытие водой класса LC-MS, чтобы удалить оставшуюся кровь, обязательно смыв ее с места операции.

Чтобы транспортировать зонды, поместите их в отдельные флаконы и закройте. Затем поместите флаконы в коробку, наполненную сухим льдом или жидким азотом. Храните образцы при температуре минус 80 градусов Цельсия или немедленно приступайте к десорбции.

Приготовьте десорбционный раствор, состоящий из ацетонитрила и воды, для метаболомного анализа и раствор, состоящий из изопропанола и метанола, для липидомного анализа. Добавьте 100 микролитров раствора во вкладыши в 2-миллилитровые флаконы с маркировкой и поместите по одному щупу в каждый флакон. Взбалтывайте флаконы при 1 200 об/мин в течение 2 часов. Затем извлеките щупы из флаконов и приступайте к анализу ЖХ-МС.