Name: Фазового контраста и дифференциальных помех контраста (DIC) микроскопии (Видео) | JoVE Journal
Uploaded: 2008-08-06T17:41:00.000+00:00
Duration: 6 min 49 s
Description: Узнайте методы фазового контраста и дифференциальных помех контраста для визуализации прозрачных биологических образцов. Эти техники микроскопии улучшают контраст и разрешение при исследовании клеточных структур.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Несколько клипов видео, демонстрирующее фазового контраста и DIC микроскопии были взяты из другого видео-статью, озаглавленную <a href="details.stp?ID=197">Слои симбиоз</a> . Юпитер любезно это признает вклад Лидбеттер лаборатории.

Полный текст протокола для этого экспериментальный подход доступен в <a href="http://www.mrw.interscience.wiley.com/emrw/9780471143031/cp/cpcb/article/cb0401/current/abstract ">Текущий протоколов в клеточной биологии.</a>

Авторы не имеют конфликтов интересов, подлежащих раскрытию.

Фазового контраста и дифференциальных помех контраста (dic) микроскопии

Phase Contrast and Differential Interference Contrast (DIC) Microscopy

Фазово-контрастной микроскопии часто используется для создания контраста для прозрачной, не поглощающих свет, биологических образцов. Техника была открыта Цернике, в 1942 году, который получил Нобелевскую премию за его достижения. DIC микроскопии, введенный в конце 1960-х, был популярен в биомедицинских исследованиях, поскольку он выделяет края образца структурных деталей, обеспечивает высокое разрешение оптического разделах толстых образцов, включая клетки тканей, яиц и эмбрионов и не страдает от типичных фазы ореолы фазового контраста изображения. Этот протокол освещаются принципы и практическое применение этих методов микроскопии.

Этот протокол освещаются принципы и практические применения фазы и контраста дифференциальных помех (DIC) микроскопии

Фазового контраста и дифференциальных помех контраста (DIC) микроскопии

Фазово-контрастная микроскопия часто используется для создания контраста при исследовании прозрачных, непоглощающих свет биологических образцов. Этот метод был открыт ...

Световая микроскопия является одним из, если не самым важным инструментов в области биомедицинских исследований. В зависимости от целей исследования для визуализации образца могут потребоваться различные режимы освещения. В данном видео будут продемонстрированы два оптических режима освещения проходящим светом: фазово-контрастная микроскопия и дифференциально-интерференционный контраст (DIC).Здравствуйте! Меня зовут Виктория Сан Фролик, я представляю центр оптической визуализации Медицинского центра Университета Техаса в Сан-Антонио. Сегодня я покажу вам, как правильно проводить исследование образцов с помощью фазово-контрастной и дифференциально-интерференционной микроскопии. Итак, приступим.Стандартная микроскопия в светлом поле недостаточно эффективна для изучения прозрачных и бесцветных образцов. Фазово-контрастная микроскопия часто применяется для создания контраста при исследовании прозрачных, не поглощающих свет биологических объектов. Этот метод был разработан Цюрихом в 1942 году, за что он был удостоен Нобелевской премии.Фазово-контрастный микроскоп представляет собой световой микроскоп с transmitted light (проходящим светом), дополненный специальными фазово-контрастными объективами, содержащими фазовую пластину или кольцо, и конденсорным кольцом вместо диафрагмы. Кольцо обычно расположено в револьвере конденсора, и его размер необходимо подбирать в соответствии с используемым объективом. После настройки освещения по Кёлеру выберите подходящий фазовый объектив, а затем установите соответствующее фазовое кольцо в конденсоре.После того как фазовое кольцо объектива и кольцо конденсора были правильно выровнены так, чтобы они были концентричны и перекрывались, можно приступить к наблюдению за образцом и правильной настройке фокуса. Давайте продемонстрируем, как выглядит фазовый контраст при просмотре через микроскоп. Перед вами срез печени крысы.С использованием фазового контраста. Этот метод улучшает визуализацию биологического материала, изменяя контрастность: вместо различных оттенков серого используются оттенки от черного до белого. Однако вы заметите, что образцы окружены ореолом, который скрывает мелкие структурные особенности.Этот ореол является артефактом освещения фазовым кольцом. Теперь вы заметите, что при переключении в режим светлого поля данный образец очень трудно рассматривать. При возврате к фазово-контрастному методу мы можем четко видеть структуру и форму клеток в ткани печени крысы, начиная с момента внедрения этого метода в конце 1960-х годов.Микроскопия в режиме дифференциального интерференционного контраста (DIC) широко применяется в биомедицинских исследованиях, поскольку она позволяет получать изображения тонких структур с высоким разрешением за счет усиления контраста на границах раздела фаз, при этом формируемое изображение представляет собой очень тонкий оптический срез. Фактически, способность метода DIC создавать оптические срезы сделала его полезным режимом освещения проходящим светом в сочетании с конфокальной микроскопией. Микроскоп DIC представляет собой световой микроскоп в режиме светлого поля с добавлением следующих элементов: поляризатора между источником света и конденсором.Разделительная призма ДИХ-пучка в части конденсатора, объединяющая призма ДИХ-пучка непосредственно за объективом и анализатор в бесконечном пространстве перед двумя линзами. Чтобы добиться наилучших характеристик оптики ДИХ, важно сначала настроить световой микроскоп на освещение по Кёлеру, а затем поместить элементы ДИХ в оптический путь. Свет от источника проходит через поляризатор, после чего разделяется первой призмой.Эти парные лучи проходят близко друг к другу. Если оба луча проходят через один и тот же материал образца, то при их повторном объединении второй призмой они не интерферируют друг с другом и, следовательно, выглядят серыми. Однако на краю структуры один луч из пары проходит через материал, отличный от материала, через который проходит второй луч, и подвергается изменению.Когда эти лучи вновь соединяются второй призмой, возникает либо конструктивная интерференция, создающая светлое пятно, либо деструктивная, создающая темное пятно. Рассмотрим диатомовые водоросли при дифференциальном фазовом контрасте (DIC). Вы заметите, что мелкие детали структуры диатомей отчетливо видны.Однако при удалении оптики дифференциального интерференционного контраста (DIC) эти детали исчезают. Контраст по всему образцу распределяется так, что одна сторона выглядит светлой, а другая — более темной. Это создает впечатление рельефности, но на самом деле является иллюзией.Направление эффекта отбрасываемой тени можно изменить, повернув поляризатор через точку пересечения до достижения противоположного контраста. Мы только что рассмотрели оптические режимы фазового контраста и дифференциального интерференционного контраста (DIC). Напоминаем, что подавление фазового контраста делает контрастные объекты более светлыми (от черного к белому), что полезно для наблюдения за бесцветными и прозрачными образцами.Дифференциально-интерференционный контраст (DIC) также создает контраст в образце. Это достигается путем получения изображения высокого разрешения тонкого оптического среза. На этом всё.Благодарим за просмотр и желаем успехов в ваших микроскопических исследованиях.

