Электрохимические обнаружения от дейтерия кинетическая изотопный эффект на внеклеточные переноса электронов в Shewanella oneidensis MR-1

Общая цель данного протокола заключается в наблюдении за вкладом транспорта протонов в скорость бактериального внеклеточного транспорта электронов путем обнаружения кинетического изотопного эффекта дейтерия. Наш метод раскрывает влияние транспорта протонов на кинетику внеклеточного транспорта электронов или ЭЭТ от бактерий к электроду через цитохромы c-типа на внешней мембране. Наш анализ отражает нативное управление протонами при ЭЭТ, потому что мы использовали живые бактерии, а не очищенный фермент.

Однако наша задача заключалась в том, чтобы устранить шумы от других клеточных процессов. Кинетический изотопный эффект дейтерия, называемый KIE, является одним из лучших методов для изучения вклада транспорта протонов в связанный с ним процесс переноса электронов. Чтобы вырастить клетки Shewanella MR-1, перенесите одну колонию клеток, выращенных на агаровой пластине, в 15 миллилитров среды LB.