複合行政 III

Lab Animal Research

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Overview

ソース: ケイ ・ スチュワート、RLATG、RVT CMAR;ヴァレリー A. シュレーダー、RVT、RLATG。ノートルダムのノートルダム大学

実験用マウスおよびラットの複合管理の多くの一般的に使用されるルートがあります。ただし、特定のプロトコルでは、皮内、鼻腔内、および頭蓋内注射を含む使用頻度の低いルートの使用を必要があります。これらの手順を正常に実行するため専門のトレーニングが欠かせません。これらのルートのための正当化は、制度的動物ケアおよび使用委員会 (IACUC) の承認を得るために提供する必要があります。

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JoVE Science Education Database. ラボ動物研究の必需品. 複合行政 III. JoVE, Cambridge, MA, (2018).

Principles

Intraderma linjections は、表皮層 (表皮) の下にある真皮の外側の層に配信されます。この注射ルートは通常の抗原に対するアレルギー反応や皮膚血流診断、炎症の評価のため予約されています。

あまり予防接種または充血除去剤のスプレーのローカル配信のために使用、鼻腔内投与は全身および中央神経系 (CNS) 配信の使用もできます。ラインの鼻腔粘膜は血管や急速な全身への吸収を可能にする、直接標的に中枢神経系を神経の豊富な供給。小さな脂溶性の分子から成る物質があるより大きい分子が含まれているものよりもはるかに大きい吸収率。2

麻酔はこの手順に必要な正確な投薬を確保、鼻孔に化合物の適切な配置も容易に可能します。それは、麻酔下の動物意識動物に比べて脳に薬の 5 倍より配信していることが実証されています。2無麻酔ラット経鼻投与に非常に耐性があります。しかし、効果的な配信テクニックの自由行動ラットの鼻腔内投与を実証研究があります。3また、アラート動物がピペット チップや針、物質の配信が困難で噛まないようにしてみてください。

鼻腔内投与の利点は、この方法で必要最小限のトレーニングとスキル、それは動物に非侵襲的ことです。ただし、エアロゾル化の可能性があるためバイオ セーフティ キャビネットと目の保護の使用をお勧め、特に理性的な動物の場合。さらに、動物を溺死を避けるため、可能な限り最小の線量を使用ください。このプロシージャ チアノーゼ時、口呼吸、または苦痛の他の徴候は動物に見られる、手順がすぐに中断されます。

アダルト マウスおよびラットの頭蓋内注射の適切な位置を確保するため脳定位固定装置を使用し、注入の深さを採用します。しかし、マウスの年齢・ ラットを 3 に 28 日で 14 日齢、頭蓋骨はそれから直接注入するに十分に薄いです脳定位固定装置のデバイスをサポートするあまりにも壊れやすいです。マウスまたはラットの子犬は、プロシージャと彼らが返されます彼女にできるだけ早く手続きが完了するまで母と左する必要があります。注射後のケアは、通常運動となどの看護動作まで熱のソースを継続的に監視含まれています。この手法を使用する主な理由は、血液脳関門に交差する、または全身の経路に関与する効果を避けるためを必要とする中枢神経系の薬理学的エージェントを提供することです。1

Procedure

1. 皮内投与

  1. 最も皮内注射は、水性化合物です。解決策は、注射部位の組織の壊死を避けるために中性の pH を持っている生理学的バッファーする必要があります。
  2. 針のサイズ範囲は、25-30 ゲージ、可能な最小です。
  3. 注射部位あたりの線量範囲は 50-100 μ L. 注入する過剰なボリュームは注射部位または化合物の圧力のためサイトからの漏洩で壊死に 。
  4. 針の皮内の空間に正確に配置、マウスやラットを麻酔する必要は。吸入麻酔は、急速な誘導と回復。ただし、注射麻酔の領域の準備のための十分な時間を提供して注射を実行する利点があります。1
  5. 注射部位周辺を剃毛、脱毛クリームを使用することで髪を削除します。
  6. 徹底的に任意の残留の脱毛クリームや髪の残骸を削除します。
  7. ヨード、クロルヘキシジン液剤、アルコールなどの局所消毒薬をつけます。
  8. 管理手順
    1. 親指と人差し指の間にピンと張った肌をストレッチします。これは針を位置決めするとき皮膚に安定性を提供します。
    2. 針ベベルを皮膚の上に置きます。
    3. 優しく、表皮と真皮の間の皮膚に針を挿入します。ベベルを指し示す針を進めます。
    4. 物質をゆっくりと注入します。化合物の注入は、皮膚に水疱、または小水疱が作成されます。
    5. 皮膚のストレッチし、針を撤回する前に調整を許可する注入後一時停止します。
  9. 注意事項
    1. プランジャーを手前に引く必要はありません。
    2. 針を皮下組織に挿入する場合、水疱が形成されません。皮下注射の結果あまりにも深くに注入します。
    3. 注射部位から漏れ化合物を引き起こすことができるしみや、区域を拭くことを避けてください。
    4. 複数の注射を実行すると、宇宙に、鉱物が重複しないようにします。