phase-contrast-and-differential-interference-contrast-dic-microscopy

Research

JoVE Journal

Biology

Биология

Neisseria meningitidis (Nm), грамотрицательных человека конкретных дыхательных патогенов, могут быть привязаны к человеческой α-актинина. Здесь мы приводим протокол для визуализации colocalisation бактерий с внутриклеточной α-актинина после бактериальной вступления в человеческом мозгу микрососудистой эндотелиальных клеток (HBMECs).

Визуализация и количественной оценки внутриклеточного Взаимодействия Neisseria meningitidis И правам α-актинина по конфокальной микроскопии

Мы демонстрируем использование флуоресцентной фотоактивационной микроскопии локализации (FPALM) для одновременного изображения нескольких типов флуоресцентно меченных молекул в клетках. Описанные методы позволяют локализовать от тысяч до сотен тысяч отдельных флуоресцентных меченых белков с точностью до десятков нанометров в пределах отдельных клеток.

Одновременное Многоцветный изображений биологических структур с флуоресцентной фотоактивации локализации микроскопии

Мы описываем использование стандартного оптического микроскопа для выполнения количественных измерений клеточной массы, объема и плотности с помощью комбинации яркого поля и дифференциально-интерференционно-контрастных изображений.

Количественный оптическая микроскопия: Измерение Cellular биофизических Особенности с использованием стандартного оптического микроскопа

Конфокальной микроскопии используется для изображения покоя и впадающих коллоидно-полимерных смесей, которые изучаются в качестве модельных систем для привлекательных суспензий. Алгоритмы анализа изображения используются для расчета структурных и динамических показателей для коллоидных частиц, которые измеряют изменения в связи с геометрической заключения.

Конфокальной микроскопии из замкнутого покоя и Измельчитель коллоидной-полимерных смесей

Здесь мы представляем практическое руководство построения интегрированных микроскопии системы, которая объединяет обычные epi флуоресцентных изображений, сингл молекула на основе обнаружения суперразрешением изображений и многоцветные сингл молекула обнаружения, включая Одноместный молекула флуоресценции передачи энергии резонанса изображений в один настройки в экономически эффективным способом.

Проведение нескольких режимов изображения с одной флуоресцентным микроскопом

Целью данного протокола является детальный проверенный подход к подготовке плазмонных образцов наночастиц и для выполнения спектроскопии отдельных частиц на них с дифференцаальной интерференцией (DIC) микроскопии.

Выполнение спектроскопии на плазмонных наночастиц с передачей на основе Номарски-тип дифференциальной микроскопии интерференции

В этой рукописи описывается метод использования одноклеточной флуоресцентной микроскопии для визуализации и количественной оценки бактериальной конкуренции в кокультуре.

Количественная оценка межбактериальной конкуренции с использованием одноклеточной флуоресцентной визуализации

Дифференциальная динамическая микроскопия (ДДМ) сочетает в себе особенности динамического рассеяния света и микроскопии. Здесь представлен процесс использования DDM для характеристики восстановленных цитоскелетных сетей путем количественной оценки субдиффузной и клеточной динамики частиц в виментиновых сетях и баллистического движения активных миозин-управляемых актин-микротрубочек композитов.

Количественная оценка динамики цитоскелетов с помощью дифференциальной динамической микроскопии

Этот протокол подробно описывает передовые применения визуализации и управление совместными ресурсами системы лазерно-сканирующего конфокального микроскопа, интегрированной с мультиплексированным детектором массива для высокоразрешающей клеточной и субклеточной визуализации. Рабочий процесс позволяет мультимодальное изображение от конфокального до сверхразрешения (~120 нм) на одной платформе, делая визуализацию наномасштабов более доступной.

Сверхразрешающая визуализация и совместное управление: протокол для конфокальной микроскопии с мультиплексным обнаружением

Для оценки методов лечения, новых стволовых клеток важно неинвазивно трек вводили клетки в живом организме. Это видео покажет вам, как ярлык человека мезенхимальных и эмбриональных стволовых клеток с железом на основе оксида контрастных средств в естественных условиях для последующего МРТ в естественных условиях.

Маркировка ЭСК и hMSCs с Оксид железа наночастиц для неинвазивного в естественных условиях слежения с МРТ

Узнайте методы фазового контраста и дифференциальных помех контраста для визуализации прозрачных биологических образцов. Эти техники микроскопии улучшают контраст и разрешение при исследовании клеточных структур.

Фазового контраста и дифференциальных помех контраста (DIC) микроскопии

Больше видео