Use of Time-Lapse Microscopy and Stage-Specific Nuclear Depletion of Proteins to Study Meiosis in <em>S. cerevisiae</em>

Gisela Cairo; Anne MacKenzie; Dai Tsuchiya; Soni Lacefield

doi:10.3791/64580

Использование покадровой микроскопии и стадийного ядерного истощения белков для изучения мейоза у...

JoVE Journal
Biology

A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.

JoVE Journal Biology

Use of Time-Lapse Microscopy and Stage-Specific Nuclear Depletion of Proteins to Study Meiosis in S. cerevisiae

Использование покадровой микроскопии и стадийного ядерного истощения белков для изучения мейоза у S. cerevisiae

Full Text

2,248 Views

07:48 min

October 11, 2022

DOI: 10.3791/64580-v

Gisela Cairo*¹, Anne MacKenzie*¹, Dai Tsuchiya^1,2, Soni Lacefield¹

¹Department of Biology,Indiana University, ²Stowers Institute for Biomedical Research

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This study presents a protocol leveraging time-lapse microscopy to investigate meiosis in budding yeast, focusing on the conditional depletion of specific proteins during meiotic chromosome segregation. By synchronizing yeast cells in prophase one and manipulating protein levels at key stages, the method reveals distinct protein functions.

Key Study Components

Research Area

Meiosis
Cell Cycle Regulation
Protein Function in Chromosome Segregation

Background

Time-lapse microscopy allows for the real-time observation of cellular processes.
Budding yeast serves as an effective model for studying meiotic mechanisms.
Previous methods may yield residual effects impacting subsequent stages.

Methods Used

Time-lapse microscopy combined with cell-cycle synchronization.
Budding yeast as the primary biological model.
Conditional depletion of target proteins at specific meiotic stages.

Main Results

Identified unique roles for proteins by timing their depletion.
Demonstrated critical functions necessary for proper chromosome segregation.
Highlights defects in kinetochore attachment linked to protein depletion.

Conclusions

The protocol successfully elucidates protein functions during meiosis.
Offers insights relevant to understanding cell cycle events and mutations.

Frequently Asked Questions

What is the main focus of this research?

The research focuses on the function of specific proteins during meiosis in budding yeast.

Why is time-lapse microscopy used in this study?

It allows for real-time observation of meiotic processes and protein functions.

What organism is used to study meiosis?

Budding yeast is utilized as the primary model organism.

How do the researchers synchronize the yeast cells?

The researchers synchronize cells in prophase one for the experiments.

What are the implications of protein depletion in meiosis?

Protein depletion impacts chromosome segregation and can reveal distinct protein functions at different meiotic stages.

Can the protocol be applied to other organisms?

Yes, the method may be adapted for use in various organisms, especially those without nuclear envelope breakdown.

What key findings were observed in the study?

The study found defects in kinetochore attachment due to conditional protein depletion, affecting meiotic outcomes.

Покадровая микроскопия является ценным инструментом для изучения мейоза у почковых дрожжей. Этот протокол описывает метод, который сочетает в себе синхронизацию клеточного цикла, покадровую микроскопию и условное истощение целевого белка, чтобы продемонстрировать, как изучать функцию конкретного белка во время сегрегации мейотических хромосом.

Синхронизируя клетки в профазной и затем истощая белок-мишень на определенной стадии, этот метод может идентифицировать временно различные функции специфических белков. Условное истощение белков на определенных стадиях миоза предотвращает остаточные эффекты, которые традиционный миотический мутант может иметь на более поздних стадиях. Этот метод может быть использован для изучения начинающегося дрожжевого митоза и других организмов, которые не подвергаются разрушению ядерной оболочки.

Кроме того, этот метод может быть использован в других организмах для изучения событий клеточного цикла до разрушения ядерной оболочки. Для начала сделайте агаровую прокладку, которая будет использоваться для создания монослоя клеток для визуализации. Отрежьте и выбросьте крышку и нижнюю треть 1,5-миллилитровой микроцентрифужной трубки, чтобы создать цилиндр, который будет служить формой для агаровой прокладки.

View the full transcript and gain access to thousands of scientific videos