Figure 1
図 1。皮内注射マウス。

2. 鼻腔内投与

  1. 機器
    1. 正確なボリュームを提供する校正することができます micropipetting ユニット ピペットを使用します。
    2. 使い捨てのピペット チップを使用して、クロス汚染を避けるためにください。TB 注射器、鈍針やフレキシブル チューブは、投薬の使用もできます。
    3. ラットの総注入量 40-100 μ L を超えないし、6-10 μ L が値下がりしましたに与えられる必要があります。マウス、最大容量は 24 μ L、3-4 μ L 滴で与えられます。
  2. 意識した動物の管理
    1. 意識した動物のマニュアルの束縛ピペット チップまたは鈍針配置できる化合物を提供する鼻孔に十分近いので、比較的不動ですが突くか鼻のティッシュを裂くので近くにない頭であることが必要です。
    2. 動物を抑制し、垂直方向の位置でそれを保持します。
    3. 鼻のオープニングで化合物の液体の小滴を配置します。動物は、液滴を吸い込む必要があります。
    4. 全体のボリュームを与えられているまで、鼻孔を交互、追加のボリュームを管理します。
    5. 大きなボリュームを管理している場合ない拘束中に胸を圧迫することが重要です。胸骨圧迫は、気管支や肺に液体を引くため十分に深い呼吸をする動物の能力を妨げます。

Figure 2
図 2。意識下マウスにおける鼻腔内投与。

  1. 意識不明動物の管理
    1. 吸入麻酔薬を使用するアプローチと化合物の配信中に固定化した動物のできます。これは注入装置、ヘッド、顔の皮膚や目、鼻の組織動物の傷害のけいれんによる化合物の損失を噛む動物の可能性を排除します。動物はまた鼻息し、管理に鼻孔から化合物をスプレーしにくいです。
    2. 仰臥位に動物を配置します。頭の位置は、鼻孔のソリューションの配置を影響します。中枢神経系配信のための理想的な位置は、仰臥位の動物が示されています。これによりより良い吸収。2
    3. 鼻の開口部、吸入のタイミングの 1 つの側面に直接化合物の半分を管理します。その後、動物を裏返します。
    4. 上記のように、管理、その他、ボリュームの半分他の鼻の開口部に。

Figure 3
図 3。無意識のマウスの鼻腔内投与。

3。新生児マウスおよびラットの頭蓋内圧亢進の管理

  1. マウスやラットは、頭蓋内注射用麻酔する必要があります。
マウス ラット
期間 (日数) 針のゲージ (g) 期間 (日数) 針のゲージ (g)
0-7 29-30 0-5 27-29
7-14 27 5-10 25-27
14-28 25 10-14 25
期間 (日数) 針の長さ (mm) 期間 (日数) 針の長さ (mm)
0-7 2 0-4 2-3
7-14 3 4-7 3
14-21 4 7-10 4
21-28 5 10-14 5
期間 (日数) (Μ l) 期間 (日数) (Μ l)
0-5 < 20 1-3 < 20
6-20 < 60 4-10 < 60
20-28 < 100 11-14 < 100

表 1。針のゲージ、針の長さ、マウスおよびラットの年齢に従って頭蓋内投与の最大ボリューム。4

  1. 機器
    1. 正しい針のゲージと最大の表 1に従って投与量を決定します。
    2. 動物の麻酔前にニードル ガードを準備します。
      注記: 針の注入深さは、ニードル キャップで作成されたガードを使用して制御されます。
      1. 針、ニードル キャップいらずでガードを作成して、カットする場所を示すキャップにマーク表示されます。カットは 2 ~ 5 mm の針は、針のキャップを交換するときにさらされているようにすべきであります。
      2. 皮膚や頭蓋骨を貫通し、脳の目的の深さに達するのために随分露出針の長さがある必要があります。
      3. マウスおよびラットに必要な針の長さは、表 1に示します。
    3. 加熱源が仔ラットの低体温症を防ぐために必要です。いくつかの種類があります: 低、循環水毛布、または再利用可能な化学反応の熱ポーチに電気加熱パッドを設定します。
  2. 拘束
    1. マウスおよびラットの子犬 10 日は、この手順で麻酔を必要は。頭の後ろにちょうどそれらを持ち、尾肩にわずかな圧力をかけるため皮膚を引いて手動でそれらを抑制します。
    2. 麻酔子犬イソフルラン吸入と年齢の 10 日間。イソフルランを浸した綿球を誘導室を精度の気化器やガラスベル ジャーに接続します。一度子犬を固定すると、麻酔は、効果的な約 40 秒間注入のための十分な時間を提供します。
  3. 注入法
    1. 注射器に物質を描画し、針にキャップ/注射針ガイドを配置します。
    2. 注入量として 100 μ L であり、最大 300 μ L、離乳や古いマウスの新生児マウスまたはラットごとの最大数量をお勧めします。
    3. 新生児の大脳皮質を注入するには、目、頭蓋骨の正中線から約 3 mm の後ろ 5 mm 針を挿入します。
    4. 幼マウスの注射部位は、眼と耳の間と正中線のすぐそばの約半分の方法です。

