Определено и масштабируемая Генерация гепатоцитов-подобных клеток из человеческих плюрипотентные стволовые клетки

Общая цель этого протокола заключается в получении гепатоцитоподобных клеток человека из плюрипотентных стволовых клеток с использованием рекомбинантных ламининовых матриц в определенных условиях. Этот метод позволяет пользователю изготавливать функциональные человеческие гепатоциты для изучения биологии печени в чашке. Основным преимуществом данной методики является то, что ее определенная природа позволяет массово получать гепатоциты с высокой степенью экспериментальной воспроизводимости. Чтобы начать эксперимент, разморозьте 100 микрограмм на миллилитр запаса рекомбинантного ламинина-521, или LN-521, при четырех градусах Цельсия.Разбавьте размороженный LN-521 в ледяном 1xDBPS с кальцием и магнием, чтобы получить раствор в 5 микрограмм на миллилитр. Добавьте один миллилитр из пяти микрограммов на миллилитр раствора LN-521, чтобы покрыть одну лунку из шестилуночной пластины, и покачайте пластину, чтобы равномерно распределить его в лунке. Затем инкубируйте планшеты в инкубаторе для клеточных культур с 5% CO2 при температуре 37 градусов Цельсия не менее двух часов для срочного использования. Перенесите пластину с покрытием из инкубатора в колпак для культуры тканей. Осторожно отсасывайте покрытие раствором LN-521, не повреждая поверхность покрытия. Затем сразу же добавьте один миллилитр предварительно подогретого mTeSR