Модификация и Функционализация гуанидина группы, изготовленные на предвестников

Общая цель этой процедуры заключается в обеспечении удобного синтетического доступа к функционализированным пептидам гуанидина. Этот метод может помочь ответить на ключевые вопросы в области химии мышечных пептидов, такие как разработка интегриновых лигандов или лигандов GPCR. Основное преимущество этого метода заключается в том, что он обеспечивает легкий синтетический доступ к функционализированным гуанидинам, полностью совместимым с SPPS.

Эта технология будет особенно ценна для тактильных молекул, потому что функциональные группы, которые модифицируются, как правило, являются разрушающимися биомолекулами. В нашем случае мы стремимся к молекулам, которые могут быть использованы для молекулярной визуализации различных свойств отдельных видов рака и для их специфического лечения; Важный вопрос для персонализированной медицины. Чтобы начать эту конкретную процедуру, добавьте один грамм бок-пиразола карбоксамидайдина и один грамм PPh3 в 50-миллилитровую колбу с круглым дном.

Затем добавьте 10 миллилитров высушенного ТГФ в 50-миллилитровую колбу с круглым дном в инертной атмосфере через резиновую перегородку. С помощью шприца добавьте 194 микролитра сухого метанола. Размешайте раствор при комнатной температуре.

С помощью шприца добавьте приготовленный раствор диизопропилазодикарбоксилата в ТГФ по каплям в течение 15 минут. Затем дайте раствору помешать в течение двух часов при комнатной температуре. С помощью ротационного испарителя удалите растворитель под пониженным давлением.

После этого растворите сырой продукт в одном миллилитре ДКМ. Далее дайте вспышке колонку со 100 граммами диоксида кремния, в 10% этилацетата в растворе пентана. Загрузите растворенный сырой продукт в колонну и добавьте растворитель под давлением.

Соберите, определите и объедините дроби, как указано в текстовом протоколе. Затем с помощью ротационного испарителя выпарить растворитель под пониженным давлением для получения нужного соединения в виде желтого вязкого масла. Сначала добавьте один грамм бок-пиразола карбоксамидина, один грамм PPH3 и 0,9 грамма Dde-6-аминогексанола в 50-литровую колбу с круглым дном.

Затем добавьте 10 миллилитров сухого ТГФ в инертной атмосфере с помощью резиновой перегородки. После этого растворите исходные материалы при комнатной температуре. С помощью шприца добавьте приготовленный раствор диизопропилазодикарбоксилата в ТГФ по каплям в течение 15 минут.

Размешивайте раствор в течение двух часов при комнатной температуре. После этого используйте роторный испаритель для удаления растворителя под пониженным давлением. Растворите сырой продукт в 1 миллилитре DCM.

Далее загрузите флэш-колонку со 100 граммами диоксида кремния в два к одному растворе пентана и этилацетата. Загрузите растворенный сырой продукт в колонну и добавьте растворитель под давлением. Соберите, определите и объедините дроби, как указано в текстовом протоколе.

С помощью ротационного испарителя выпарить растворитель под пониженным давлением для получения желаемого продукта. Для начала растворите 1,4 грамма S-метилизотиомочевины и 2,2 грамма бок-ангидрида в интенсивно перемешивающем двухфазном растворе ДКМП и насыщенного водного бикарбоната натрия. Дайте смеси помешать в течение 24 часов при комнатной температуре.

После этого вылейте смесь в разделительную воронку. Отделите слои и трижды извлеките водную фазу с помощью DCM. Затем соедините органические фазы.

Соедините органические фазы с сульфатом натрия. После удаления растворителя с помощью роторного испарителя растворите сырой продукт в 2 миллилитрах гексана. Загрузите флэш-колонку со 100 граммами диоксида кремния в четыре к одному растворе гексана и этилацетата.

После этого загрузите растворенный сырой продукт в колонну и добавьте растворитель под давлением. После сбора и выявления дробей соедините нужные фракции. С помощью ротационного испарителя выпарить растворитель под пониженным давлением до получения 1,1 грамма Boc-S-метилизотиомочевины.

Растворите 250 миллиграммов собранного Boc-S-метилизотиомочевины в 10 миллилитрах высушенного ДМФА в 50-миллилитровой колбе с круглым дном в инертной атмосфере при комнатной температуре. С помощью шприца добавьте 440 микролитров DIPEA. С помощью шприца добавьте по каплям 245 микролитров ангидрида уксусной кислоты, помешивая.

Дайте смеси помешать в течение часа при комнатной температуре. Затем с помощью шприца добавьте два миллилитра метанола и размешивайте в течение 15 минут. После удаления растворителя под пониженным давлением, с помощью ротационного испарителя, растворите сырой продукт в одном миллилитре DCM.

Загрузите флэш-колонку с 60 граммами диоксида кремния в растворе гексана и этилацетата три к одному. Далее загрузите растворенный сырой продукт и добавьте растворитель под давлением. Соберите, определите и объедините дроби, как указано в текстовом протоколе.

С помощью ротационного испарителя выпарить растворитель под пониженным давлением до получения 210 миллиграммов желаемого продукта в виде белого твердого вещества. Для начала растворите небольшое количество ортогонально дезащищенного циклического пептида в небольшом объеме ДМФА. Добавьте два эквивалента DIPEA.

И два эквивалента предшественника гуанидинилирования. Затем дайте раствору помешать в течение двух часов при комнатной температуре. Как только реакция завершится, удалите растворитель.

Повторно растворите гуанидинилированный циклический пептид в ацетилнитриле и выполните полупрепаративную очистку ВЭЖХ, как указано в текстовом протоколе. После этого в небольшой стакан мерзости добавьте к очищенному продукту приготовленный раствор трифторуксусной кислоты, воды и триизопропилсилана. Перемешайте эту смесь в течение часа при комнатной температуре, а затем наблюдайте за полным снятием защиты с помощью ESIMS.

Добавьте 10 миллилитров ледяного эфира в центрифужную пробирку объемом 50 миллилитров. С помощью пастеровской пипетки добавьте очищенный пептид по каплям в эфир. Центрифугируйте суспензию при 5 000 раз g в течение пяти минут.

После этого промойте гранулу ледяным эфиром. В центрифуге при 5 000 раз g в течение пяти минут. Повторите эту промывку и центрифугирование еще раз.

Затем растворите продукт в 2 миллилитрах воды класса HBLC и очистите продукт с помощью полупрепаративной ВЭЖХ, как указано в текстовом протоколе. В данном исследовании представлен простой метод модификации гуанидиновой группы в пептидных глигинах. Ход реакций контролируется с помощью жидкостной хроматографии высокого давления.

Для более крупных остатков в группе гуанидина двух часов часто недостаточно для завершения реакции. Таким образом, реакцию продолжают, и соединения очищают с помощью полупрепаративной ВЭЖХ. Затем небольшое количество разбавляют ДМСО для получения стволового раствора для биологической оценки в анализе связывания твердой фазы.

Все анализируемые соединения демонстрируют относительно высокое сродство интегрантного подтипа альфа v бета три, а также высокую селективность к интегрантному подтипу альфа пять бета один. Впервые идея этого метода пришла нам в голову, когда мы искали стандартный метод гуанидинилирования во время СППС. После просмотра этого видео у вас должно быть хорошее понимание того, как готовить специально изготовленные предшественники гуанидинилирования, чтобы модифицировать или функционализировать гуанидиновую группу вашего целевого пептида.