Figure 4
図 4。頭蓋内投与マウスの子犬。

時に、さまざまな実験的アプローチ齧歯動物で化合物管理の少ない一般的に使用されるルートを使用する必要。皮、鼻、頭蓋内、生物医学の研究者が今日の演習で使用このような代替ルート。

その名の通り、皮は化合物に提供真皮の外側の層。鼻腔内は、動物の鼻孔でソリューションを置いています。頭蓋内、齧歯動物の脳に直接針を挿入します。

これらの手順を正常に実行する専門にされた訓練が欠かせません。ここでは、我々 はまずこれらの各メソッドに関する考慮事項を説明し、動物の安全性と、実験の成功を確保しながらの手順を説明するのに役立ちますテクニックを目指します。

これらのルートは通常用いられるもの 1 つはこれらの専門にされた管理技術を実行する開始する前に心に留めてくださいとのディスカッションを始めましょう。

皮内注射は、表皮と真皮のこのルートはたいていの場合、炎症、皮膚の血流診断や抗原に対するアレルギー反応の評価間のスペースに記事を提供する使用されます。その他の路線と同様に、皮のソリューションも準備されるべき生殖不能の技術を使用しています。・注射部位の組織の壊死を避けるために中性の pH を持っている生理学的バッファーする必要があります。25-30 ゲージ針でハブのないシステムは、この注射に用いられます。このシステムは、管理、注射部位ごとの 50-100 マイクロリットルの範囲内の音量を維持するのに役立ちます。

過剰な注入は、圧力による壊死または望ましくない複合漏れで起因できます。

スワブは、予防接種や充血除去剤スプレーだけでなく全身のローカル配信と中枢神経系配信のためしばしば選択されます。ラインの鼻腔粘膜は血管や急速な全身への吸収を可能にする、直接標的に中枢神経系を神経の豊富な供給。これ単純な機器 - キャリブレーション マイクロ ピペットといくつかの使い捨てチップとスキル、最小限のトレーニングを必要とする非侵襲的な方法です。ラット用管理ボリューム 6 10 1 マイクロリットル滴で与えられた 40 100 マイクロリットルを超えてはいけません。マウス、最大の総容積は 3-4 1 マイクロリットル滴で与えられた 24 マイクロリットルです。

麻酔はこの手順に必要なそれはいくつかの利点を意識した動物の鼻腔内投与 1) それは容易に鼻孔に化合物の適切な配置、確実正確な投与 2) の可能性がなくなる、動物投与装置 3 をかむ) は、動物の鼻組織、目や頭、そして 4 のけいれんによる顔の皮膚への損傷がないことにより) 動物は鼻息し、管理に鼻孔から化合物をスプレーしにくい。

アダルト マウスおよびラットの頭蓋内注射は、「Essentials の神経科学」コレクションのビデオで説明されている脳定位固定装置使用を採用しています。機器は、適切なポジショニングと注入の深さを保証します。ここでは、新生児マウスおよびラットの頭蓋骨、それを介して直接注入に十分に薄いで、可能性がありますあまりにも壊れやすい脳定位固定装置のデバイスをサポートする頭蓋内配信に注力します。この手法の主な目的は、中枢神経系に直接中枢神経系の薬理学的エージェントに配信して、全身の経路を介して発生した効果を避けるために。針のゲージ、長さおよび管理のボリュームは、種と、パップスの年齢に基づいて決定されます。その動物の年齢を増加し、ゲージ数の減少、必要な針の長さにつれて、メモし、最大推奨投与量も増加します。

心のこの背景情報、これらの注入法の手順について掘り下げてみましょう。最初に皮内投与法です。この手順は、麻酔下の動物で実行することは。麻酔導入とメンテナンスの手順を理解するこのコレクションに別のビデオを確認します。

動物を麻酔すると、一度は、電気かみそりや脱毛クリームを使用して、注射部位を剃る。水で湿らせたガーゼでサイトから残留の髪を徹底的に削除します。その後、別のガーゼのパッドで局所の消毒液を剃毛エリアに適用されます。管理、親指と人差し指の間延伸により注射部位の皮膚をまず安定します。

今針ベベルを皮膚に置き、そっと表皮と真皮層の開口部は、傾斜面の向こうに挿入します。ゆっくりと注入し、肌で、ブレブを作成することに注意してください。針があまりにも深く挿入されている場合水疱は形成しません。注入後皮膚のストレッチし、調整できるように一時停止して針をゆっくりと引き出します。引いていないプランジャーにいつでも、組織を描画し、注射部位の外傷を引き起こすようです。また、ワイプしないまたは注射部位のしみのこれはリークに注入された物質を引き起こす可能性があります。複数の注射の際に、必ずスペースを離れて十分な幅、鉱物が互いに重複しません。

次に、意識し麻酔下の動物の鼻腔内投与手順を学習しましょう。

目がさめている動物のため首のうなじに皮膚スクラッフィングによってそれらを抑制し、垂直位置に固定化した頭で動物を保持します。肺の中に液体を引くに十分に深い呼吸をする動物の能力を阻害する可能性があります、胸を圧迫しないように注意します。マイクロ ピペットを使用して、鼻のオープニングで液体の小滴を配置することによって、ソリューションの一部を管理します。動物は、液滴を吸入します。交互に 2 つの鼻開口を管理する全体のボリュームを与えられているまで、このプロセスを繰り返します。思い出してください - 管理の容量を超えない 24 μ l、100 μ l マウスおよびラット、それぞれ。

麻酔下のマウスおよびラット、背臥床位置に動物を配置します。この位置は、化合物のよりよい吸収できるので中枢神経系配信に最適です。動物の頭を回転させ、鼻腔を開く、吸入のタイミングの 1 つの側面に直接化合物の半分を管理します。その後、次期政権の位置に動物の頭を回転させます。2 呼吸ほど後に、、第 2 の鼻腔開口部に残りのボリュームを管理します。完全な投与後、裏では動物をそのケージに戻ります。

次に、新生児マウスおよびラット.の頭蓋内圧亢進の管理手順を確認してみましょう手順を開始する前に電気に子犬とダムとケージを置く低パッド セットを加熱します。加熱パッドのケージの一部であることを確認します。これは、低体温を防止し、同時に実現彼女が望む場合、熱から離れて移動するダムです。次に、動物の年齢に適した針ゲージを選択します。リコール、針のゲージ;針の長さは、頭蓋内注入時に針の深さを制御するために使用ボリューム管理. の動物の種と年齢によって異なります。

ガードを使用して長さを調整します。このガードを準備、そのキャップに対して正しい針を測定し、印を作りなさい。次に、削減されるを示すキャップに 2 番目のマークを付けます。2 つのマーク間の距離は必要な針の長さです。その後、かみそりの刃でキャップをカットします。彼らは、キャップを粉砕、クリーン レベルのカットは生成されません、はさみを使用しないでください。これは「ニードル ガード」滅菌は、もはやとして、ガードを作成に使用される針を処分、ガードに新しい針を挿入し、代わりに適切な長さがさらされていることを確認します。次に、適切な注射器に接続されている別の針を使用して、注入物質を描画します。別の針はストッパーに配置されますこれらの極細針を鈍い大幅頭蓋内管理用に理想的ではないためこれを行うにです。その後、警備隊と針に満たされた注射器を配置します。今システムでは注射の準備ができて。

子犬の 10 日間は、吸入麻酔を管理します。10 日未満の子犬を麻酔しない必要があります。

注射を行うには、まず目の後ろと頭蓋骨の正中線から約 3 mm 5 mm であるサイトを探します。次に、針ガードで可能深さに針を挿入します。その後、脳への外傷を避けるために遅い着実な方法で挿入します。すぐに、脳組織の損傷を防ぐために細心の注意を針を抜きます。最後に、適切な回復を可能にダムで裏では動物を配置します。

今管理のこれらの珍しいルートを利用する今日のラボで行われているいくつかの実験を見てみましょう。

皮内注射は皮膚の炎症性反応を研究するよく使用されます。この実験では、研究者は片方の耳にアレルゲンと前感作マウスの反対側の耳に中立的な物質を注入するのにこのメソッドを使用します。次に、彼らはアレルゲンを注入による血管透過性の変化を検討するための動物の循環系に青い色素を配信しました。

前述したように、鼻腔内投与のアプリケーションの 1 つのワクチンを管理することです。ここでは、科学者は野生型とトランスジェニック マウス T 細胞の特定の種類の生産を介して学んだ粘膜免疫遺伝子組み換え、生きている弱毒インフルエンザ ワクチンを提供するのにこのルートを使用しました。

最後に、これらの生物医学の研究は、人間の脳腫瘍モデルを作成するために、免疫不全マウスにがん細胞を移植するのに頭蓋内管理を使用しました。注射の効果、インビボ イメージング システムを使用して調べた。

あなたは化合物投与実験用マウスおよびラットの特別なメソッドのいくつかのジュースを見たゼウスのビデオを持っています。これらの手順が役に立つ、考慮事項の前に心に留めておいてくださいし、管理に動物の健康に影響を最小限があるこれらのテクニックとことを確認する重要な手続きの手順の実行中を今理解する必要があり、収集する実験データ。いつも見てくれてありがとう!

Summary

動物に化合物の管理は、動物の両方の健康と実験データと科学的価値の結果に大きな影響を持つことができます。配信の適切な方法は、実験の成功に不可欠です。研究の科学的な目的、物質、必要な投与量、物質の粘度と動物の健康の pH を含む最適なルートを決定する多くの要因を考慮されなければなりません。技術的専門知識はまたすべて注入法のための要件です。

References

  1. Turner, P.V., Pekow, C., Vasbinder, M. A., and Brabb, T. 2011. Administration of substances to laboratory animals: equipment and considerations, vehicle selection, and solution preparation. JAALAS. 50: 614-627.
  2. Dhuria, S.V., Hanson, L.R., and Frey II, W.H. 2010. Intranasal delivery to the central nervous system: mechanisms and experimental considerations. Journal of Pharmaceutical Sciences. 99: 1654-1673.
  3. Stevens, J., Suidgeest, E, Van der Graaf, P.H., Danhof, M., and De Lange, E.C. 2008. Development and evaluation of a new, minimal-stress animal model for intranasal administration in freely moving rats. Poster presentation at American Association of Pharmaceutical Scientists Annual Meeting, Atlanta, Georgia.
  4. Morton, D.A., Jennings, M., Buckwell, A., Ewbank, R., Godfrey, C., Holgate, B., Inglis, I., James, R., Page, C., Sharman, I., Verschoyle, R., Westall, L., and Wilson, A.B. 2001. Refining procedures for the administration of substances Report of the BVAAWF/FRAME/RSPCA/UFAW Joint Working Group on Refinement. Members of the Joint Working Group on Refinement. Laboratory Animals. 35: 1-41.

1. 皮内投与

  1. 最も皮内注射は、水性化合物です。解決策は、注射部位の組織の壊死を避けるために中性の pH を持っている生理学的バッファーする必要があります。
  2. 針のサイズ範囲は、25-30 ゲージ、可能な最小です。
  3. 注射部位あたりの線量範囲は 50-100 μ L. 注入する過剰なボリュームは注射部位または化合物の圧力のためサイトからの漏洩で壊死に 。
  4. 針の皮内の空間に正確に配置、マウスやラットを麻酔する必要は。吸入麻酔は、急速な誘導と回復。ただし、注射麻酔の領域の準備のための十分な時間を提供して注射を実行する利点があります。1
  5. 注射部位周辺を剃毛、脱毛クリームを使用することで髪を削除します。
  6. 徹底的に任意の残留の脱毛クリームや髪の残骸を削除します。
  7. ヨード、クロルヘキシジン液剤、アルコールなどの局所消毒薬をつけます。
  8. 管理手順
    1. 親指と人差し指の間にピンと張った肌をストレッチします。これは針を位置決めするとき皮膚に安定性を提供します。
    2. 針ベベルを皮膚の上に置きます。
    3. 優しく、表皮と真皮の間の皮膚に針を挿入します。ベベルを指し示す針を進めます。
    4. 物質をゆっくりと注入します。化合物の注入は、皮膚に水疱、または小水疱が作成されます。
    5. 皮膚のストレッチし、針を撤回する前に調整を許可する注入後一時停止します。
  9. 注意事項
    1. プランジャーを手前に引く必要はありません。
    2. 針を皮下組織に挿入する場合、水疱が形成されません。皮下注射の結果あまりにも深くに注入します。
    3. 注射部位から漏れ化合物を引き起こすことができるしみや、区域を拭くことを避けてください。
    4. 複数の注射を実行すると、宇宙に、鉱物が重複しないようにします。

Figure 1
図 1。皮内注射マウス。

2. 鼻腔内投与

  1. 機器
    1. 正確なボリュームを提供する校正することができます micropipetting ユニット ピペットを使用します。
    2. 使い捨てのピペット チップを使用して、クロス汚染を避けるためにください。TB 注射器、鈍針やフレキシブル チューブは、投薬の使用もできます。
    3. ラットの総注入量 40-100 μ L を超えないし、6-10 μ L が値下がりしましたに与えられる必要があります。マウス、最大容量は 24 μ L、3-4 μ L 滴で与えられます。
  2. 意識した動物の管理
    1. 意識した動物のマニュアルの束縛ピペット チップまたは鈍針配置できる化合物を提供する鼻孔に十分近いので、比較的不動ですが突くか鼻のティッシュを裂くので近くにない頭であることが必要です。
    2. 動物を抑制し、垂直方向の位置でそれを保持します。
    3. 鼻のオープニングで化合物の液体の小滴を配置します。動物は、液滴を吸い込む必要があります。
    4. 全体のボリュームを与えられているまで、鼻孔を交互、追加のボリュームを管理します。
    5. 大きなボリュームを管理している場合ない拘束中に胸を圧迫することが重要です。胸骨圧迫は、気管支や肺に液体を引くため十分に深い呼吸をする動物の能力を妨げます。

Figure 2
図 2。意識下マウスにおける鼻腔内投与。

  1. 意識不明動物の管理
    1. 吸入麻酔薬を使用するアプローチと化合物の配信中に固定化した動物のできます。これは注入装置、ヘッド、顔の皮膚や目、鼻の組織動物の傷害のけいれんによる化合物の損失を噛む動物の可能性を排除します。動物はまた鼻息し、管理に鼻孔から化合物をスプレーしにくいです。
    2. 仰臥位に動物を配置します。頭の位置は、鼻孔のソリューションの配置を影響します。中枢神経系配信のための理想的な位置は、仰臥位の動物が示されています。これによりより良い吸収。2
    3. 鼻の開口部、吸入のタイミングの 1 つの側面に直接化合物の半分を管理します。その後、動物を裏返します。
    4. 上記のように、管理、その他、ボリュームの半分他の鼻の開口部に。

Figure 3
図 3。無意識のマウスの鼻腔内投与。

3。新生児マウスおよびラットの頭蓋内圧亢進の管理

  1. マウスやラットは、頭蓋内注射用麻酔する必要があります。
マウス ラット
期間 (日数) 針のゲージ (g) 期間 (日数) 針のゲージ (g)
0-7 29-30 0-5 27-29
7-14 27 5-10 25-27
14-28 25 10-14 25
期間 (日数) 針の長さ (mm) 期間 (日数) 針の長さ (mm)
0-7 2 0-4 2-3
7-14 3 4-7 3
14-21 4 7-10 4
21-28 5 10-14 5
期間 (日数) (Μ l) 期間 (日数) (Μ l)
0-5 < 20 1-3 < 20
6-20 < 60 4-10 < 60
20-28 < 100 11-14 < 100

表 1。針のゲージ、針の長さ、マウスおよびラットの年齢に従って頭蓋内投与の最大ボリューム。4

  1. 機器
    1. 正しい針のゲージと最大の表 1に従って投与量を決定します。
    2. 動物の麻酔前にニードル ガードを準備します。
      注記: 針の注入深さは、ニードル キャップで作成されたガードを使用して制御されます。
      1. 針、ニードル キャップいらずでガードを作成して、カットする場所を示すキャップにマーク表示されます。カットは 2 ~ 5 mm の針は、針のキャップを交換するときにさらされているようにすべきであります。
      2. 皮膚や頭蓋骨を貫通し、脳の目的の深さに達するのために随分露出針の長さがある必要があります。
      3. マウスおよびラットに必要な針の長さは、表 1に示します。
    3. 加熱源が仔ラットの低体温症を防ぐために必要です。いくつかの種類があります: 低、循環水毛布、または再利用可能な化学反応の熱ポーチに電気加熱パッドを設定します。
  2. 拘束
    1. マウスおよびラットの子犬 10 日は、この手順で麻酔を必要は。頭の後ろにちょうどそれらを持ち、尾肩にわずかな圧力をかけるため皮膚を引いて手動でそれらを抑制します。
    2. 麻酔子犬イソフルラン吸入と年齢の 10 日間。イソフルランを浸した綿球を誘導室を精度の気化器やガラスベル ジャーに接続します。一度子犬を固定すると、麻酔は、効果的な約 40 秒間注入のための十分な時間を提供します。
  3. 注入法
    1. 注射器に物質を描画し、針にキャップ/注射針ガイドを配置します。
    2. 注入量として 100 μ L であり、最大 300 μ L、離乳や古いマウスの新生児マウスまたはラットごとの最大数量をお勧めします。
    3. 新生児の大脳皮質を注入するには、目、頭蓋骨の正中線から約 3 mm の後ろ 5 mm 針を挿入します。
    4. 幼マウスの注射部位は、眼と耳の間と正中線のすぐそばの約半分の方法です。

Figure 4
図 4。頭蓋内投与マウスの子犬。

時に、さまざまな実験的アプローチ齧歯動物で化合物管理の少ない一般的に使用されるルートを使用する必要。皮、鼻、頭蓋内、生物医学の研究者が今日の演習で使用このような代替ルート。

その名の通り、皮は化合物に提供真皮の外側の層。鼻腔内は、動物の鼻孔でソリューションを置いています。頭蓋内、齧歯動物の脳に直接針を挿入します。

これらの手順を正常に実行する専門にされた訓練が欠かせません。ここでは、我々 はまずこれらの各メソッドに関する考慮事項を説明し、動物の安全性と、実験の成功を確保しながらの手順を説明するのに役立ちますテクニックを目指します。

これらのルートは通常用いられるもの 1 つはこれらの専門にされた管理技術を実行する開始する前に心に留めてくださいとのディスカッションを始めましょう。

皮内注射は、表皮と真皮のこのルートはたいていの場合、炎症、皮膚の血流診断や抗原に対するアレルギー反応の評価間のスペースに記事を提供する使用されます。その他の路線と同様に、皮のソリューションも準備されるべき生殖不能の技術を使用しています。・注射部位の組織の壊死を避けるために中性の pH を持っている生理学的バッファーする必要があります。25-30 ゲージ針でハブのないシステムは、この注射に用いられます。このシステムは、管理、注射部位ごとの 50-100 マイクロリットルの範囲内の音量を維持するのに役立ちます。

過剰な注入は、圧力による壊死または望ましくない複合漏れで起因できます。

スワブは、予防接種や充血除去剤スプレーだけでなく全身のローカル配信と中枢神経系配信のためしばしば選択されます。ラインの鼻腔粘膜は血管や急速な全身への吸収を可能にする、直接標的に中枢神経系を神経の豊富な供給。これ単純な機器 - キャリブレーション マイクロ ピペットといくつかの使い捨てチップとスキル、最小限のトレーニングを必要とする非侵襲的な方法です。ラット用管理ボリューム 6 10 1 マイクロリットル滴で与えられた 40 100 マイクロリットルを超えてはいけません。マウス、最大の総容積は 3-4 1 マイクロリットル滴で与えられた 24 マイクロリットルです。

麻酔はこの手順に必要なそれはいくつかの利点を意識した動物の鼻腔内投与 1) それは容易に鼻孔に化合物の適切な配置、確実正確な投与 2) の可能性がなくなる、動物投与装置 3 をかむ) は、動物の鼻組織、目や頭、そして 4 のけいれんによる顔の皮膚への損傷がないことにより) 動物は鼻息し、管理に鼻孔から化合物をスプレーしにくい。

アダルト マウスおよびラットの頭蓋内注射は、「Essentials の神経科学」コレクションのビデオで説明されている脳定位固定装置使用を採用しています。機器は、適切なポジショニングと注入の深さを保証します。ここでは、新生児マウスおよびラットの頭蓋骨、それを介して直接注入に十分に薄いで、可能性がありますあまりにも壊れやすい脳定位固定装置のデバイスをサポートする頭蓋内配信に注力します。この手法の主な目的は、中枢神経系に直接中枢神経系の薬理学的エージェントに配信して、全身の経路を介して発生した効果を避けるために。針のゲージ、長さおよび管理のボリュームは、種と、パップスの年齢に基づいて決定されます。その動物の年齢を増加し、ゲージ数の減少、必要な針の長さにつれて、メモし、最大推奨投与量も増加します。

心のこの背景情報、これらの注入法の手順について掘り下げてみましょう。最初に皮内投与法です。この手順は、麻酔下の動物で実行することは。麻酔導入とメンテナンスの手順を理解するこのコレクションに別のビデオを確認します。

動物を麻酔すると、一度は、電気かみそりや脱毛クリームを使用して、注射部位を剃る。水で湿らせたガーゼでサイトから残留の髪を徹底的に削除します。その後、別のガーゼのパッドで局所の消毒液を剃毛エリアに適用されます。管理、親指と人差し指の間延伸により注射部位の皮膚をまず安定します。

今針ベベルを皮膚に置き、そっと表皮と真皮層の開口部は、傾斜面の向こうに挿入します。ゆっくりと注入し、肌で、ブレブを作成することに注意してください。針があまりにも深く挿入されている場合水疱は形成しません。注入後皮膚のストレッチし、調整できるように一時停止して針をゆっくりと引き出します。引いていないプランジャーにいつでも、組織を描画し、注射部位の外傷を引き起こすようです。また、ワイプしないまたは注射部位のしみのこれはリークに注入された物質を引き起こす可能性があります。複数の注射の際に、必ずスペースを離れて十分な幅、鉱物が互いに重複しません。

次に、意識し麻酔下の動物の鼻腔内投与手順を学習しましょう。

目がさめている動物のため首のうなじに皮膚スクラッフィングによってそれらを抑制し、垂直位置に固定化した頭で動物を保持します。肺の中に液体を引くに十分に深い呼吸をする動物の能力を阻害する可能性があります、胸を圧迫しないように注意します。マイクロ ピペットを使用して、鼻のオープニングで液体の小滴を配置することによって、ソリューションの一部を管理します。動物は、液滴を吸入します。交互に 2 つの鼻開口を管理する全体のボリュームを与えられているまで、このプロセスを繰り返します。思い出してください - 管理の容量を超えない 24 μ l、100 μ l マウスおよびラット、それぞれ。

麻酔下のマウスおよびラット、背臥床位置に動物を配置します。この位置は、化合物のよりよい吸収できるので中枢神経系配信に最適です。動物の頭を回転させ、鼻腔を開く、吸入のタイミングの 1 つの側面に直接化合物の半分を管理します。その後、次期政権の位置に動物の頭を回転させます。2 呼吸ほど後に、、第 2 の鼻腔開口部に残りのボリュームを管理します。完全な投与後、裏では動物をそのケージに戻ります。

次に、新生児マウスおよびラット.の頭蓋内圧亢進の管理手順を確認してみましょう手順を開始する前に電気に子犬とダムとケージを置く低パッド セットを加熱します。加熱パッドのケージの一部であることを確認します。これは、低体温を防止し、同時に実現彼女が望む場合、熱から離れて移動するダムです。次に、動物の年齢に適した針ゲージを選択します。リコール、針のゲージ;針の長さは、頭蓋内注入時に針の深さを制御するために使用ボリューム管理. の動物の種と年齢によって異なります。

ガードを使用して長さを調整します。このガードを準備、そのキャップに対して正しい針を測定し、印を作りなさい。次に、削減されるを示すキャップに 2 番目のマークを付けます。2 つのマーク間の距離は必要な針の長さです。その後、かみそりの刃でキャップをカットします。彼らは、キャップを粉砕、クリーン レベルのカットは生成されません、はさみを使用しないでください。これは「ニードル ガード」滅菌は、もはやとして、ガードを作成に使用される針を処分、ガードに新しい針を挿入し、代わりに適切な長さがさらされていることを確認します。次に、適切な注射器に接続されている別の針を使用して、注入物質を描画します。別の針はストッパーに配置されますこれらの極細針を鈍い大幅頭蓋内管理用に理想的ではないためこれを行うにです。その後、警備隊と針に満たされた注射器を配置します。今システムでは注射の準備ができて。

子犬の 10 日間は、吸入麻酔を管理します。10 日未満の子犬を麻酔しない必要があります。

注射を行うには、まず目の後ろと頭蓋骨の正中線から約 3 mm 5 mm であるサイトを探します。次に、針ガードで可能深さに針を挿入します。その後、脳への外傷を避けるために遅い着実な方法で挿入します。すぐに、脳組織の損傷を防ぐために細心の注意を針を抜きます。最後に、適切な回復を可能にダムで裏では動物を配置します。

今管理のこれらの珍しいルートを利用する今日のラボで行われているいくつかの実験を見てみましょう。

皮内注射は皮膚の炎症性反応を研究するよく使用されます。この実験では、研究者は片方の耳にアレルゲンと前感作マウスの反対側の耳に中立的な物質を注入するのにこのメソッドを使用します。次に、彼らはアレルゲンを注入による血管透過性の変化を検討するための動物の循環系に青い色素を配信しました。

前述したように、鼻腔内投与のアプリケーションの 1 つのワクチンを管理することです。ここでは、科学者は野生型とトランスジェニック マウス T 細胞の特定の種類の生産を介して学んだ粘膜免疫遺伝子組み換え、生きている弱毒インフルエンザ ワクチンを提供するのにこのルートを使用しました。

最後に、これらの生物医学の研究は、人間の脳腫瘍モデルを作成するために、免疫不全マウスにがん細胞を移植するのに頭蓋内管理を使用しました。注射の効果、インビボ イメージング システムを使用して調べた。

あなたは化合物投与実験用マウスおよびラットの特別なメソッドのいくつかのジュースを見たゼウスのビデオを持っています。これらの手順が役に立つ、考慮事項の前に心に留めておいてくださいし、管理に動物の健康に影響を最小限があるこれらのテクニックとことを確認する重要な手続きの手順の実行中を今理解する必要があり、収集する実験データ。いつも見てくれてありがとう!

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